Los microorganismos para crecer y desarrollar sus actividades, deben disponer en el
ambiente de los nutrientes que le provean energa y materiales para la biosntesis. Los microorganismos presentan una gran diversidad fisiolgica especfica y por lo tanto requerimientos nutricionales especficos. No es casual, que las clulas de todos los seres vivos, independientemente de su grado de organizacin, presenten una composicin qumica constante de aquellos materiales necesarios para la vida. Composicin elemental aproximada en Escherichia coli (% del peso seco): Carbono 50%, Oxgeno 20%, Nitrgeno 14%, Hidrgeno 8%, Fsforo 3%, Azufre 1%, Potasio 1%, Sodio 1%, Calcio 0,5%, Magnesio 0,5%, Cloro 0,5%, Hierro 0,2%, Todos los dems 0,3% (Fuente: Stanier, Dourofoff, Adelberg, Microbiologa, 1977). Se puede observar que carbono, oxgeno y nitrgeno representan entre un 80 a 90% del peso total de este microorganismo. El 95 % del peso seco de la clula, contiene carbono, nitrgeno, fsforo y azufre, as como hidrgeno y oxgeno (que pueden derivarse metablicamente del agua). El porcentaje restante incluye una gran diversidad de elementos. La inmensa mayora de los seres vivos requieren adems, calcio, cinc, cobre, cobalto, hierro, manganeso, magnesio, molibdeno y potasio, entre otros micronutrientes. 1.- FACTORES ORGNICOS DE CRECIMIENTO Los compuestos orgnicos que un organismo no pueda sintetizar a partir de fuentes primarias de carbono, necesariamente deben ser administrados como nutrientes. Estos nutrientes son conocidos como factores de crecimiento y de acuerdo a su estructura qumica y funcin metablica se pueden clasificar en tres clases: Aminocidos, necesarios como constituyentes de las protenas. Purinas y pirimidinas, requeridos como integrantes de los cidos nucleicos. Vitaminas, forman parte de grupos prostticos o centros activos de ciertas enzimas. Los factores de crecimiento son requeridos en pequeas cantidades ya que cubren plenamente las necesidades especficas de las biosntesis. 1.1.- Requerimientos de Carbono Los organismos fotosintticos, y las bacterias que oxidan compuestos inorgnicos, utilizan como o fuente de carbono su forma ms oxidada (CO2). Los otros organismos, obtienen el carbono fundamentalmente de materiales orgnicos. Gran parte del carbono de los materiales orgnicos, es utilizado como fuente de energa y es excretado de la clula como CO2, que es el principal producto de la respiracin. Cuando el mecanismo productor de energa es la fermentacin, parte del carbono es excretado como CO2 y compuestos orgnicos. Las sustancias orgnicas cumplen un doble papel nutricional, son fuente de carbono y fuente de energa. No existe en la naturaleza, ningn compuesto orgnico que no pueda ser utilizado como fuente de carbono y energa por algn microorganismo. 1.2.- Requerimientos de Nitrgeno El nitrgeno en los compuestos orgnicos de las clulas se presenta en estado reducido como grupo amino. La gran mayora de los organismos fotosintticos asimilan el nitrgeno en estado inorgnico como nitratos, que posteriormente son reducidos. Muchos organismos no fotosintticos como bacterias y hongos tambin pueden asimilar el nitrgeno como nitrato, otros microorganismos son incapaces de llevar a cabo esta reduccin y utilizan como fuente de nitrgeno formas reducidas de este. Las necesidades de nitrgeno se cubren frecuentemente con materiales orgnicos que
contienen nitrgeno en estado reducido.
1.3.- Requerimientos de Azufre El azufre en los compuestos orgnicos de las clulas se presenta en estado reducido como grupo sulfhidrilo. La mayora de los organismos fotosintticos asimilan el azufre en estado inorgnico como sulfatos que posteriormente son reducidos. Bacterias y hongos tambin pueden asimilar el azufre como sulfato. Las necesidades de azufre, se cubren frecuentemente con materiales orgnicos que contienen azufre en estado reducido. 1.4.- Requerimientos de Oxgeno En los organismos superiores, el oxgeno es un componente universal de las clulas y gran parte de este elemento lo proporciona el agua. No obstante, los organismos superiores y muchos microorganismos necesitan adems oxgeno molecular, ya que dependen de la respiracin aerobia como mecanismo generador de energa, donde el oxgeno acta como oxidante terminal. A estos organismos que requieren oxgeno molecular se les denomina aerobios obligados. Dentro de esta categora, hay algunos grupos que crecen mejor a presiones parciales de oxgeno ms bajas (0,2 atmsferas) que las del aire y se les denomina microaerfilos. Otros microorganismos, obtienen energa por la va fermentativa o por respiracin anaerobia, que no implica la necesidad de oxgeno como oxidante terminal. En muchos casos el oxgeno puede actuar como una sustancia txica o bien inhibir el crecimiento. A estos microorganismos se les denomina anaerobios obligados. Otros microorganismos pueden crecer tanto en ausencia como en presencia de oxgeno molecular, alternando la respiracin con la fermentacin, a estos se les denomina anaerobios facultativos. Un caso particular son las bacterias del cido lctico, que no son sensibles al oxgeno molecular y en presencia de ste, continan la fermentacin. 2.- CATEGORAS NUTRICIONALES Tradicionalmente, desde el punto de vista de las relaciones trficas, los seres vivos se clasifican en: Productores Primarios o Auttrofos (fotosintticos) que pueden asimilar nutrientes totalmente inorgnicos. Consumidores o Hetertrofos (herbvoros, carnvoros y omnvoros) que requieren nutrientes orgnicos y Descomponedores (bacterias y hongos, principalmente). El principal inconveniente de esta clasificacin entre auttrofos y hetertrofos es que no contempla la gran variedad de modelos nutricionales que se presentan en la categora de los Descomponedores. Una clasificacin til es la que considera la naturaleza de la fuente de energa y la naturaleza de la fuente de carbn. Considerando la fuente de energa, los organismos que utilizan la luz como fuente de energa, se denominan fottrofos (fotosintticos) y los que emplean la energa qumica como fuente de energa, quimitrofos. En referencia a la fuente de carbono, los organismos que utilizan CO2 como principal fuente se denominan auttrofos y los que emplean compuestos orgnicos como fuente de carbono hetertrofos. De la conjuncin entre estos dos criterios, se pueden establecer las siguientes categoras nutricionales: 2.1.- Fotoauttrofos: Utilizan la luz como fuente de energa y CO2 como fuente de carbono. Esta categora incluye, vegetales superiores, algas eucariticas, algas verdeazuladas y bacterias fotosintticas. 2.2.- Fotohetertrofos: Utilizan la luz como fuente de energa y compuestos orgnicos
como fuente principal de carbono. En esta categora se incluyen, algunas algas
ecucariticas y bacterias no-sulfobacterias (bacterias fotosintticas). 2.3.- Quimiauttrofos: Emplean como energa, la energa qumica de compuestos inorgnicos reducidos y CO2 como fuente principal de carbono. Es una categora exclusiva de un grupo especializado de bacterias, entre las que se destacan, bacterias nitrificantes, que utilizan (NH3, NO2 -) y las que llevan a cabo la oxidacin de compuestos reducidos del azufre (SH2, S, S2O3 2-). 2.4.- Quimiohetertrofos: La fuente de energa y la fuente de carbono provienen de compuestos orgnicos. Esta categora incluye a todos los animales superiores (consumidores), hongos y protozoos y la gran mayora de bacterias. Estas categoras pueden subdividirse en osmtrofos que son aquellos organismos que ingresan los nutrientes en forma disuelta y fagtrofos, organismos que los engloban en forma particulada. Una segunda subdivisin, puede realizarse en funcin del mecanismo productor de energa, entre organismos respiratorios y organismos fermentativos. 3.- SINTROFA En materiales orgnicos en degradacin, participan diferentes grupos fisiolgicos de microorganismos. Algunos grupos actan conjuntamente y otros se suceden en el tiempo. Las actividades metablicas combinadas pueden diferir cuantitativamente y cualitativamente de la suma de los efectos de estos grupos en forma separada. Este fenmeno, es el resultado de interacciones nutricionales y se denomina efecto sintrfico o sinergtico. 4.- CRECIMIENTO Para cualquier ser vivo, el crecimiento puede definirse como un incremento ordenado de todos los constituyentes qumicos del organismo. Es normal que el crecimiento determine la multiplicacin celular. En los organismos pluricelulares, la multiplicacin celular tiene como consecuencia un aumento en el tamao del individuo. En los unicelulares conduce a un incremento en el nmero de individuos. En condiciones favorables, una poblacin de bacterias, se dobla a intervalos regulares de tiempo. Cada clula hija, proveniente de una misma divisin, tiene el mismo potencial de crecimiento que la clula madre. Si la poblacin se inicia a partir de una nica clula, la poblacin se incrementa por cierto tiempo en forma escalonada, no obstante debido a las diferencias individuales de crecimiento, el tiempo de divisin es asincrnico y el nmero de clulas crece en forma continua, doblndose la poblacin a intervalos fijos. Este tipo de crecimiento se denomina crecimiento exponencial o logartmico. El crecimiento exponencial raramente se mantiene durante mucho tiempo. Como consecuencia de los cambios ambientales generados por los propios microorganismos, el crecimiento se autolimita. Normalmente los factores que limitan el crecimiento son, el agotamiento de nutrientes y la acumulacin de productos metablicos txicos. En un cultivo donde no se aportan nuevos nutrientes, estos factores determinan una curva caracterstica de crecimiento. Condiciones desfavorables son la humedad, temperatura, falta de nutrientes, presencia de sustancias inhibidoras del crecimiento o un inculo procedente de un cultivo anterior. Esta fase cuando se presenta tiene una duracin muy variable. La fase de crecimiento exponencial se inicia cuando la velocidad de crecimiento alcanza
su valor mximo y el nmero de clulas aumenta. La concentracin y naturaleza de los
nutrientes, la temperatura y el pH, son algunos de los factores que afectan la velocidad de crecimiento. Por el agotamiento de nutrientes o por la concentracin de metabolitos txicos la velocidad de crecimiento comienza a decrecer paulatinamente. La fase estacionaria mxima se verifica por el agotamiento de nutrientes o por la concentracin de metabolitos txicos, la velocidad de crecimiento comienza a decrecer paulatinamente hasta velocidad de crecimiento cero. En la fase de muerte, la poblacin viable disminuye. La cintica de la muerte de las poblaciones bacterianas es exponencial. 4.1.- La concentracin de nutrientes en la velocidad de crecimiento: Para concentraciones de nutrientes bajas la velocidad de crecimiento es proporcional a la concentracin. En concentraciones altas, la velocidad de crecimiento alcanza rpidamente su valor mximo, que se mantiene hasta que el incremento en la concentracin de nutrientes acta como inhibidor. 4.2.- La Temperatura y la velocidad de crecimiento El intervalo de temperatura en que crecen los organismos se presenta entre los 5C y +80C. Los organismos procariotas (bacterias y algas verdeazuladas) presentan diferencias muy marcadas respecto a la zona de temperatura donde pueden crecer, siendo este un factor limitante para su crecimiento. En funcin a su relacin con la temperatura se clasifican en termfilos, mesfilos y psicrfilos. Principales categoras fisiolgicas de las bacterias segn su relacin con la temperatura (C). GRUPO/ Rango mnimo/ Optimo/ Mximo TERMOFILOS 40-45/ 55-75 / 60-80 MESOFILOS 10-15/ 30-45 / 35-47 PSICROFILOS Obligados (-5)-(+5) / 15-18 / 19-22 Facultativos (-5)-(+5) / 25-30 / 30-35 TERMOFILOS: Algas verdeazuladas, Bacterias formadoras de endosporas (B.Stearothernophilus) Actinomicetos (Thermoactinomices). MESOFILOS: Gran mayora de microorganismos. Euactinomicetos (Streptomyces, Mcromonospora) Bacterias Metanognicas (Metanobacterium, Methanococus, Metanosarcina), Bacterias del cido lctico, Esporulantes anaerbicos (Clostridium). Patricio
Algunos nutrientes constituyen los bloques a partir de los cuales la clula
elabora macromolculas estructurales y funcionales, mientras que otros sirven como donadores de electrones (fuente de energa) y algunos ms como aceptores finales de electrones sin ser incorporados directamente al material celular. A veces un mismo nutriente puede desempear todas las funciones, lo que depender del tipo de microorganismo y de las condiciones ambientales. La forma qumica especfica bajo la cual los microorganismos adquieren el carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y oxgeno, as como su energa, es muy variable, lo que determina que los microorganismos presenten mltiples tipos nutricionales. Una clasificacin nutricional sencilla es aquella que se basa en dos variables: la naturaleza de las fuentes de energa y de carbono. Con relacin a la fuente de energa los microorganismos se clasifican en dos grupos: Fottrofos, estos utilizan la energa electromagntica (luz) para su desarrollo. Quimitrofos, que obtienen su energa a partir de la oxidacin de compuestos qumicos, y que a su vez se subdividen en: o Quimiolittrofos (oxidacin de compuestos inorgnicos) o Quimiorgantrofos (oxidacin de compuestos orgnicos) Con respecto a la fuente de carbono, se clasifican como: Auttrofos, microorganismos que usan CO2 y carbonatos. Hetertrofos, aquellos que utilizan compuestos orgnicos. De acuerdo con estos criterios, los microorganismos se ubican en cuatro clases nutricionales las que se describen en el cuadro 1. No obstante, la versatilidad fisiolgica de los microorganismos determina que la clasificacin expuesta no sea de ninguna manera estricta,
como lo demuestran los siguientes ejemplos: algunos microorganismos
fotoauttrofos crecen tambin en la oscuridad comportndose como quimiohetertrofos. Esta versatilidad se conoce con el trmino de facultativo. Asimismo, algunas bacterias y algas fotoautotrficas son incapaces de sintetizar alguno de sus constituyentes celulares a partir de CO2, por lo que generalmente viven asociadas con otros microorganismos que le proporcionan este componente y cuando se les cultiva en medios artificiales es necesario suministrar ese compuesto orgnico. Es importante recalcar que aun cuando el grupo bacteriano es, desde el punto de vista estructural, el ms simple de los microorganismos (procariotes); fisiolgicamente es el ms complejo y el nico en el que se encuentran todos los tipos nutricionales descritos.
A los compuestos orgnicos que actan como precursores o como
constituyentes de material
celular y que no pueden ser sintetizados a partir de compuestos de carbono
ms sencillos se les llama colectivamente factores de crecimiento; stos, por su estructura qumica y accin metablica, se dividen en tres clases: Aminocidos, requeridos como constituyentes de protenas. Purinas y pirimidinas, requeridos como constituyentes de los cidos nucleicos. Vitaminas, representadas por diversos compuestos orgnicos que forman parte de grupos prostticos o centros activos de numerosas enzimas. Con base en las necesidades de factores de crecimiento, se emplean otros dos trminos: Prottrofos, microorganismos capaces de cubrir todas sus necesidades a partir de la fuente principal de carbono, por lo tanto no requieren factores de crecimiento. Auxtrofos, son aquellos que requieren, de uno o ms nutrientes orgnicos adems de la principal fuente de carbono. El nitrgeno y el azufre se encuentran en los compuestos orgnicos de la clula, principalmente en forma reducida como grupos amino y sulfhidrilo. Los microorganismos toman dichos elementos en diferentes estados de oxidorreduccin y pueden tener las siguientes funciones: Fuente de nitrgeno y azufre, en cuyo caso son asimilados e incorporados al material celular. La mayora de los microorganismos fotosintticos, muchas bacterias no fotosintticas y los hongos, asimilan estos dos elementos en estado inorgnico como NO 3 - y SO4 =, y su utilizacin implica una reduccin preliminar; de nitratos a amonaco y de sulfatos a sulfuro para su incorporacin al material celular, este proceso se conoce como reduccin asimiladora de nitratos o de sulfatos.
Otros microorganismos son incapaces de efectuar esta reduccin, por lo que
estos elementos deben ser proporcionados como sales de amonio, o como sulfuros, o como compuestos orgnicos que los contengan como la cistena. En este caso, el aminocido puede ser adems fuente de carbono y de energa. Existen algunas bacterias que son capaces de utilizar el N 2 atmosfrico, para ello lo reducen a amonaco a travs de un proceso tambin asimiIatorio denominado fijacin de nitrgeno. Donadores de electrones, en las bacterias quimiolittrofas, la energa se obtiene por oxidacin de amonaco a nitritos y stos a nitratos, como ocurre con las nitrificantes; o bien por la oxidacin de sulfuros, azufre o tiosulfatos a sulfatos como lo hace Thiobacillus thioxidans. Aceptores de electrones, en este caso los nitratos se reducen a nitritos, xidos de nitrgeno y nitrgeno elemental a travs de un proceso desasimilatorio conocido como desnitrificacin. Del mismo modo los sulfatos pueden ser reducidos a sulfuros. Ambos procesos se llevan acabo en condiciones de anaerobiosis. El fsforo es asimilado como fosfatos de origen inorgnico u orgnico y forma parte de las membranas celulares, del material gentico y del ATP. Concentraciones elevadas de fosfatos inorgnicos determinan la inhibicin en el crecimiento de muchos microorganismos, aunque algunos son tolerantes. El oxgeno, como constituyente universal de las clulas, es un nutrimento proporcionado en cantidades abundantes por el agua; sin embargo, la mayora de los microorganismos requieren adems oxgeno molecular. Respecto a la necesidad o tolerancia de esta molcula, se tiene que los microorganismos se clasifican en cinco grupos: Aerobios estrictos, aqullos que crecen de manera obligada en condiciones xicas o aerobias con presencia de tensiones normales de oxigeno, el que utilizan como
aceptor final de electrones para cubrir sus necesidades energticas.
Microaeroflicos, los que crecen en tensiones de O2 menores a las del aire o condiciones microxicas. Facultativos, emplean alternativamente oxgeno molecular u otros compuestos inorgnicos u orgnicos como aceptores finales de electrones por lo que crecen de acuerdo a las condiciones que prevalecen en su hbitat, aerobias o anaerobias. Anaerobios estrictos, aqullos que no requieren de este elemento para su desarrollo, y la presencia de O2 inhibe su desarrollo o incluso provoca su muerte. Tal es el caso de las bacterias reductoras de sulfatos y de las bacterias metanognicas que utilizan el CO2 como aceptor de electrones y lo reducen a metano. Aerotolerantes, son organismos anaerobios, pero que a diferencia de los estrictos, estos toleran el O2 y crecen en su presencia aunque no puedan utilizarlo. Aerobios estrictos Requieren oxgeno para poder vivir. Carecen de la capacidad para realizar fermentacin. Por ejemplo Mycobacterium tuberculosis. Facultativos Pueden crecer con o sin aire, en ausencia de aire realizan procesos fermentativos y en presencia de aire cambian a un metabolismo respiratorio. Por ejemplo levaduras, enterobacterias. Microaeroflicos Crecen mejor en presencia de pequeas cantidades de oxgeno, tienen metabolismo respiratorio. Por ejemplo Campylobacter fetus. Anaerobios aerotolerantes Pueden crecer con o sin oxgeno pero su metabolismo es siempre fermentativo. Por ejemplo Lactobacillus. Anaerobios estrictos No pueden crecer en presencia de oxgeno. Su metabolismo puede ser fermentativo en algunos, respiracin anaerbica en otros y ciertos grupos realizan fotosntesis. Por ejemplo Clostridium botulinum. EFECTO DEL OXGENO SOBRE LOS ANAEROBIOS La sensibilidad al oxgeno se ha asociado con la carencia de la enzima superxido dismutasa. Esta enzima detoxifica los radicales libres, potencialmente dainos, formados en las clulas en presencia de oxgeno. La superxido dismutasa parece estar presente en todos los microorganismos aerobios y en los anaerobios aerotolerantes pero no se ha encontrado en los anaerobios estrictos.