Misin del programa: La formacin de profesionales qumicos que lideren el desarrollo, potencien la

investigacin y apoyen el aprovechamiento de los recursos naturales del entorno mediante procesos cientficos
y tecnolgicos.

UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS, Escuela de Ciencias Qumicas.
Laboratorio de Bioqumica I

Compilador: Anglica Mara Garca T

3. PREPARACIN DE SOLUCIONES BUFFER O AMORTIGUADORAS

Material a traer por parte del estudiante (por grupo de laboratorio):
1 frasco de vidrio preferiblemente de 50 mL de capacidad, Cinta o marcador para rotular,
CALCULADORA, guantes, tapabocas, gafas de proteccin, jabn, toalla (2, una para uso personal y
otra para el trabajo prctico), jabn personal y jabn para lavado de material de vidrio, gotero.

MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales: Matraces volumtricos de 25 o 50 mL (3), vasos de precipitado de 100 mL, embudo
pequeo, varilla agitadora, esptula, probeta de 100 mL, pipetas de 5 y 10 mL, peras de succin,
pH-metro, papel indicador.
Reactivos: Acetato de sodio, cido actico, carbonato de sodio, bicarbonato de sodio, hidrxido de
amonio, cloruro de amonio, fosfato dicido de potasio, fosfato acido de sodio, cido clorhdrico
concentrado, amoniaco.
CONSULTA NECESARIA PREVIA A LA PRCTICA (quiz escrito)
1. Cmo se define una solucin buffer, cmo se prepara una solucin buffer (cite un ejemplo.
2. De ejemplos de soluciones amortiguadoras que se utilizan en bioqumica.
3. Cules son los sistemas de amortiguacin ms importantes en los seres vivos, explique
brevemente cada uno de ellos.
4. Cules son los criterios que se deben tener en cuenta para preparar un buen amortiguador para
una reaccin bioqumica.
PROCEDIMIENTO
1. Solucin Amortiguadora de acetatos:
Preparar 25 mL de solucin buffer de concentracin en cido actico de 0.30M y con un pH =5.0,
usando cido actico (CH3COOH) y acetato de sodio (CH3COONa). El valor de pKa = 4.74
Determinar la cantidad de reactivo y pesar en la balanza, determinar el volumen de cido,
disolver la sal en un vaso de precipitado, llevar ambas soluciones a un mismo baln aforado de
25 mL, completar a volumen con agua destilada y homogenizar, marcar el baln. Densidad del
cido Actico = 1.05 g/mL.
Tomar un volumen de solucin y hallar el pH
A un volumen de 5 mL de la correspondiente solucin adicionarle 1 gotas de cido clorhdrico
concentrado, agitar y determinar el pH.
A otros 5 mL de la correspondiente solucin adicionarle 1 gotas de amoniaco, agitar y determinar
el pH.
Guarde y rotule la solucin buffer sobrante para utilizarla en los prximos laboratorios

2. Solucin amortiguadora de carbonatos:

Preparar 25 mL de solucin buffer de concentracin de 0.5 M en carbonato de sodio y con un pH
= 10, usando carbonato de sodio (Na2CO3) y bicarbonato de sodio (NaHCO3). El valor de pKa2 =
10.26
Determinar la cantidad de reactivo y pesar en la balanza, disolver cada reactivo en vasos de
precipitado separados, llevar ambas soluciones a un mismo baln aforado de 25mL, completar a
volumen con agua destilada y homogenizar, marcar el baln.
Tomar un volumen de solucin y hallar el pH.
A un volumen de 5 mL de la correspondiente solucin adicionarle 1 gotas de cido clorhdrico
concentrado, agitar y determinar el pH.
A otros 5 mL de la correspondiente solucin adicionarle 1 gotas de amoniaco, agitar y determinar
el pH.
Guarde y rotule la solucin buffer sobrante para utilizarla en los prximos laboratorios
3. Solucin amortiguadora de amonio:
Preparar 25mL de solucin buffer de concentracin de 0.20M en hidrxido de amonio y con un
pH = 10, usando hidrxido de amonio (NH4OH) y cloruro de amonio (NH4Cl). El valor de pKa =
9.26
Determinar la cantidad de reactivo y pesar en la balanza, determinar el volumen de hidrxido,
disolver el cloruro de amonio en un vaso de precipitado, llevar ambas soluciones a un mismo
baln aforado de 25 mL, completar a volumen con agua destilada y homogenizar, marcar el
baln.
Tomar un volumen de solucin y hallar el pH.
A un volumen de 5 ml de la correspondiente solucin adicionarle 1 gotas de cido clorhdrico
concentrado, agitar y determinar el pH.
A otros 5 ml de la correspondiente solucin adicionarle 1 gotas de amoniaco, agitar y determinar
el pH.
Guarde y rotule la solucin buffer sobrante para utilizarla en los prximos laboratorios
4. Solucin amortiguadora de fosfatos:
Preparar 25mL de solucin buffer de concentracin de 0.20M en fosfatos y con un pH = 7.5,
usando fosfato dicido de potasio (KH2PO4) y fosfato cido de sodio (Na2HPO4). El valor de pKa =
7.21
Determinar la cantidad de cada reactivo y pesar en la balanza, disolver cada una por separado en
vasos de precipitados con 8 mL de agua destilada, llevar ambas soluciones a un mismo baln
aforado de 25 mL, completar a volumen con agua destilada y homogenizar, marcar el baln.
Tomar un volumen de solucin y hallar el pH.
A un volumen de 5 ml de la correspondiente solucin adicionarle 1 gotas de cido clorhdrico
concentrado, agitar y determinar el pH.
A otros 5 ml de la correspondiente solucin adicionarle 1 gotas de amoniaco, agitar y determinar
el pH.
Guarde y rotule la solucin buffer sobrante para utilizarla en los prximos laboratorios
5. Tomar 5 mL de agua y hallar el pH, adicione 1 gota de cido clorhdrico
concentrado, agite y determine nuevamente el pH.
6. A otros 5 mL de agua, adicione 1 gota de amoniaco, agite y determine el pH
RESULTADOS
Presente sus resultados de la forma ms clara posible apoyndose en el uso de tablas, grficos, etc.

NO OLVIDE ENTREGAR COPIA DE LA HOJA DE RESULTADOS AL PROFESOR.

TEMAS A INCLUIR DENTRO DE LOS RESULTADOS Y SU DISCUSIN EN EL INFORME

1. Clculos para la preparacin de las soluciones amortiguadoras
2. Ecuacin de Henderson-Hasselbalch para cada solucin amortiguadora
3. Equilibrios para cada solucin amortiguadora
4. Cul de las soluciones amortiguadoras utilizadas es la ms efectiva, explique su respuesta.

BIBLIOGRAFA
La presente prctica fue diseada tomando como pauta base:
VARIOS AUTORES. 2010. Prcticas de Laboratorio de Bioqumica para Ingeniera Agronmica.
Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia, Facultad de Ciencias, escuela de Qumica, Tunja,
Colombia.
CANO, H. 2008. Manual de Laboratorio de Bioqumica. Universidad Industrial de Santander, Facultad
de Ciencias, Escuela de Qumica, Bucaramanga, Colombia.
MIGUEZ, J.B.1997. Prcticas de bioqumica. Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia,
Facultad de Ciencias, escuela de Qumica, Tunja, Colombia.
Textos de apoyo:
LEHNINGER, A., NELSON; D.; COX, M. 2004. Lehninger Principles of Biochemistry. Macmillan
Higher Education, 4a ed.
VOET, D., VOET, J. 2002. Biochemistry. Wiley & Sons. 2 ed. Canada.
BOHINSKI, R.C. 1991. Bioqumica. Addison-Wesley-Longman, 5 ed. Mxico D.F. Mxico.
GARZON, G. 2000. Fundamentos de Qumica General. Editorial McGraw Hil.
CAMPBELL, M. y FARREL, S. 2004. Bioqumica. Editorial Thomson. Mxico.
PACHECO, D. 2005. Bioqumica Medica. Editorial Limusa. Mxico.

Visin del programa: El programa de qumica de la UPTC para el ao 2019 se proyecta en el mbito nacional
como uno de los lderes en la gestin y desarrollo de procesos de investigacin, apropiacin, adaptacin e
innovacin de ciencia y tecnologa en qumica.

UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA

PROGRAMAS DE QUMICA Y QUMICA DE ALIMENTOS
LABORATORIO BIOQUMICA I
HOJA DE RESULTADOS

3. PREPARACIN DE SOLUCIONES BUFFER O AMORTIGUADORAS

Nombres:___________________________________________________________________
Seccin/grupo: ________________

1. Soluciones amortiguadoras
Buffer
Masa (g) o volumen (mL) del
cido no disociado
Masa (g) o volumen (mL) de la
base conjugada
Concentracin del buffer
pH esperado
pH obtenido
pH al adicionarle HCl
pH al adicionarle amoniaco

2. Observaciones adicionales:

acetatos

carbonatos

amonio

fosfatos