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Ensayos in vivo
Son aquellos que ocurren o tienen lugar dentro de un organismo.
Aplicacin cutnea, subcutnea o pulmonar del producto en animales. Son de realizacin a largo
plazo.
Para estudiar la embriotoxicidad y teratogenicidad de los compuestos pueden usarse los huevos
de las aves (gallina, pato, etc.). Los huevos fecundados se encuban en una estufa, y hacia el
sptimo da se inyecta en el saco vitelino (Fig. 1), observando por transiluminacin. O.o5 ml de
una disolucin o emulsin del producto en suero salino estril: al final del periodo de incubacin
se compara, frente a un lote de huevos sin tratamiento, el nmero de pollitos nacidos y los que
sobreviven, y se buscan posibles malformaciones. Este ensayo tiene la caracterstica de que en el
huevo la biotransformacin del xenobitico es mnima, por lo que los efectos observados no
pueden deberse a metabolitos.
Ventajas:
- Evaluacin de toxicocintica
- Evaluacin de la toxicidad consideran el
metabolismo ntegro
- Menores costos
Desventajas:
- Restricciones ticas
- Se requieren mayores sustratos biolgicos
(animales)
- Mayor tiempo
- Algunos ensayos de toxicidad in vivo se
consideran insatisfactorios y limitados a
algunos a algunos tipos de mecanismos y
dianas.
2. Animales agnotobiticos: no se puede asegurar que tengan continuamente una flora conocida.
Se subdividen en
2.1. Heteroxnicos y tambin:
SPF = <<Specific pathogen free>>.
PF= <<Pathogen free>>
COBS= <<Caesarian obtained, barrier sustained>>.
Se obtienen por cesrea y son criados y mantenidos en condiciones ambientales sanitarias muy
controladas para evitar contaminacin.
2.2. Holoxnicos: son los clsicos o convenciones criados y mantenidos en condiciones ordinarias
(GLP mnimas).
2.3. Neoholoxnicos: son animales originariamente axnicos o heteroxnicos, recriados en otras
condiciones.
3. Animales convencionales, criados y mantenidos en condiciones tradicionales. No deben ser
utilizados para investigacin farmacolgica ni toxicolgica.
Mtodos in vitro
Los ensayos in vitro se realizan generalmente en clulas o tejidos
animales o humanos fuera del cuerpo. La expresin in vitro
(en vidrio) se refiere a los procedimientos que se realizan
sobre material vivo o componentes de material vivo en placas
petri o en tubos de ensayo en unas condiciones definidas.
Las tcnicas in vitro tienen el objetivo de describir los efectos de una variable
experimental inducida por un producto (biolgico, farmacutico, cosmtico, etc.)
en un subconjunto de los elementos constitutivos de un organismo, como
pueden ser los rganos, tejidos, clulas, componentes celulares, protenas y/o
receptores, y se llevan a cabo en tubos de ensayo o placas de petri o de pocillos
para hacer cribas automatizadas de alto rendimiento
Son tica y moralmente ms aceptables que los ensayos in vivo, ya que los animales vivos no se ponen en
contacto con los txicos de ensayo.
En los casos en que los precisan, requieren un nmero considerablemente menos de animales, pues con
fracciones de los rganos de un solo animal pueden realizarse cientos, incluso miles de ensayos in vitro.
Utilizan material biolgico muy homogneo, obtenido con tcnicas estandarizadas. Posibilitan adems el uso de
material de origen humano, de cadveres o por biopsia en sujetos vivos, lo que puede simplificar en gran medida
el proceso de extrapolacin de los datos obtenidos.
Permiten estudiar las acciones del compuesto sobre una determinada poblacin celular o fraccin subcelular
aislada en la que se presuponga la diana principal o secundaria. Con ello se evitan las interferencias producidas
por otros rganos, clulas u orgnulos sobre la diana que estemos estudiando.
Son ms factiblemente objetables y cuantificables que los ensayos in vivo, por poderse someter directamente a
medicin por tcnicas fisicoqumicas (espectrofotometra, etc.).
Los resultados presentan mayor reproducibilidad que los de los mtodos animales, al consistir cada ensayo en
reacciones de unos pocos componentes, en condiciones controladas, sin interferencias de otros factores como el
estrs animal, los cambios estaciones, las influencias meteorolgicas (Sanz et al., 1988), etc.
Posibilitan una mayor precisin en el control directo de la dosificacin, es decir, la cantidad de txico en
interaccin con el rgano diana, al ser factible trabajar directamente sobre esta.
Permiten el control absoluto de la duracin del periodo de contacto con el producto evaluado, puesto que el
txico puede aplicarse y retirarse a voluntad del investigador.
Facilitan el estudio de los mecanismos de accin txica, diferenciando la lesin primaria de las que se
desencadenan a continuacin, al ser posible interrumpir o modificar el proceso en cualquier momento. Adems,
reducen el periodo de latencia y facilitan el estudio cronolgico de las acciones txicas.
Al ser modelos ms simples, permiten estudiar las influencias toxicocinticas ms fcilmente y con mayor
profundidad.
Revista de toxicologa
Carne cultivada: mtodo in vitro
Laboratorio de Toxicologa, Facultad de Farmacia, Universidad de Valencia
Medio de cultivo:
El objetivo es encontrar un medio rentable en el que las clulas puedan crecer y sin recurrir a ingredientes de
origen animal. Por ejemplo, no se puede usar suero de terneros porque la carne de cultivo no tiene los rganos
digestivos de un ser vivo que metabolizan los nutrientes para alimentar a las clulas. Por tanto, este medio ha de
nutrir directamente a las clulas con todo lo que necesiten.
Biorreactor :
Todo se mezcla en el biorreactor: las clulas, el medio de cultivo y la matriz. Por medio de cambios en la
temperatura y el entorno se crea un medio que puede ser parecido a un gimnasio con un entrenamiento especfico
para las clulas musculares. La carne de cultivo se compone de delgadas y largas fibras de clulas musculares y
tejido conectivo, que produce colgeno y elastina, as como clulas de grasa, importantes para el sabor del
producto final.
Para los puntos antes indicados no se han encontrado soluciones econmicamente rentables, an esperamos este
gran avance.
Nos gustara hacer un breve comentario sobre la naturalidad de los alimentos: se pretende que la carne de cultivo
sustituya a la ganadera intensiva industrializada. Esto no supone ninguna amenaza o competencia con las granjas
de vegetales orgnicos, por ejemplo. Comparado con la antinatural industria de la ganadera, la carne de cultivo
podra ser sin duda un paso progresivo con respecto a la salud, bienestar animal y ecologa.
Bibliografa
- Repetto, M., (1997). Toxicologa fundamental (3ra.edicin).
Madrid, Espaa: Daz de Santos.
- Repetto, G., (2012).La aplicacin de procedimientos in vitro en
la evaluacin toxicolgica alimentaria. Madrid, Espaa: Daz
de Santos
- Juan-Garca A.(2014). Carne cultivada: mtodo in vitro. Rev.
Toxicol. (2014) 31: 196-203