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LABORATRIO DE BIOQUMICA
AULA PRRICA
REAES QUALITATIVAS PARA AMINOCIDOS E PROTENAS
Profa. Dra. Giovana Cristina Giannesi
Objetivo: Identificar e caracterizar diferentes aminocidos e protenas atravs de reaes
especficas.
1 REAO COM BIURETO
Fundamento terico: O Biureto um reagente analtico, composto de Hidrxido de
Sdio (NaOH 2,5N) e sulfato de cobre 1% (CuSO4).
A reao do Biureto detectar a presena de ligaes peptdicas, dando positiva
para protenas e peptdeos com trs ou mais resduos de aminocidos. A reao
tambm positiva para substncias que contm 2 carbonilas (-CONH2) ligadas
diretamente ou atravs de um nico tomo de carbono ou nitrognio.
Os compostos com duas ou mais ligaes peptdicas atingem uma colorao
violeta quando submetidos a uma soluo diluda de sulfato de cobre em meio alcalino.
A intensidade da cor varia com a concentrao de protenas. Nesse exerccio, o tubo de
ensaio com gua destilada foi utilizado como tubo controle, uma vez que a gua no
contm protenas.
Uma ligao
peptdica ocorre
entre
duas molculas quando
o
grupo carboxilo de uma molcula reage com o grupo amina de outra molcula,
liberando uma molcula de gua ( H2O ). Isto uma reao de sntese
por desidratao que ocorre entre molculas de aminocidos.
Dependendo da complexidade da protena ou do peptdeo em questo, a cor do
produto de reao a presena do Biureto varia substancialmente: protenas do
colorao violeta, peptdeos do colorao rosa.
Para que a reao ao Biureto seja positiva h necessidade da presena de pelo
menos duas ligaes peptdicas na molcula, portanto, aminocidos e dipeptdeos no
apresentam reao positiva ao Biureto.
O tubo contendo gua destilada no qual no ocorreu reao (resultado
negativo), serve de referncia para os tubos restantes, concluindo-se que os tubos cuja
reao foi semelhante do biureto com a gua destilada, e teve resultado final negativo.
Por outro lado, nos tubos que ocorreram reaes diferentes da gua destilada
quando se adicionou biureto, ou seja, apresentara uma colorao violeta ou bem mais
escura que o azul plido apresentado na reao com a gua destilada, considerou-se
resultado final positivo.
Objetivo : Esta prtica teve como objetivos detectar a presena de ligaes
peptdicas.
Reativos: Foram utilizados:
- Biureto (1mL de NaOH 2,5 + 1mL de Sulfato de Cobre);
- gua destilada;
- leite;
- clara de ovo;
- glicina ;
- triptofano e
- albumina.
Tcnica : (5 tubos)
Tubo 1: 1mL de gua destilada;
Tubo 2: 1mL de glicna 1%;
Tubo 3: 1mL de leite;
Tubo 4: 1mL de clara de ovo;
Tubo 5: 1mL de albumina 1%.
Foi adicionado em cada tubo, aproximadamente 1mL do reagente de biureto,
agitando-se continuamente.
Resultados:
Tubo 1: Resultado NEGATIVO Colorao azul muito plida. A gua no
tem componentes de protenas em sua composio.
Tubo 2: Resultado NEGATIVO Colorao azul um pouco mais escura que
no tubo 1 Glicina um aminocido portanto, sem ligaes peptdicas.
Tubo 3: Resultado POSITIVO Colorao prpura. O leite apresenta
vrias protenas em sua composio.
Tubo 4: Resultado POSITIVO Colorao prpura A Clara de ovo contm
protenas (albumina, inclusive) que apresentam ligaes peptdicas.
Tubo 5: Resultado POSITIVO Colorao prpura A albumina uma
protena cujos aminocidos formam uma cadeia por ligaes peptdicas.
2 REAO DE NINHIDRINA
Fundamento terico: A ninhidrina (2,2-diidroxi-hidrindeno-1,3-diona) um poderoso
agente oxidante que reage com grupo de amino livres de aminocidos, peptdeos e
protenas desde que o pH da soluo esteja entre 4 e 8. A reao dos aminocidos com a
ninhidrina origina um composto de cor prpura de Ruherman no geral, e amarelo para a
prolina, no apresentando sempre a mesma intensidade de colorao.
A ninhidrina comumente usada para detectar impresses digitais, j que, graas
a sua reao com os aminogrupos terminais das molculas de lisina incorporadas nas
protenas ou peptdeos, suficientemente sensvel para revelar resduos de pele.
Objetivo : Esta prtica teve como objetivos caracterizar a presena de aminas livres.
Reativos: Foram utilizados:
- Ninhidrina;
- leite;
- clara de ovo diluda;
- albumina 1%;
- prolina 1%;
- glicina 1%;
- fenilanina 1%.
Tcnica : (6 tubos) Em cada tubo de ensaio foi pipetado 1mL da soluo de ninhidrina e
adicionado 1mL de cada um dos reagentes descritos abaixo:
Tubo 1: 1mL de gua destilada;
Tubo 2: 1mL de leite;
Tubo 3: 1mL de clara de ovo diluda;
Tubo 4: 1mL de prolina 1%;
Tubo 5: 1mL de glicina 1%;
Tubo 6: 1mL de albumina 1%.
Foi adicionado em cada tubo, aproximadamente 1mL do reagente de nihidrina,
agitando-se continuamente e fervendo em seguida por alguns minutos em
banho-maria, at o aparecimento da cor.
Resultados:
Tubo 1: Resultado NEGATIVO A gua no apresenta aminocidos em sua
composio.
Tubo 2: Resultado POSITIVO Colorao roxo O leite apresenta aminas
livres em sua composio proteica. Aquecendo-se uma protena e depois adicionando-se
a nihidrina forma-se uma colorao azul por causa da reao desse reagente com os
aminocidos presentes na protena.
Tubo 3: Resultado POSITIVO Colorao lilz. Como o leite, a clara de
ovo apresenta vrias protenas em sua composio, inclusive albumina.
Tubo 4: Resultado POSITIVO Colorao amarela A prolina um
dos aminocidos codificados pelo cdigo gentico, sendo portanto um dos componentes
das protenas dos seres vivos. Diferencia-se dos demais aminocidos devido ao fato de
possuir uma estrutura quimicamente coesa e rgida, sendo mesmo o aminocido mais
rgido dos vinte que so codificados geneticamente. A sua estrutura anelar confere-lhe
ainda a classificao de iminocido, j que a sua estrutura resulta da ligao do terminal
alfa-amina (NH2) cadeia varivel aliftica e forma um produto amarelo na reao com
a ninhidrina.
Tubo 5: Resultado POSITIVO Colorao prpura
aminocido portanto apresenta aminas livres.
A Glicina um
3 REAO XANTOPROTEICA
Fundamento terico: As protenas que possuem grupamento fenil (-C6H5); reagem
com HNO3 formando compostos fortemente coloridos.
Objetivo : Esta prtica teve como objetivos identificar aminocidos com grupo
aromtico (cadeias laterai).
Bibliografia:
- http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S010046702002000200006&script=sci_abstract&tlng=pt
-
http://www.nupel.uem.br/pasteurizacao.pdf