DETERMINACIN DE COLIFORMES TOTALES EN AGUAS UTILIZANDO

CALDO LMX.

1-Rafael Emilio Gonzlez Cuello, 2-Raul Blanco, 2-Ketty Rodrguez, 2-Karina

Pedraza. 2- Carlos Uricoechea, 2- Tatiana vega.

Universidad De Cartagena

Ingeniera de alimentos

Microbiologa de alimentos

30 de mayo de 2015

1-docente de microbiologa de alimentos. 2- estudiante de ingeniera de alimentos.

Resumen. Durante la presente prctica donde se tuvo como objetivo principal la

deteccin de organismos indicadores de contaminacin en aguas, se utiliz el
nuevo medio de cultivo LMX, el cual detecta simultneamente coliformes totales.
Debido a que las aguas residuales son de composicin variada provenientes de
descargas de usos, comerciales, de servicios, agrcolas, domsticos, incluyendo y
en general de cualquier uso, as como la mezcla de ellas, contienen diferentes
tipos de microorganismos contaminantes y las diferentes concentraciones,
dependiendo de su fuente. La variada poblacin de microorganismos en esta
agua, proviene del suelo. Para la determinacin del NMP de Coliformes Totales y
en este tipo de aguas, es necesario proceder a preparar diluciones decimales de
la muestra, debido a que se espera que la concentracin de coliformes sea
superior en stas que en un agua potable. En la muestra que se eligi para la
prctica, arrojo un resultado de 3,3,2 el agua se encontr bastante contaminada,
coliformes totales NMP (1100/100ml).
Palabras claves. Coliformes totales, caldo LMX, aguas contaminadas.

Introduccin.
El agua desempea un papel primordial para el desarrollo de los seres vivos,
representa alrededor del 70 % del cuerpo humano, por lo que constituye uno de
sus alimentos principales despus del aire. Su calidad puede estar afectada por
agentes qumicos y biolgicos, estos ltimos incluyen bacterias, hongos, virus y
protozoos, entre otros. En muchas ocasiones la determinacin de patgenos
especficos en el laboratorio involucra tcnicas y procedimientos muy cotosos que
consumen grandes recursos y tiempo, razn por la cual se ha establecido la
deteccin de microorganismos indicadores de contaminacin para el estudio de la
calidad sanitaria del agua. Los coliformes totales y fecales fueron unos de los
primeros microorganismos indicadores de contaminacin utilizados y, hasta el
presente, continan siendo los indicadores de la calidad sanitaria de las aguas.
Clsicamente la deteccin y cuantificacin de microorganismos se basa en la
utilizacin de mtodos que conllevan a la inoculacin de las muestras de agua en
medios de cultivo especficos (slidos o lquidos) que garantizan los
requerimientos nutricionales del grupo microbiano en cuestin y la selectividad de
los mismos. En las ltimas dcadas la deteccin y cuantificacin directa (sin
aislamiento) de organismos coliformes utilizando medios de cultivo que contienen
sustratos definidos ha sido amplia y rpidamente aceptada. Estos sustratos son
utilizados por enzimas especficas del grupo de bacterias coliformes. El mtodo se
basa en el principio de unir estos compuestos a algn sustrato que se libere al
medio al ocurrir la reaccin, produciendo un cambio de color perceptible o el
desarrollo de fluorescencia. Por esta razn se conocen como compuestos cromo
gnicos y fluorgenicos. (Rodrguez, 2003).

En el presente trabajo se realiz la introduccin del medio de cultivo Caldo

LMX en la determinacin de coliformes en aguas. El empleo de este result
sencillo y muy rpido conllevando a un ahorro de tiempo, energa, materiales
de laboratorio, y por tanto, a una disminucin del costo del anlisis por
muestra.

Materiales y mtodos.
Esta prctica se llev a cabo en el laboratorio de microbiologa de la universidad
de Cartagena los materiales que se emplearon fuero: agua contaminada, agua de
peptona, 9 tubos de ensayo con caldo LMX, 2 tubos de ensayo ms con agua de
peptona, 9 pipetas de 1ml estriles, en primer lugar se tomaron 11 ml de la
muestra y se adicionaron a los 99ml de agua de peptona, se agito hasta que la
dilucin 10-1 estuvo homognea, y con otra pipeta estril tomar una alcuota de 1
mL y se llev a otro tubo con 9 mL de agua de agua de peptona para obtener una
dilucin de 10-2 . Se procedi de la misma manera hasta obtener una dilucin de

10-3 o hasta donde sea necesario. Se inoculo aspticamente con 1 mL de muestra

por triplicado, tubos de fermentacin conteniendo caldo LMX, a partir de las
ltimas 3 diluciones Luego se llev todos los tubos a una temperatura de 37 C
durante 24horas. Se realiz la comparacin de las muestras con las dems
muestras de los distintos grupos, con el que se evalu la calidad del agua utilizada
para la prctica. Todos los procedimientos realizados en el rea de trabajo limpia
cerca de mechero para evitar posibles contaminaciones.

RESULTADOS

El Caldo LMX, permite la deteccin rpida y simultnea de los organismos

coliformes totales, en solo 24 h. La utilizacin de este medio de cultivo ahorra
tiempo, factor de vital importancia cuando est en peligro la salud humana. El
tiempo se reduce a slo 24 h de los 4-5 das que requiere la determinacin cuando
se emplea la tcnica tradicional con Caldo Verde Brillante. Por otra parte, el
empleo de este medio de cultivo ahorra tambin energa; pues se requiere de una
incubacin a 37 oC durante solo 24 h, comparada con varias incubaciones de 1 a
2 das (incluyendo una a 44.5 oC), utilizadas en la tcnica tradicional. Adems, al
detectarse simultneamente los organismos coliformes se reduce a casi una
tercera parte la cristalera empleada por el mtodo tradicional.
Como se observ, en la tabla 1. Los coliformes totales tuvieron presencia cuando
se utiliz el Caldo LMX la coloracin fue azur verdosa, lo cual indica la
superioridad de este medio en el recobrado de estas bacterias con respecto a los
medios tradicionales. La media del NMP de coliformes, cuando se emplea este
medio, es mucho mayor que la obtenida cuando se emplean en el anlisis los
medios de cultivo tradicionales por ejemplo caldo brilla. Estos resultados se deben
a que la deteccin y cuantificacin de los coliformes mediante los medios
tradicionales se realiza de manera indirecta, a travs de un subproducto de la
reaccin de fermentacin el gas. En la tabla 2, los resultados obtenidos en el
anlisis de coliformes totales en comparacin con los dems grupos, la gran
mayora de los grupos obtuvieron resultados similares, lo que indica que el agua
utilizada para su prctica tuvo igual nivel de contaminacin.
Tabla 1
Resultado de anlisis de coliformes totales en aguas contaminadas
DILUCIONES
MUESTR
A
1

10-1
+

10-2
+

10-3
+

Tabla 2
Resultado de anlisis de coliformes totales en aguas contaminadas(comparacin)
DILUCIONES
G.Kelly
G.Sindy
G.Gustav
o
G.Gallo
G angie

3-3-0
3-3-3

3-3-3

Por lo tanto, se pudo que el resultado del nmero ms probable es: 33

2.- P a r a e s t e r e s u l t a d o l a s t a b l a d e N M P c o n u n l m i t e d e
c o n f i a n z a d e a p r o x i m a d a m e n t e u n 9 5 % p a r a l a prueba de utilizando
3 diluciones con dos repeticiones (3 tubos), arrojo un valor de 1100 bacterias/mL
En el agua.

CONCLUSION.
El medio LMX muestra mayor sensibilidad, rapidez y reproducibilidad en la
deteccin y cuantificacin de coliformes totales que los medios de cultivo
tradicionales, con la presencia de estos en la mayora de los tubos demostr que
es un mtodo efectivo y fcil, es necesario aclarar que el agua utilizada era agua
residual, contaminada (confirmado) que permiti los valores arrojados y la
presencia de contaminacin.
Bibliografa.

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS (1989). Medios de Cultivo

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