CARIOTIPOS HUMANOS

Valeria Denisse Palma

6167634 LP.

INTRODUCCION
Los cromosomas son las estructuras en que se organiza la cromatina nuclear y que tienen
una expresin dinmica en las distintas fases del ciclo celular. En la mitosis estas
estructuras comienzan un proceso de compactacin que alcanza su mximo nivel en la
metafase. Los cromosomas se tien fcilmente cuando estn condensados y pueden ser
individualizados con el microscopio ptico. Cada cromosoma contiene una molcula de
ADN lineal asociado a distintas protenas y el contenido de genes es variable aunque est
en relacin con su tamao (Barch M. etal 1997)
Los humanos tenemos un nmero total de 46 cromosomas y este nmero vara segn las
especies. Los 46 cromosomas estn constituidos por 23 pares de homlogos y cada
miembro del par proviene de un progenitor. El cariotipo es la constitucin cromosmica
de un individuo y es un estudio de rutina en gentica mdica. Los cariotipos se pueden
informar presentando todos los pares cromosmicos ordenados de acuerdo a su tamao,
que en un principio eran recortados de la fotografa de una metafase, y ahora se pueden
hacer con analizadores automticos. De los 23 pares, el par de cromosomas sexuales se
seala por sepa rado para indicar el sexo del individuo CUMMINGS, M. R. 1995
Para el estudio cromosmico se debe realizar el cultivo un te jido del individuo donde las
clulas crezcan y se dividan rpidamente. El tejido ms accesible para ese fin es la sangre y
las clulas que crecen son los linfocitos. La tcnica comienza con la toma de una muestra
de sangre perifrica por veno puntura con heparina como anticoagulante. Se siembran
alrededor de 10 gotas en un medio enriquecido y se incuba a 37C durante 72 horas. La
estimulacin de la divisin celular se logra con la adicin de un factor mitognico como es
la fitohemaglutinina. Pasado ese tiempo, se agrega una solucin de colchicina al medio
para detener la divisin celular y evitar que las clulas completen la mitosis. La colchicina
acta inhibiendo la formacin del huso mittico y las clulas que alcanzan la metafase se
acumulan en el cultivo. Luego se agrega una solucin hipotnicaque hace que las clulas se
hinchen y se las hace estallar con una tcnica de goteo sobre un portaobjeto y los
cromosomas se liberan. Posteriormente el material se fija y se tien de acuerdo a las
diferentes tcnicas. CUMMINGS, M. R. 1995

En este trabajo se buscara ver los cariotipos de hembras y varones de humanos a partir de
linfocitos cultivados e incubados con colchicina y fitohemaglutinina.

METODOS
La prctica se realiz en 4 etapas:
1era etapa: extraccin de la muestra
Para el trabajo se extrajeron como primer paso se realiz la extraccin de 2ml de sangre
perifrica de (una mujer y de un varn), la jeringa con la cual se tom la muestra se
encontraba herparinizada (0.1 ml), esta se mantiene en agitacin. Posteriormente se dej la
jeringa en posicin vertical con tapa puesta para la sedimentacin de la sangre.
2da etapa: siembra
Una vez sedimentada se sembr por duplicado 10 gotas de sangre en frascos de cultivo con
4 ml de medio de cultivo RPMI (Con Suero Bovino Fetal 10%; 0,1 ml de antibiticos; 0,2
ml de fitohemaglutinina). Estos fueron incubados a 37C durante 72 horas para que se
puedan dar 3 ciclos de divisin celular. Despus de las 72 horas se agreg 0.2 ml de
colchicina y se incub de 1 a 2 horas a 37C. Luego se centrifug 10 minutos a 1000 RPM
y se elimin el sobrendante.
El pellet de clulas se resuspendi con 10 ml solucin de KCl 0.075 M. Se incub de 20 a
30 minutos a 37C y se centrifug nuevamente por 10 minutos a 1000 RPM y se elimin el
sobrenadante. Se aadi solucin fijadora Carnoy (Metanol: Ac. Actico - 3:1), se
resuspendi el botn y se dej durante 5 minutos a temperatura ambiente, luego se
centrifug durante 10 minutos a 1000 RPM, se descart el sobrenadante. Este paso se
realiz tres veces. Se resuspendi el pellet con 1ml de solucin fijadora, y luego se lo
refrigero.
3era etapa: Fijacin
Se sumergieron los portaobjetos en etanol frio al 70% en una caja Petri. Luego se retiraron
las placas para la realizacin del goteo. Con una pipeta Pasteur se realiz el goteo desde
una distancia de 30 cm por encima de la placa. La placa luego se dej secar a temperatura
ambiente. Luego se tieron las placas con solucin de Giemsa.
4ta etapa Lectura de placas
Una vez teidas las placas se procedi a la lectura de las placas con un aumento de 100x.
Se leyeron 10 metafases de las cuales se escogieron 3 para la realizacin de los ideogramas.
De las 10 metafases contadas se sac el promedio para determinar el nmero de
cromosomas.
RESULTADOS
En la tabla 1 se puede observar el nmero de cromosomas contados en las 10 metafases

Tabla 1. N de cromosomas por metafases contados en 10 metafases

N de metafases

Numero de cromosomas

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

40
35
46
46
46
47
48
39
46
46

PROMEDIO
MODA

46
46

Como se puede ver en la tabla 1 los resultados muestras una media de 46 y una moda de
46 tambin. Por otro lado el armado del ideograma de tres metafases se muestra en la
figura 2
DISCUSIN Y CONCLUSIN
Los resultados mostrados en la tabla 1 muestran una media igual a 2n= 46, que a pesar de
que el nmero de metafases fue bajo, al tratarse de un cariotipo humano se concluye que
los resultados fueron los esperados. En la misma tabla se puede apreciar una pequea
variacin en cuanto al nmero de cromosomas sin embargo es algo comn al momento de
realizar estas prcticas ya que al momento de realizar la placa hay la posibilidad de que los
cromosomas caigan lejos del conjunto o que haya solapamiento, es por esta misma razn
que al momento de realizar este tipo de prcticas se aconseja contar una gran cantidad de
metafases
Por otro lado la presencia de dos cromosomas sexuales XX se determina que la placa que se
ley en la prctica corresponda a una mujer como se puede ver en la figura 1

Bibliografa
Barch M., Knutsen T. & Spurbeck,J.1997. The cytogenetics laboratory manual. editorial
lippincott-raven. tercera edicin
CUMMINGS, M. R. 1995. Herencia Humana Principios y Con
ceptos. Editorial Interamericana Mc Graw Hill. Tercera Edicin