Tinciones

microbiolgicas

Tincin de Gram
Tincin diferencial que permite la clasificacin de bacterias.

Basada en las diferencias en la pared celular bacteriana.

Pasos para realizar la tincin de Gram

1.

Realizar frote y fijar al la llama.

2.

Cubrir con cristal violeta durante 1 minuto.

3.

Lavar con agua.

4.

Cubrir con lugol durante 1 minuto.

5.

Lavar con agua.

6.

Decolorar con alcohol-acetona.

7.

Lavar con agua.

8.

Cubrir con safranina durante 1 minuto.

9.

Lavar con agua.

Diferenciacin de bacterias por tincin

de Gram

Preparacin de colorantes
Solucin A
Cristal violeta
Alcohol etlico al 95%

Preparacin
2g
20mL

1. Disuelva el cristal violeta en el alcohol etlico.

2. Disuelva el oxalato de amonio en agua
destilada.
3. Mezcle la solucin A y B

Solucin B
Oxalato de amonio

0.8g

Agua destilada

80mL

4. Filtrar 24 horas despus.

Preparacin de colorantes
Solucin Stock

Preparacin

Safranina

0.5g

1. Disuelva la safranina en el alcohol etlico.

Alcohol etlico al 95%

100mL

2. Para la solucin de trabajo realice una

dilucin 1:10.

Solucin de trabajo
Solucin Stock

10mL

Agua destilada

90mL

Preparacin de colorantes
Solucin de trabajo

Preparacin

Acetona

10mL

1. Mezcle los reactivo.

Alcohol etlico al 95%

20mL

2. Conserve fuera del alcance de la luz del sol.

Lugol

Preparacin

Yodo sublimado (cristales)

1g

Yoduro de potasio

2g

Agua destilada

300mL

1. Combinar el yodo y el yoduro de potasio en un

mortero
2. Lavar con pequeas alcuotas de agua destilada
3. Aforar a 300mL. Agitar fuertemente.

4. Almacenar en botella oscura con tapn de

vidrio.

Tincin de Ziehl Neelsen

Permite la tincin de bacterias cido alcohol
resistentes.
M. tuberculosis

Estndar de oro para el diagnstico de

tuberculosis.

Tincin en caliente
Calor facilita la penetracin del colorante a travs
de la pared celular

Pasos para la tincin de Ziehl

Neelsen
1. Realizar frote y fijar a la llama.
2. Cubrir con carbol fucsina durante 5 minutos.

3. Lavar con agua.

4. Decolorar con alcohol cido durante 1 minuto.
5. Lavar con agua.
6. Cubrir con azul de metileno durante 30 segundos.
7. Lavar con agua.

Ziehl Neelsen modificado

Tincin de Kinyoun
Tincin en fro
Alta cantidad de fenol en el reactivo disuelve los lpidos de la pared celular permitiendo la penetracin del
colorante.

Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Fijar al calor el frote

Cubrir con carbolfucsina durante 5 minutos
Lavar con agua
Decolorar con alcohol cido durante 3 minutos
Lavar con agua
Cubrir con azul de metileno de 3-4 minutos
Lavar, secar y examinar

Preparacin de colorantes
Alcohol cido
cido clorhdrico concentrado
Alcohol etlico al 95%

Preparacin
3mL
100mL

1. Mezclar los reactivos y guardar en frasco

oscuro.

Preparacin

Carbolfucsina (Kinyoun)
Fucsina bsica

4g

Alcohol etlico al 95%

20mL

Fenol

0.8g

Agua destilada

100mL

1. Disuelva la fucsina en alcohol etlico.

2. Disuelva el fenol en agua destilada.
3. Mezcle las dos soluciones

4. Guardar en frasco oscuro.

Preparacin de colorantes
Azul de metileno

Preparacin

Azul de metileno

0.30mg

1. Mezclar los reactivos.

Agua destilada

100mL

2. Guardar en frasco de vidrio tapado.

3. Filtrar a las 24 horas.

Carbolfucsina (Ziehl Neelsen)

Preparacin

Solucin A
Fucsina bsica
Alcohol etlico al 95%
Solucin B
Fenol
Agua destilada

1. Disuelva la fucsina en alcohol por trituracin

dentro de un mortero.

3g
20mL
3g
95mL

2. Disuelva el fenol en agua destilada

3. Mezclar 10mL de solucin A por cada 90mL
de solucin B

Tincin de cpsula
Cpsula formada por sustancias
mucilaginosas
Carbohidratos
Polmeros de glucosa, galactosa, fructosa, cido
urnico y aminoazcares
Polipptidos

Tincin en negativo
Tinta china

Tincin de cpsula
Criptococcus neoformans

Tincin de cpsula
Procedimiento COLORACIN CON TITNTA CHINA
1. Colocar una gota de tinta china en el extremo de un portaobjetos y mezclar con un asa una
colonia.
2. Extender la suspensin y dejar secar al aire.
3. Fijar con calor.

4. Cubrir la preparacin con cristal violeta al 1% durante 5 minutos.

5. Lavar con agua y dejar secar al aire.

Tincin de cpsula
Procedimiento PREPARACIN EN FRESCO

1. Colocar una gota de tinta china en un portaobjetos y agregar con un asa una
colonia.
2. Mezclar.

3. Colocar un cubreobjetos.
4. Observar al microscopio.

Tincin de flagelos
Preparacin de portaobjetos

Portaobjetos nuevos
Lavar con agua y etanol al 95%
Pasar los portaobjetos sobre la llama del mechero
Calentar lentamente

Utilizar cultivos de 18-22 horas en medio sin carbohidratos

Colocar una gota de agua destilada en el centro del
portaobjetos
Colocar una colonia en la gota de agua
Cubrir con cubreobjetos y examinar si hay movilidad

Tincin de flagelos
Si hay movilidad, dejar reposar de 5-15
minutos
Permite que se adhieran las bacterias

Colocar dos gotas de colorante de RYU en

un esquina y permitir que penetre por
capilaridad
Dejar reposar de 5-15 minutos

Las bacterias y flagelos se tienen de azul

oscuro a negro con un fondo celeste.

Preparacin de colorantes (RYU)

Solucin I mordiente
Fenol 5% (solucin acuosa)
cido tnico
Solucin saturada de sulfato de aluminio y potasio saturado con 12H2O

10mL
2g
10mL

Solucin II colorante
Cristal violeta

12g

Etanol al 95%

100mL

Procedimiento
Mezclar una parte de solucin II con 10 partes de solucin I.
Filtrar y guardar en botella plstica a temperatura ambiente.
Si no se utiliza pronto agregar fenol al 0.2% para evitar el crecimiento de hongos.

Preparacin de colorantes (Leifson)

Colorante de Leifson
Disolucin acuosa saturada de AlK(SO4)2 *12H2O

20mL

Disolucin acuosa al 20% de cido tnico

10mL

Agua destilada

40mL

Alcohol etlico al 95%

15mL

Disolucin saturada en alcohol etlico al 95% de fuscina bsica

3mL

Preparacin
1. Mezclar los reactivos en el orden citado.
2. Guardar en frascos bien tapados.

Tincin de esporas
Esporas son estructuras de resistencia
Formadas por sales de calcio de cido dipicolnico
Esporulacin: mecanismo de resistencia
Requieren de aplicacin de calor para que el colorante penetre en la estructura.

Tincin de esporas
Procedimiento MTODO DE WIRTZ-CONKLIN
1.

Preparar un frotis y fijar a la llama.

2.

Cubrir con verde de malaquita y calentar hasta la emisin

de vapores durante 5-10 min. EVITAR EBULLICIN. Si se
deshidrata la lmina agregar ms colorante.

3.

Lavar la lmina con agua durante 30 segundos.

4.

Cubrir con safranina durante 30 segundos.

5.

Lavar con agua.

Tincin de esporas
Preparacin BARTHOLOME Y MITTMER
1.

Preparar un frote y fijar a la llama 20 veces.

2.

Teir con verde de malaquita en solucin acuosa

saturada al 7.6% durante 10 minutos.

3.

Lavar con agua.

4.

Teir por 15 segundos con solucin acuosa e

safranina al 0.25%.

5.

Lavar con agua.

Preparacin de colorantes
Verde de malaquita (Bartholome y Mittmer)

Preparacin

Verde de malaquita

7.6g

1. Disolver el verde de malaquita en el agua.

Agua destilada

100mL

2. Filtrar luego de 24 horas de reposo.

Verde de malaquita (Wirtz-Conklin)

Preparacin

Verde de malaquita

5.0g

1.

Disolver el verde de malaquita en agua.

Agua destilada

100mL

2.

Filtrar luego de 24 horas de reposo.

Tincin de grnulos metacromticos

Depsitos de materiales de reserva
Grnulos de volutina
Polimetafosfato

Pronunciado en clulas adultas.

Tincin de grnulos metacromticos

Procedimiento
1. Preparar un frote y fijarlo a la llama.
2. Cubrir con azul de metileno durante 5 minutos.
3. Lavar con agua del chorro.

Procedimiento
1. Preparar un frote y fijarlo a la llama.
2. Cubrir con colorante de Albert por un minuto. NO LAVAR
3. Cubrir con lugol de Albert por 5 minutos. Lavar ligeramente.

Preparacin de colorantes
Colorante de Albert

Preparacin

Azul de toluidina

0.15g

1.

Disolver el cido actico en agua destilada.

Verde de malaquita

0.20g

2.

cido actico glacial

1.0mL

Disolver el azul de toluidina y verde de

malaquita en alcohol en un mortero.

Alcohol etlico al 95%

2.0mL

3.

Agregar cido actico y mezclar.

Agua destilada

100mL

Lugol de Albert
Yoduro de potasio

3.0g

Yodo sublimado

2.0g

Agua destilada

300mL

Preparacin
1.

Disolver el yoduro en 5mL de agua, agregar el

yodo y disolver por agitacin.

2.

Aforar a 300mL de agua y agitar vigorosamente