FISIOLOGA VEGETAL

PRACTICA N06
SINTESIS DE ALMIDON A LA LUZ

I.

INTRODUCCION

El almidn es el carbohidrato de reserva ms abundante en las plantas y se

encuentra en hojas que se acumula en los cloroplastos, donde es un producto
directo de la fotosntesis. Tambin se encuentra en diferentes tipos de tallos y
races as como en flores, frutos y semillas en los cuales se utiliza como fuente de
energa durante periodos de estrs o reinicio del crecimiento.
En los rganos de almacenamiento, se acumula en los amiloplastos, en los que
se forma despus de la translocacin de la sacarosa, o de otro carbohidrato
proveniente de las hojas.
La cantidad de almidn en diversos tejidos depende de muchos factores
genticos y ambientales, pero en las hojas el nivel y la duracin de la luz tienen
una importancia especial. El almidn se acumula a la luz del da, cuando la
fotosntesis supera las tasas combinadas de respiracin y translocacin.
Despus parte de el desaparece por la noche debido a ambos procesos.
Los rganos que almacenan almidn son productos alimenticios de importancia;
estimativos del Instituto Internacional de Investigacin sobre Polticas Alimentarias
(IFPRI) indican que el valor de la produccin de races y tubrculos en el ao
2020 representar el 11% del valor total de cereales, soya y carne y que las tasas
de crecimiento futuras de yuca, papa y ame excedern las de arroz y trigo
De manera creciente, el almidn es utilizado como recurso energtico renovable
despus de su conversin a etanol y para muchas aplicaciones industriales por su
versatilidad, bajo costo y la facilidad con que se alteran las propiedades fsico
qumicas, ya sea mediante modificaciones qumicas, enzimticas o tratamientos
fsicos (Jobling, 2004).
El almidn es una molcula compuesta por dos tipos de polmeros: la amilosa y la
amilopectina. La amilopectina est formada por unidades de glucosyl unidas por
enlaces -1,4 y altamente ramificadas en la posicin - 1,6 en intervalos de 10nm
a lo largo del eje de la molcula y constituye entre el 85-70% del almidn. La
amilosa es una cadena fundamentalmente linear de glucanos -1,4 con limitados
puntos de ramificacin en la posicin - 1,6 y constituye entre 15-30 % del
almidn. La amilopectina es ms estable que la amilosa debido a los limitados
enlaces de hidrgeno, que le confieren fluidez, alta viscosidad y elasticidad a las
pastas y espesantes. Las protenas, lpidos y minerales son componentes
cuantitativamente menores del almidn.
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Por ello es necesario realizar esta prctica de determinar la sntesis de almidn en
la luz para comprender como influye la luz en la sntesis de almidn.

II.

OBJETIVOS
Demostrar el efecto de la luz sobre la sntesis de almidn, en hojas.
Manejar tcnicas para eliminar clorofila.

III.

MATERIALES

a.
b.
c.
d.
e.
f.

IV.

Hoja de geranio (expuestas a la luz y a oscuridad respectivamente).

Lugol o yodo.
Alcohol a 96 (1litro).
Cocina.
Olla pequea.
Becker de 50ml.

MARCO TEORICO

El almidn es el carbohidrato de reserva ms abundante en las plantas y se

encuentra en hojas, diferentes tipos de tallos y races as como en flores, frutos y
semillas en los cuales se utiliza como fuente de energa durante periodos de
dormancia, estrs o reinicio del crecimiento.
a. Estructura del almidn.
El almidn es un polmero de glucosa formado por amilasa y amilopectina. La
amilosa es una cadena lineal cuyas unidades estn unidas por enlaces (1-4). El
extremo reductor es el C1, y el no reductor, el C4 terminal.
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La amilopectina por su parte, tiene ramificaciones formadas por enlaces entre el
C1 de la glucosa y el C6 de la siguiente. Est formada por cadenas lineales [ (14)] y cadenas ramificadas [(1-6)].
La sntesis de almidn y sacarosa es muy parecida y es por eso que se pueden
ver isoenzimas cloroplsticas y citoslicas aunque claro est, tienen distinta
regulacin.

b. Sntesis de Almidn.
La sntesis del almidn comienza con la unin de dos triosas fosfato que dan lugar
a una fructosa 2, 6-Bisfosfato. Una fosfatasa (fructosa 1, 6 Bisfosfatasa que
participa tambin en el ciclo de Calvin) elimina uno de los fosfatos formando
fructosa 6-fosfato que es isomerizada a glucosa 6-fosfato para pasar despus a
glucosa 1-fosfato por accin de laADP glucosa pirofosforilasa; se invierte una
molcula de ATP y se obtiene la ADP-Glucosa y pirofosfato que es hidrolizado a
fosfato inorgnico por accin de unapirofosforilasa.
La ADP-Glucosa es la unidad que se acaba aadiendo a la cadena en formacin
por accin del almidn sintasa. A destacar de esta ruta es:

La unidad estructural para la sntesis es la ADP-Glucosa.

Dos enzimas constituyen puntos de regulacin:

Fructosa 1, 6 Bisfosfatasa.
ADP Glucosa Pirofosforilasa.

En la sntesis de almidn se obtiene fosfato.

En plantas hay varias familias de la enzima almidn sintasa que a su vez
pertenecen a dos grupos: uno de ellos participa en la sntesis de amilosa y el otro
en la de amilopectina.
La estructura densa e insoluble que constituye el grano de almidn se obtiene por
la unin de amilosa y amilopectina cuando interaccionan con
la isoamilasa (elimina las ramificaciones que estorban) y la enzima D (recicla los
restos de glucano).
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La fructosa 1, 6-bisfosfatasa est regulada por el sistema ferredoxina/ tiorredoxina
y parece que la ADP glucosa pirofosforilasa tambin. Esto lleva a concluir que en
el cloroplasto la sntesis de almidn es inducida por luz.

c. Regulacin del metabolismo del almidn por la luz

Se ha registrado que la expresin de algunos genes relacionados con el
metabolismo del almidn est ajustada al ritmo circadiano de la planta mediante
un mecanismo de control por luz similar al encontrado en la fotosntesis en el
sistema del fitocromo. Este mecanismo comn permite la activacin simultnea
por la luz de la fotosntesis y el metabolismo del almidn para garantizar el
balance entre el carbono fijado durante la fase bioqumica de la fotosntesis y el
metabolismo del almidn.
En papa se han registrado mecanismos de regulacin diurna del contenido de una
gama amplia de metabolitos primarios y carbohidratos. Se han identificado
elementos G, GT1 y GATA que responden a la luz para promover la transcripcin
de algunos genes de la sntesis de almidn.
d. Enzimas que intervienen en la sntesis de almidn
La ruta postulada para la biosntesis de almidn es relativamente simple e
involucra tres enzimas: la ADP- glucosa pirofosforilasa (AGPasa), la sintetasa de
almidn (SS) y la enzima de ramificacin del almidn (SBE). Sin embargo, se ha
demostrado la participacin de varias isoformas de estas enzimas y otras enzimas
adicionales que estn de alguna manera involucradas en el proceso.

ADP- glucosa pirofosforilasa (AGPasa)

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La AGPasa es una enzima heterotetramrica y el anlisis de mutantes demostr

que tanto las dos
subunidades grandes como las dos pequeas son necesarias
para la actividad; las subunidades grandes actan en la regulacin y las pequeas
en la catlisis. El producto de la actividad de AGPasa es la ADP-glucosa que
acta como precursor inmediato de la sntesis del almidn.
Sintetasas de almidn (SS)
Las sintetasas del almidn, que cataliza esta reaccin, se activa mediante potasio,
una de las razones por la que ese ion es esencial para las planta. Estas estn
asociadas con el alargamiento de las cadenas de glucano y se pueden clasificar
en dos grupos de acuerdo con la localizacin; una (GBSSI) se encuentra
firmemente ligada a los grnulos de almidn y cataliza la conversin de ADPglucosa a cadenas lineales de (1-4) -glucosa (amilosa) y la otra (SSS) es una
forma soluble localizada en el estroma de los amilo plastos y cloroplastos y acta
especficamente en la biosntesis de amilopectina.
Sin embargo, GBSSI responsable de la sntesis de amilosa tambin contribuye
con la sntesis de amilopectina.
Enzima de ramificacin del almidn (SBE)
La enzima ramifica dora SBE tambin presenta mltiples formas que varan entre
especies y su actividad entre genotipos debido a cambios en el extremo N y C
terminal de la protena. La actividad de SBE es importante en la calidad y cantidad
de almidn. La ausencia de esta enzima ocasiona varios efectos como bajas
concentraciones de amilopectina y almidn pero elevada cantidad de azcares.
El estado de desarrollo de la planta regula la expresin de las enzimas ramifica
doras del almidn I y II por lo cual se pueden observar granos de almidn de
forma diferente con el transcurso del tiempo. Las ramificaciones de las
amilopectinas, entre el carbono seis de la cadena principal y el carbono uno de la
cadena ramificada, se forma mediante diversas isoenzimas que en conjunto
recibe el nombre de enzima Q o factor de ramificacin.

V. PROCEDIMIENTO
1. Exponer todo el da una planta de geranio a la luz, luego extraer una hoja
grande de esta planta y llevarla al laboratorio.
2. Exponer a la oscuridad otra planta de geranio por unas 30 a 36 horas. Y como
en el caso anterior extraer una hoja grande y llevarla al laboratorio (aun en
oscuridad).
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3. En el laboratorio hervir en agua por tres minutos la hoja de geranio que
estuvo expuesta a la luz y luego eliminar el agua y colocarla en alcohol y
hervir asta eliminar la clorofila.
4. Realiza el mismo procedimiento de extraccin de clorofila con hoja de geranio
que estuvo expuesta a la oscuridad. Las hojas debern tomar un color
blanquecino.
5. Introducir por separado las hojas en un recipiente con lugol o agua yodada.
DESARROLLO
Cubrimos la hoja con papel y revertir con una bolsa de color negro, para no
dejar el paso de la luz a la hoja (hoja en oscuridad), el tiempo indicado por el
docente (48horas).
Posteriormente en laboratorio hervimos las tres hojas (hoja luz y hoja
oscuridad hoja extrada la misma hora de la practica). Durante tres minutos en
agua.
Observaciones: las hojas que estaban hirviendo empezaron a perder su
pigmento verde (clorofila) en pequeas cantidades, lo que nos da a conocer que
hay una decoloracin de la hoja.

Luego hervimos nuevamente las hojas pero utilizando alcohol (96) por un
determinado tiempo hasta que las hojas estn totalmente descoloradas (hasta
eliminar por completo la clorofila de las hojas).

Observaciones: la hoja pierde su coloracin verdsima y toma una coloracin

blanca, lo cual es un indicador que las hojas han perdido su clorofila y estn
listas para hacer la coloracin.
Luego de haber sacado las hojas del alcohol. agregamos gotas de lugol para
comprobar si tiene almidn.

Observacin en la hoja luz:

En esta hoja se observa que la coloracin es ms intensa debido a la presencia

de almidn que reacciona con el lugol ya que existe almidn como producto de la
fotosntesis, ya que esta hoja ha estado expuesta a la luz.
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El color que se forma al agregar el lugol es un color violeta muy oscuro debido a
la alta concentracin de almidn. Y fue un proceso rpido.

Observacin en la hoja oscuridad:

La hoja mantiene el mismo color despus que fue hervida y no se produce ninguna
reaccin ya que no hay almidn porque la hoja no ha estado expuesta a la luz
(durante 48 horas) por lo tanto no ha estado haciendo fotosntesis, y el almidn de
reserva que tena ha sido consumido por la misma hoja durante la 48 horas de estar
fuera de la luz.

Observacin en la hoja cubierto con estiquers :

La hoja al colocar el lugol se obtiene un color violeta oscuro pero en menor

intensidad que de la hoja expuesta a la luz, debido a que estaba cubierta con
estiquers y no llego completamente la luz.

Anlisis del experimento:

Realizamos el siguiente anlisis. El tratamiento recibido por los tipos de hojas

(hoja luz y hoja en oscuridad)? Se demuestra que las hojas sintetizan almidones
solo aquellas que estn expuestas a la luz.
La luz permite a las plantas realizar el proceso de la fotosntesis, en el que se
fabrican las sustancias orgnicas.
Y si las hojas cambiaron de color al ser hervidas en el alcohol, esto nos indica que
el alcohol es una sustancia sirve para decolorar o extraen la clorofila de las hojas.

VI.

RESULTADOS

Se obtuvo que la hoja expuesta a la luz se tio de color violeta oscuro, y de una
manera rpida. Como se muestra en la figura.
La hoja que estaba en la oscuridad no se tio de color violeta oscuro debido a
que ya no contena almidn.
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VII.

CONCLUSIONES.
Al encerrar a la hoja se priva de realizar fotosntesis ya que est en la
oscuridad y no podr continuar a las siguientes reacciones, como para que
dicha planta sintetice almidn.
La planta ya no sintetiza almidn porque ha estado en ausencia de luz y
todas sus reservas que ha tenido, lo ha consumido o se ha alimentado
durante el tiempo de estar encerrada.
Se ha demostrado que en ausencia de luz no sintetiza almidn, ya que no
realiza fotosntesis.
Tambin se ha demostrado el manejo de tcnicas para eliminar la clorofila. Ya
que estas hojas al ser hervidas en agua y alcohol decolora a las hojas porque
este alcohol extrajo la clorofila.

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