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AS FUNES VITAIS
BSICAS
EXPERIMENTO
1. Resumo
Este experimento proporciona a visualizao da mitose em clulas de razes de cebola ao microscpio ptico.
2. O experimento
2.1 Materiais
Razes novas de cebola (preparar uma semana antes da aula);
Soluo de orcena actica 1%;
Copos, potes de plstico, garrafa PET ou frasco de lcool cortados;
Palitos de dente;
Lminas;
Lamnulas,
Pinas;
Lmina de barbear;
Pipetas Pasteur ou conta-gotas;
Papel absorvente, papel toalha ou papel filtro;
Placa de Petri ou pires de material resistente ao calor;
Lamparina a lcool, vela, bico de Bunsen ou fogareiro;
Pina de madeira;
Microscpio ptico que proporcione uma ampliao total de pelo menos 100x;
leo de imerso.
3) Esperar de cinco a sete dias at as razes atingirem aproximadamente 2 cm. aconselhvel preparar uma cebola
para cada dois experimentos, pelo nmero de razes que crescem nesse perodo;
2.2 Procedimento
Sugerimos que esta atividade seja desenvolvida depois que voc j tiver trabalhado com os alunos o conceito de
ciclo celular, a importncia da intrfase e da mitose e a caracterizao das fases da mitose.
Antes de iniciar o experimento, retome os conceitos de clula e de diviso celular explorados em aulas anteriores.
Apresente o roteiro de trabalho antes da execuo do procedimento, apontando as questes de segurana, as dicas
importantes, bem como as tarefas e avaliaes dessa atividade.
A orcena actica um corante formado por orcena e cido actico. O cido actico um fixador que tem como
funo manter a integridade das estruturas celulares. A orcena cora os cromossomos, fazendo com que se destaquem
das outras estruturas, podendo ser facilmente identificados ao microscpio.
O meristema apical (Figura 9) o tecido da regio da ponta da raiz, responsvel pelo seu crescimento. Sendo assim, possui clulas com alto grau de diviso celular (mitose).
Verso: agosto 19, 2011 4:30 PM
3) Pegue as razes com uma pina de ponta fina, coloque-as sobre uma lmina limpa e seccione a regio do meristema, que representa um pedacinho de cerca de 2 a 3mm a partir do pice. Despreze o resto da estrutura;
Figura 13 : Retirada do excesso de corante .
Verso: agosto 19, 2011 4:30 PM
Segurana:
Certifique-se de que a lmina esteja sobre uma superfcie lisa. Irregularidades como a interface entre azulejos, por
exemplo, podem promover a quebra da lmina.
6) Cubra a lamnula com o papel absorvente e, cuidadosamente, pressione com o polegar at visualizar uma camada nica de clulas ao microscpio ptico.
Segurana:
Ao esmagar o pice da raiz entre a lmina e a lamnula, use a bancada como apoio (Figura 14).
Certifique-se de que a lmina esteja sobre uma superfcie lisa. Irregularidades como a interface entre azulejos, por
exemplo, podem promover a quebra da lmina.
7) Coloque a lmina no microscpio e visualize as clulas em diviso mittica. O aumento de 1000x proporciona
melhor visualizao.
O aumento calculado multiplicando-se o aumento da lente objetiva pelo aumento da lente ocular. Para objetivas,
a partir do aumento de 100x, dever ser usado leo de imerso.
O leo de imerso uma interface lquida que possui o mesmo ndice de refrao da objetiva. Ele deve ser usado
para a objetiva de 100x, pois far com que os raios luminosos no se dispersem ao atravessarem o conjunto lmina-leo, permitindo a entrada de um grande cone de luz na objetiva, o que melhora a visualizao do material.
Para uso do leo de imerso, pingue uma pequena gota do leo em cima da lamnula somente quando a for visualizar com a objetiva de 100x. Coloque a lmina no microscpio e posicione a objetiva. Sendo a maior lente, a objetiva
de 100x quase toca na lamnula.
Segurana:
Devido proximidade da objetiva de 100x com a lamnula, a focalizao do corte dever ser feita com muito
cuidado, dando preferncia focalizao fina, pois a lmina pode se romper caso a objetiva encoste nela. Encaixe
primeiro a objetiva de menor aumento e ajuste o foco. Depois passe para a objetiva seguinte, de maior aumento (use
leo de imerso para a objetiva de 100x).
Espera-se que as clulas estejam coradas, com os cromossomos destacados por uma colorao mais forte. Nem
todas as clulas da raiz estaro em mitose. Muitas estaro na intrfase, sendo necessrio que toda a extenso do
corte seja pesquisada.
Caso as clulas no apaream definidas ou caso estejam escuras ou sobrepostas, impedindo a visualizao de
imagens ntidas e claras, provvel que o corte da raiz tenha ficado muito grosso. Tente movimentar a lamnula,
girando-a um pouquinho enquanto a pressiona contra a lmina.
Se no encontrar clulas em mitose, prepare outra lmina, certificando-se de que seja utilizado um fragmento
situado a apenas 1 ou 2 mm do pice da raiz.
Voc pode mostrar esquemas das fases da mitose para discutir as imagens visualizadas e retomar o contedo. No
software Lminrio virtual 4 Diviso Celular, so encontrados cortes de cebola e de testculo de gafanhoto que podem ser utilizados para complemento da discusso.
De acordo com a disponibilidade de material (microscpio, lmina etc.), a classe pode ser dividida em grupos,
de modo que cada grupo deve se encarregar do preparo de uma lmina. Depois, os componentes dos grupos faro
as observaes ao microscpio. Caso a quantidade de material seja pequena, aconselhvel que voc, professor,
prepare a lmina, demonstrando todos os passos para que haja maior tempo para os alunos fazerem as observaes
ao microscpio.
Protocolo experimental
Materiais
Razes novas de cebola (preparar uma semana antes da aula);
Soluo de orcena actica 1%;
Copos, potes de plstico, garrafa PET ou frasco de lcool cortados;
Palitos de dente;
Lminas;
Lamnulas;
Pinas;
Lmina de barbear;
Pipetas Pasteur ou conta-gotas;
Papel absorvente, papel toalha ou papel filtro;
Placa de Petri ou pires de material resistente ao calor;
Lamparina a lcool, vela, bico de Bunsen ou fogareiro;
Pina de madeira;
Microscpio ptico que proporcione uma ampliao total de pelo menos 100x;
leo de imerso.
Procedimento
1. Corte trs ou quatro razes da cebola preparada previamente em tamanhos de 1 a 2 cm a partir da
regio apical e as transfira para uma placa de Petri, contendo orcena actica (corante);
2. Aquea a placa de Petri com uma lamparina a lcool at a emisso de vapores, sem deixar ferver;
3. Pegue as razes com uma pina de ponta fina, coloque-as sobre uma lmina limpa e seccione a regio
do meristema, que representa um pedacinho de cerca de 2 a 3 mm a partir do pice. Despreze o resto
da estrutura;
4. Pingue uma gota de orcena actica sobre o meristema seccionado e, com muito cuidado, cubra o
material com a lamnula;
Aumento:_____
(Se o trabalho estiver sendo realizado em grupo, procurar trs clulas em diferentes fases da mitose.
Desenhar cada uma delas).
9. Qual(is) fase(s) da mitose est(o) representada(s) e por qu?
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4. Referncias complementares
1. Animaes em Biologia Celular. Possui tpicos variados como DNA, mitose e meiose, apresentados atravs de
animaes computacionais.
MARQUES-SANTOS, L. F. Animaes em Biologia Celular. In: Biblioteca Digital de Cincias, 11. Fevereiro/2008.
Disponvel em: http://www.ib.unicamp.br/lte/bdc/visualizarMaterial.php?idMaterial=545.
Acesso em: 27/01/2009
2. Cuidados Bsicos com Microscpios pticos. Esta referncia informa medidas bsicas para conservao de
microscpio ptico; elas vo desde a simples limpeza de lentes at os cuidados com o armazenamento, transporte
e a troca de lmpadas.
MACEDO, A et al. Cuidados Bsicos com Microscpios pticos. In: Comunicado Tcnico, n 3. Novembro/1996.
Disponvel em: http://www.cnpdia.embrapa.br/publicacoes/download.php?file=CT03_96.pdf.
Acesso em:20/01/2009
3. Orcena e fibras elsticas. Artigo sobre a origem e a ao da orcena em tcnicas histolgicas.
BARCAT, J.A. Orcena y fibras elsticas. In: Medicina [Buenos Aires], vol. 63, n 5, p. 353-356. Setembro/outubro
de 2003.
Disponvel em: http://www.scielo.org.ar/scielo.php?pid=S0025-76802003000500015&script=sci_arttext.
Acesso em:20/02/2009
4. Exerccio online da Fundao Centro de Cincias e Educao Superior a Distncia do Estado do Rio de Janeiro (CECIERJ). Compara as diferenas entre as fases da mitose e da meiose.
Disponvel em: http://objetoseducacionais2.mec.gov.br/bitstream/mec/2950/1/exercicio_mitose_meiose.swf.
Acesso em: 15/05/2009
5. Animao da editora Mcgrall-Hill. Narrada em ingls (o som pode ser retirado), bastante didtica e autoexplicativa.
Disponvel em: http://highered.mcgraw-hill.com/olc/dl/120073/bio14.swf.
Acesso em: 15/05/2009
6. Video que mostra a mitose de uma clula animal.
Disponvel em: http://www.youtube.com/watch?v=s1ylUTbXyWU.
Acesso em: 15/05/2009
7. Vdeo que mostra a mitose de uma clula vegetal.
Disponvel em: http://www.youtube.com/watch?v=0oJZDKdperU.
Acesso em:15/05/2009
8. Animao grfica que mostra as fases da mitose do ponto de vista do interior da clula.
Disponvel em: http://www.youtube.com/watch?v=2WwIKdyBN_s.
Acesso em: 15/05/2009
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FICHA TCNICA
Universidade Estadual de Campinas
Reitor: Fernando Ferreira Costa.
Vice-reitor: Edgar Salvadori de Decca.
Pr-reitor de ps-graduao: Euclides de Mesquita Neto.
Instituto de Biologia
Diretora: Shirlei Maria Recco Pimentel.
Diretor Associado: Flavio Antonio Mas dos Santos.
EXECUO
Projeto EMBRIAO
Coordenao geral: Eduardo Galembeck.
Coordenao de Mdia - Audiovisuais: Eduardo Paiva.
Coordenao de Mdia - Software: Eduardo Galembeck.
Coordenao de Mdia - Experimentos: Helika A. Chikuchi, Marcelo J. de Moraes e Bayardo B. Torres.
Apoio Logstico/Administrativo: Eduardo K. Kimura, Gabriel G. Hornink, Juliana M. G. Geraldi.
OBJETO DE
APRENDIZAGEM
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Licena idntica a esta. Estas condies podem ser renunciadas, desde que se obtenha permisso
do autor. O no cumprimento desta licena acarretar nas penas previstas pela Lei n 9.610/98.
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