INFORME DE LABORATORIO

PRCTICA 3
DETERMINACIN DE BENZODIACEPINAS TRANQUILIZANTES
MENORES

Cristian Alexander Guzmn Santofimio.

Cristian Alberto Triana Basabe.
Andrea Vivian Ortegn Vergara
Liseth Katherine Velsquez Martnez

Docente
Edgar Hernn Beltrn

UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
TOXICOLOGIA LABORATORIO
BOGOT D.C
2010

OBJETIVOS
Determinar la presencia de tranquilizantes menores, especficamente de
Benzodiacepinas (Lorazepam) en la muestra biolgica adecuada para
esta prueba.
Objetivos especficos
1. Comprender la estructura qumica de las Benzodiacepinas y el
efecto causante en el organismo, despus de su administracin, su
mecanismo de accin, metabolizacin y forma de excrecin.
2. Describir
el
uso
benzodiacepinas.

farmacolgico

teraputico

de

las

3. Conocer el fundamento y aplicar la tcnica de Cromatografa en

Capa Fina para la determinacin de benzodiacepinas (Lorazepam)
en Orina.

MARCO TERICO PRE-LABORATORIO

BENZODIACEPIN

Grupo de frmacos que producen enlentecimiento de las funciones nerviosas, por lo que producen
relajacin o sensacin de calma. Se utilizan para tratar cuadros de pnico, contracturas
musculares, sntomas de nerviosismo, insomnio, ansiedad, y convulsiones.
ESTRUCTURA: Las
benzodiacepinas
estn compuestas
por un anillo
bencnico (A) unido
a un anillo
diazepinico (B).

EFECTOS
FARMACOLOGICOS

MECANISMOS
DE ACCION

Las BZ son agentes GABA

agonistas indirectos (GABA:
cido gamma amino butrico)
es decir que potencian o
amplifican la neurotransmisin
gabargica inhibitoria.

Que las BZ necesitan una

transmisin gabargica (sin
inhibidores) intacta para
producir sus acciones
farmacolgicas

El GABA es el
neurotransmisor
inhibitorio ms importante
del SNC de los
mamferos y se estima
que entre el 30 y 50% de
las sinapsis del cerebro

estn
mediados por
la
activacin de subtipos de
receptores tipo A del GABA,
requirindose la activacin de
receptores que contengan la
subunidad 1 para conseguir
el efecto sedante, mientras
que la accin ansioltica
estar
mediada
por
receptores que contengan la
subunidad 2, pero no por
receptores que contengan la

Las BZD clsicas interaccionan

de forma indiscriminada con
todos los tipos de receptores, por
lo que cabe esperar de ellas todo
el abanico de efectos.

FARMACOCINETICA DE LAS BENZODIACEPINAS

ABSORCI

Se absorben rpido y completamente por va oral, salvo el clorazepato que es una

DISTRIBUCI
N

prodroga y se descarboxila rpidamente en el jugo gstrico a Ndesmetildiazepam (o

nordiazepam) y luego se absorbe por completo. El midazolam es el compuesto ms
liposoluble y el flumazenil el menos liposoluble. La absorcin por va i.m. es irregular, en
caso de ser necesaria la va parenteral, la de eleccin es la i.v. Generalmente, el solvente
que poseen es el polietilenglicol, es un polialcohol muy irritante que hace precipitar la BZ
en el tejido muscular y por lo tanto se absorbe mal la droga.
Cuando se administran por va oral a los 30minutos aparecen los efectos ansiolticos o
hipnticos.
Las BZ son transportadas por la circulacin sistmica a la circulacin cerebral capilar, estos
agentes tienen alto grado de unin a protenas plasmticas 80-95%, albmina
principalmente y debido a su escasa fraccin libre pasan poco al lquido cefalorraqudeo.
Son muy lipoflicas, el comienzo de accin despus de una dosis oral refleja el grado de
absorcin gastrointestinal (aproximadamente 30 min.); la duracin de accin demuestra el
porcentaje de distribucin en tejidos perifricos, el grado de unin a protenas plasmticas
y el porcentaje de aclaramiento y eliminacin.

BIOTRANSFORMACI
N

ELIMINACI
N

Solo la fraccin libre es farmacolgicamente activa y es la que difunde a travs de las

membranas biolgicas. La alta unin a protenas plasmticas tambin influencia en la
cantidad de droga captada por el cerebro, as la concentracin de droga libre en plasma
refleja la concentracin cerebral. El volumen de distribucin aparente es amplio (1-2
litros/kg), debido a que estas drogas luego de concentrarse en el cerebro sufren una
redistribucin tisular perifrica sobre todo en lpidos y msculo.
En general las BZ son metabolizadas primariamente por enzimas microsomales hepticas,
sufriendo oxidacin microsomal (fase I) y luego glucuronoconjugacin (fase II). A diferencia
de los barbitricos no son potentes inductores enzimticos hepticos. La mayora de las BZ
deben ser primero oxidadas (metabolitos activos, fase I) y luego conjugadas (metabolitos
inactivos, fase II). Los metabolitos oxidados son activos y pueden ligarse o unirse al
receptor de BZ (aunque en general poseen menos actividad que la droga madre).
La eliminacin se realiza por filtracin y secrecin tubular principalmente metabolitos
glucuronoconjugados y en menor cantidad los oxidados.

EFECTOS SECUNDARIOS
El perfil toxicolgico de las benzodiacepinas ansiolticas es muy parecido, aunque la frecuencia y
gravedad de las reacciones puede variar de unas a otras. En la mayor parte de los casos, las
reacciones adversas son una prolongacin de la accin farmacolgica y afecta al SNC.
Aproximadamente la mitad de los pacientes presentan en mayor o menor grado somnolencia
durante los primeros das de tratamiento. Frecuentemente aparece: sedacin, somnolencia,
ataxia. Ocasionalmente: mareos, sedacin, cefalea, depresin, desorientacin, disfasia o
disartria (alteracin del lenguaje), temblor, cambios en la libido, alteraciones urinarias, diarrea o
estreimiento. Excepcionalmente: hepatitis, ictericia, dermatitis, urticaria, prurito, discrasias
sanguneas, alteraciones de la visin y audicin. Pueden producir incoordinacin motora con
riesgo de cada, amnesia antergrada (dificultad para recordar hechos recientes) y dificultad de
concentracin.
La intensidad de los efectos depende de las dosis utilizadas y son ms importantes en personas
con alteraciones hepticas y en ancianos porque al disminuir su metabolismo aumenta mucho su
semivida plasmtica.
CONTRAINDICACIONES: estn contraindicadas (teratognicas, pueden producir sndrome de
abstinencia neonatal) en el embarazo y lactancia (pasan por la leche materna). Tambin en la
hipersensibilidad a la droga, en el glaucoma de ngulo estrecho (medicado o no) y en pacientes
con glaucoma en ngulo abierto no medicado. En los ancianos debe disminuirse la dosis a la
mitad. Los ancianos, son ms susceptibles a los efectos depresores y pueden presentar adems
sndrome paradojal y sndrome confusional. Puede prolongarse la vida media y producirse
acumulacin. En la insuficiencia heptica, puede haber acumulacin de BZ. Los pacientes con
insuficiencia renal son ms sensibles a los efectos depresores del SNC. En el asma severa,
enfermedad pulmonar obstructiva crnica, debido al peligro de producir apneas nocturnas y por la
relajacin muscular que producen las BZ podra disminuirse la capacidad ventilatoria. -En

pacientes con porfiria se puede producir un ataque agudo. La miastenia es otra contraindicacin
de las BZ, debido al efecto miorrelajante que producen.
TOXICOLOGIA
Las BZ poseen amplio margen teraputico es decir que la dosis efectiva 50 y la dosis letal 50
estn muy distanciadas una de otra. Es por eso que una sobredosis de Bz (pura, no con otros
depresores) como intento de suicidio, por ejemplo, raramente es mortal y cuando lo es
seguramente la BZ se asoci a otra droga (ejemplo: alcohol). En casos de intoxicacin aguda
mantener libres las vas areas, monitorear signos vitales y administrar el antagonista flumazenil.
USOS TERAPEUTICOS
Las BZ son agentes sintomticos y solos son tiles en tratamientos a corto plazo debido al
desarrollo de tolerancia de sus acciones farmacolgicas (EJ: efecto hipnotico). Estn indicadas en
enfermedades orgnicas donde la ansiedad es un componente (lcera, neurodermitis) o
importante factor etiolgico como las alteraciones psiconeurticas que cursan con ansiedad,
insomnio, tensin emocional. En alteraciones neuromusculares se comprob que el diazepam es
superior a cualquier otro relajante muscular como por ejemplo cari soprodol, clormezanona,
baclofeno. Tambin alivia las contracturas musculares, el dolor discal de las lesiones de la
columna y tambin el ttanos. En la abstinencia alcohlica aguda, el diazepam es el agente de
eleccin ya que controla el insomnio y la agitacin. Tambin son tiles para evitar o controlar el
sndrome de abstinencia alcohlica (delirium tremens). Las BZ son tiles en todo tipo de
convulsiones, en la medicacin preanestsica y en anestesiologa combinadas con otros agentes
(midazolam+ fentanilo por ejemplo). Estn indicadas en el insomnio sobre todo cuando es debido
a mioclonos, o secundario a otra medicacin o en el insomnio por dolor o stress (cambio de
trabajo, fallecimiento de un ser querido, etc). El triazolam se prefiere en pacientes que les cuesta
conciliar el sueo, por su accin rpida y vida media corta (5 horas) evitando el efecto residual
matinal. El flunitrazepam, flurazepam y nitrazepam poseen accin prolongada, producen sedacin
matinal, pero no insomnio rebote.
TECNICAS DE DETERMINACION
Existen tres grandes grupos de tcnicas analticas: las inmunolgicas, las cromatogrficas y las
colorimtricas. Estas ltimas comprenden un gran nmero de reacciones qumicas llevadas a
cabo sobre la muestra con reactivos relativamente asequibles (por ejemplo la de Trinder para
salicilatos, Fujiwara para hidrocarburos halogenados) y si bien han prestado y prestan un gran
servicio a la toxicologa de urgencia y de recursos limitados su baja especifidad y sensibilidad no
permite recomendarlas para esta determinacin.
Las tcnicas inmunolgicas se basan en la reaccin antgeno-anticuerpo y comprenden el
mismo conjunto
de
tcnicas
empleadas
en qumica clnica,
especialmente
los
enzimoinmunoensayos competitivos. Muchos psicofrmacos pueden realizarse por polarizacin de
fluorescencia (FPIA) y multiplicacin enzimtica (EMIT) y existen casettes con anticuerpos para
los grupos de drogas usualmente encontrados en comas o accidentes (benzodiacepinas,
antidepresivos tricclicos, opiodes, cannabinoides, cocana...).
Las tcnicas cromatogrficas, por otra parte, se basan en la distinta solubilidad de los
componentes de una muestra frente a una fase mvil y permiten la separacin de todos esos
componentes para su posterior identificacin. Contrariamente a las tcnicas anteriores el primer
paso es una preparacin o clean up de la muestra, que tiene por objeto a la vez concentrar las
sustancias buscadas y eliminar las interferencias producidas por otros componentes de la orina

PROCEDIMIENTO
Se false la Muestra, se realiz una hidrlisis cida, una extraccin lquido-lquido y
finalmente se procedi a realizar la cromatografa en capa fina para determinar
benzodiacepinas en una muestra de Orina

delinear los carriles

Llenar por c

para que el eluyente suba por capilaridad de 15-20 minu

RESULTADOS
Para la determinacin de benzodiacepinas en orina, se utiliz el mtodo de
cromatografa en capa fina. All la muestra de orina se false con la adicin de
8 gotas de Ativn. Este procedimiento, se realiz con el fin de que nuestra
muestra sea positiva para benzodiacepinas partiendo del supuesto de que era
completamente libre de estas inicialmente.
Despus de la adicin del Ativn, se realiza el protocolo de la cromatografa en
capa fina con sus correspondientes reactivos. La ltima parte de este mtodo,
requiere de un eluyente compuesto por tolueno 20: 1 acetona.
Finalmente, se adicionan a la placa por medio de un frasco aspersor, nitrito de
sodio (NaNO2) ms NEDA (Neftilendiamina) con el fin de observar manchas o
complejos de color morado-rosado, lo que indica que es positivo para
benzodiacepinas. El resultado que obtuvimos fue negativo a pesar de que se
falseo la muestra.

RF= Distancia recorrida por la muestra

Distancia recorrida por el solvente

RF=___1___ = 0.14285714
7

ANLISIS DE RESULTADOS
En la obtencin de resultados se tuvieron algunos problemas. Las muestras
mayormente no mostraron resultados positivos o no de manera muy clara,
como se deba esperar y para esto se determinaron dos posibles causas:
Es factible que se agregara muy baja proporcin de ativn (benzodiacepina
patrn) a la muestra inicial, por lo que los resultados no fueron muy claros.
Tambin es factible que el problema estuviera en el revelado de la placa, sea
por que los reactivos (NEDA y Nitrito de Sodio) estuvieran contaminados o
alterados de alguna manera; o porque la cantidad dispersada sobre la placa no
fue la adecuada.

El resultado del RF se tom en base a los resultados de la mesa 3, en la cual el

frente de corrido fue igual a 7 cm y la distancia recorrida por el analito fue de
1 cm. El RF es especfico para cada analito y para la fase mvil.
CONCLUSIONES
Los
medicamentos
benzodiacepinas
poseen
importantes
acciones
farmacolgicas, propiedades toxicolgicas y aplicaciones teraputicas como
anestsicos, anticonvulsivantes, sedantes, ansioltico, hipnticos y relajantes
musculares. Actuando en gran medida sobre el sistema nervioso central.
La cromatografa de capa delgada corresponde a un sistema analtico que
permite separar los diferentes componentes de una muestra problema, con el
fin de identificarlos y/o cuantificarlos.
Debido a las propiedades toxicolgicas de las benzodiacepinas, es de gran
importancia saber realizar las tcnicas para la determinacin de esta en la
muestra biolgica mas adecuada, en este caso la orina, debido a su
metabolizacin; ya que en toxicologa de urgencias se reportan casos de
intoxicacin por este frmaco cuando es administrado en uso delictivo.
AUTOEVALUACIN
LOGROObjetivos
cumplidos
SI

NO

FORTALEZAS

DEBILIDADES

SUGERENCIAS A
CADA DEBILIDAD.

Dominio de los
conceptos bsicos
utilizados en
toxicologa y
diferenciacin
entre los
tranquilizantes
menores y
tranquilizantes
mayores.

Mala distribucin
del tiempo
durante la
prctica al
procesar la
muestra para
determinacin de
benzodiacepinas.

Reorganizacin del
material de trabajo
aplicando el
adecuado
procedimiento para
cualquier
determinacin.

BIBLIOGRAFA
Documentos web disponibles en:
o
o
o
o
o

http://www.minsa.gob.ni/enfermeria/doc_inter/benzodiacepinas.pdf
http://www.portalfarma.com/pfarma/taxonomia/general/gp000042.nsf/voDocum
entos/66FD0F16FCE04F02C125725D003A8CC8/$File/DOSSIER
%20BENZODIAZEPINAS.pdf
http://med.unne.edu.ar/catedras/farmacologia/temas_farma/volumen5/2_benzod
iaz.pdf
http://bernirey80.files.wordpress.com/2007/05/benzodiazepinas.pdf
http://www.sertox.com.ar/retel/n04/004.pdf