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Unidad Acadmica de Ciencias Naturales.

Lic. Q.F.B. 601

IDENTIFICACIN BIOQUMICA DE CHLAMYDIA TRACOMATIS.

ARELLANO LUNA JESS ABEL, CELIS ALONSO ISAMAR, GMEZ CASTILLO HORTENCIA
LORENA, SANTOS SALVADOR CRISTIAN AMIZRAIM.
RESUMEN
Antecedentes: El clamidias phylum reagrupa obligados patgenos bacterianos intracelulares
gramnegativos
de
humanos
y
animales. Este
phylum
se
subdivide
en
tres
familias. El Chlamydiaceae familia incluye las principales especies patgeno humano Chlamydia
trachomatis y Chlamydia pneumoniae , que son respectivamente res pons ables de infecciones
oculares y genitales (Schachter, 1999 ). El estudio del patgeno principalmente se desarrolla en el
aparato
genit ourinario
y
ocular,
son
bacterias
de
transmisin
sexual.
Objetivo: Buscar una prueba capaz de identificar caractersticas metablicas: de pruebas
bioqumicas diferenciales al microorganismo, con la realizacin presente de un medio.
Resultados:
Conclusiones:
Palabras clave : Chlamydia trachomatis, caractersticas metablicas, infecciones, patgeno,
pruebas bioqumicas.
ABSTRACT
Background: Chlamydia phylum regroups forced intracellular gram-negative bacterial pathogens of
humans and animals . This phylum is divided into three families. The Chlamydiaceae family
includes major human pathogen species Chlamydia trachomatis and Chlamydia pneumoniae ,
which are respectively responsible for ocular and genital infections ( Schachter , 1999 ) . The study
of the pathogen mainly develops in the eye and genitourinary tract, are sexually transmitted
bacteria .
Objective : Find a test capable of identifying metabolic characteristics : differential biochemical
tests the microorganism, with the present embodiment of a medium.
Results :
Conclusions :
Keywords : Chlamydia trachomatis, metabolic characteristics , infections, pathogen, biochemical
tests.

El Clamidias phylum
reagrupa
obligados patgenos bacterianos
intracelulares
gramnegativos
de
humanos y animales. Este phylum se
subdivide
en
tres
familias. El chlamydiaceae familia
incluye las principales especies
patgeno
humano chlamydia
trachomatis y
chlamydia
pneumoniae ,
que
son

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respectivamente responsables de
infecciones oculares y genitales
(Schachter, 1999 ).
Fisiologa y estructura:
Bacilos gramnegativos pequeos sin
capa de peptidoglucanos en su pared
celular y forma esferoidal.
Parsitos intracelulares estrictos en el
ser humano (Ortiz, & Snchez, 2003.)

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Dos formas distintas: Cuerpos

elementales infecciosos y cuerpos
reticulares no infecciosos (Ortiz, &
Snchez, 2003.)
El antgeno de lipopolisacrido (LPS)
lo comparte con otras especies.
Dos blovariates se asocian a
enfermedad en el ser humano:
tracoma (15 serotipos) y linfoma
granuloso
venreo
(LGV;
4
serotipos). Serotipo D y K se asocian
con lo genitourinario. (Ortiz, &
Snchez, 2003.)
Infecta a clulas epiteliales cilndricas
no
ciliadas,
cuboideales
y
transicionales. (Rodrguez, y et al,
2014).
Virulencias:
Replicacin intracelular
Evita la fusin del fagosoma con los
lisosomas
celulares
proceso
desconocido. (Byrne, & Ojcius, 2004.)
Los efectos patolgicos del tracoma
se deben a las infecciones repetidas.
(MURRAY, 2006.)
Patologa e Inmunidad:
C. tracomatis y sus receptores CE
(colonias elementales se restringe
fundamentalmente clulas del epitelio
cilndrico no ciliado, cuboideal y de la
translocacin de las membranas
mucosas de la uretra, el endocrvix,
el endometrio, las trompas de
Falopio, el ano, y el recto. (MURRAY,
2006.)
Clamidia forma infeccin
1) la
destruccin directa de las clulas
durante la replicacin y 2) la
respuesta inflamatoria del organismo
anfitrin. Las
lesiones
pueden
volverse necrticas, atrae leucocitos
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PMN
B
CD4+
y
TCD8+,
desencadenan
un
proceso
inflamatorio entre citosinas, IL-2, IL-6
y IL-8. La presencia de No-LGV de C.
trachomatis
estimula
respuesta
inflamatoria
grave
neutrfilos,
linfocitos y clulas plasmticas.
(Byrne, & Ojcius, 2004).
La replicacin en las clulas ocurre:
1. Acceden a atreves de abraciones o
laceraciones por adherencia.
2. Ingestin intracelular en el
fagosoma
donde
ocurre
una
reorganizacin en el CR (cuerpos
reticulados) en el fagosoma.
3. Crecimiento por fisin binaria 24
horas.
4. Reorganizacin CE junto la
inclusin contiene CE y CR.
5. Liberacin de los CE de las
clamidias,
contina
una
reorganizacin y la eliminacin de la
masa por endocitosis
inversa.
(Byrne, & Ojcius, 2004).

Imagen 1 ciclo reproductivo (Byrne, &

Ojcius, 2004).
Ruta metablica
Las clamidias son bacterias aerobias,
que utilizan el glutamato como fuente

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primaria de carbono complementada

por la glucosa-2-oxoglutarato. Las
clamidias necesitan ATP de la clula
husped, sin embargo en el anlisis
de la secuencia del genoma se
observ que presentan genes que
codifican ADP/ ATP translocasas,
ATPasa
vacuolar
y
ATPasas
flagelares, que probablemente estn
involucradas en la sntesis ATP. Su
pared
celular
carece
de
peptidoglucano como el presente en
las bacterias Gram negativas, sin
embargo contiene
D-alanina
y
carbohidratos adems de pptidos
enlazados a grupos sulfhidrilo. El
lipopolisacrido (LPS) contiene el
antgeno O, su estructura es similar al
del LPS rugoso que se encuentra en
algunas bacterias entricas. Los
cuerpos elementales se liberan de las
clulas del husped al final del ciclo
de infeccin e invaden nuevas clulas
blanco. Una vez dentro de estas
clulas, las clamidias se transforman
en cuerpos reticulares, cuyo dimetro
es de 0.6 a 1.0 m.11 Estos cuerpos
reticulares
tienen
actividad
metablica y se multiplican dentro de
las
vacuolas
formadas
por
endocitosis en las clulas del
husped. Los cuerpos reticulares
carecen de ciclo de Krebs, por lo que
deben tomar su trifosfato de
adenosina (ATP) en forma directa de
la clula husped
Epidemiologa:
Son bacterias de transmisin sexual
ms frecuentes en EE.UU. El tracoma
ocular tiene una distribucin universal
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(ms frecuente en Oriente Medio, el

norte de frica, India,) con desarrollo
de ceguera en 7 a 9 millones de
individuos (Schachter, 1999).
EL LGV es prevalente en frica, Asia
y Sudamrica. (Schachter, 1999).
Manifestaciones Clnicas
Las infecciones por C. trachomatis se
pueden dividir en 3 categoras:
tracoma, LGV e infeccin culo
genital, incluyendo la infeccin
perinatal.
Tracoma.
Clnicamente
la
enfermedad del tracoma se produce
por los serovares A, B/Ba y C de
C. trachomatis, y puede dividirse en 2
etapas: fase aguda o tracoma activo y
fase crnica. La fase aguda es ms
frecuente en nios mientras que la
fase crnica es ms comn en
adultos jvenes. La fase aguda, cuyo
perodo de incubacin oscila entre 512 das, se caracteriza por una
conjuntivitis folicular de la conjuntiva
tarsal
(prpado
superior),
acompaada de
una descarga
mucoide o mnimamente acuosa.
Esta etapa inicial puede resolverse
espontneamente,
aunque
son
frecuentes las sobreinfecciones por
Haemophilus influenzae, adenovirus
o Molluscum contagiosum. El cuadro
evoluciona hacia un incremento de la
respuesta inflamatoria que causa
hinchazn y edema del prpado.
Este es muchas veces el primer
signo de la enfermedad. Si no se
instaura tratamiento, la enfermedad
evoluciona hacia la fase crnica,
apareciendo
cicatrices
en
la
conjuntiva. Las cicatrices pueden
deformar el prpado, y las pestaas
entran en contacto con el globo
ocular, dando como resultado una

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abrasin (triquiasis). Este dao

crnico de la crnea genera prdida
de visin y ceguera en ltimo trmino.
La OMS promueve la lucha contra el
tracoma
bajo
un
enfoque
multidisciplinar que implica la ciruga,
la distribucin masiva de antibiticos,
el fomento de la higiene facial y
mejoras medioambientales. Estas
intervenciones se han asociado con
reducciones significativas en la
prevalencia de la enfermedad activa
en los ltimos 20 aos, pero sigue
habiendo un gran nmero de
personas con triquiasis que estn en
riesgo de desarrollar ceguera.
(Arango, Mattar, Visbal 2001)
Linfogranuloma venreo (LGV). El
LGV es una enfermedad de
transmisin sexual causada por los
serovares
L1,
L2
(y
sus
genovariantes
recientemente
descritas 2a, 2b, 2c, 2d, 2e, 2f y 2g) y
L3 de C. trachomatis, que causa una
infeccin
sistmica
(se
puede
recuperar de la sangre o del
LCR) que implica invasin de los
nodos
linfoides
(causando
linfadenitis). Clnicamente pueden
diferenciarse tres fases: La primera
etapa (3-30 das despus de la
prctica de riesgo) se caracteriza por
una lesin o lesiones ulcerativas o
herpetiformes en la mucosa genital o
piel adyacente. Esta lesin inicial
puede ser tambin intrauretral,
cervical o rectal causando uretritis,
cervicitis o proctitis, respectivamente.
Pero generalmente esta etapa suele
ser asintomtica o con muy pocos
sntomas. La segunda etapa se
produce 2-4 semanas despus y se
caracteriza por una linfadenopata
inguinal eritematosa y dolorosa
(bubones), generalmente unilateral.

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Los bubones pueden romperse

espontneamente, drenando pus.
Las
manifestaciones
sistmicas
durante esta etapa son fiebre, dolor
de cabeza, mialgias, etc. (Arango,
Mattar, Visbal 2001)
La
tercera
etapa
implica
complicaciones severas como el
engrosamiento hipertrfico crnico
con ulceracin de los genitales
externos que puede llegar a
elefantiasis e infertilidad.
Debe tenerse en cuenta en el
diagnstico diferencial de otras
infecciones de transmisin sexual
como herpes simple, sfilis, pero
tambin de linfomas y enfermedades
inflamatorias intestinales, como la
enfermedad de Crohn. (Arango,
Mattar, Visbal 2001)
Infeccin culo-genital. Los serovares
D-K
de
C.
trachomatis
y
ocasionalmente B y Ba producen una
amplia variedad de infecciones culogenitales. Estas pueden diferenciarse
en infecciones en el hombre adulto:
uretritis (y sus complicaciones como
epididimitis
y
artritis
reactiva
incluyendo el sndrome de Reiter),
proctitis y conjuntivitis, infecciones en
la mujer adulta: cervicitis (y sus
complicaciones como endometritis,
salpingitis y peritonitis o perihepatitis),
proctitis, uretritis y conjuntivitis y en
caso de mujeres embarazadas
responsable de partos prematuros, e
infecciones en el recin nacido en el
que
producen
conjuntivitis
y
neumona. (Arango, Mattar, Visbal
2001)
Diagnstico:
El cultivo es muy especfico pero
relativamente insensible.

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Las pruebas de antgeno (DFA,

ELISA) son relativamente insensibles
serolgicas
con
anticuerpos
monoclonales
Anti-Clhamydia
trachomatis
IgG
(RodrguezDomnguez, 2014).
La ampliacin molecular son las ms
sensibles y especficas de las cuales
100% efectivas para el diagnstico
(Ortiz, 2003).
Deteccin directa de Chlamydia
trachomatis.
Los cuerpos de inclusin de
Chlamydia
trachomatis
que
histricamente se han coloreado con
yodo, Giemsa y Gram, contiene
glucgeno. Para colorearlos es
necesario incubar 48 a 72 horas los
cubreobjetos, luego son extrados y
coloreados. Si hay presencia de gran
cantidad de cuerpos de inclusin de
Chlamydias, el diagnostico puede
establecer con facilidad por los
mtodos de coloracin de Giemsa,
que permiten distinguir las inclusiones
por su color de reaccin, morfologa y
localizacin. Las inclusiones se
ubican en el citoplasma de las clulas
epiteliales y tienen a menudo una
ubicacin perinuclear; sin embargo,
se requieren
un microscopista
especializado, la coloracin de Gram
no es especfica, pues presenta
muchas variaciones. La tincin con
yodo tiene dificultades pues el
glucgeno est presente solo en
algunas fases del desarrollo del ciclo
de la Chlamydia trachomatis y
algunas celular normales de la cerviz
contienen glucgeno, dando falsos
positivos. En las clulas epiteliales
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del raspado conjuntival tenido con

anticuerpos fluorescentes o con
Giemsa se encuentran las inclusiones
citoplasmticas tpicas. Esta tcnica
es ms sensible para el diagnstico
de las infecciones oculares en el
recin nacido y en uretritis que para
el diagnstico de las infecciones
cervicales (Byrne, 2004).
Tratamiento prevencin y control:
EL LGV, y en parejas infrtiles se
trata con tetraciclinas, macrlidos o
sulfisoxazol
(Ruiz,
Merino,
&
Gonzlez, 2012).
Las infecciones oculares o genitales
se tratan con acitromicina o
doxiciclina. (Ruiz-2012).
La conjuntivitis y la neumona del
recin
nacido
se
tratan con
eritromicina.
(Ruiz,
Merino,
&
Gonzlez, 2012).
Las prcticas sexuales seguras y el
tratamiento precoz de las parejas
sexuales ayudan al control de las
infecciones (Ortiz, & Snchez, 2003).
DFA, anticuerpo fluorescente directo;
ELISA inmunoanalisis de absorcin
ligado a enzimas (MURRAY, 2006).
Metodologa:
Prueba bioqumica de rojo de
metilo.
PRINCIPIO
A. Probar la capacidad de un
microorganismo para producir y
mantener estables los productos
finales cidos a partir de la
fermentacin de la glucosa y para
vencer la capacidad buffer del
sistema (MAC FADDIN-1980).
B. Esta es una prueba cuantitativa
para la produccin de cido
(determinacin de pH): algunos

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microorganismos
producen
ms
cidos que otros (MAC FADDIN1980).
Fundamento
La prueba de rojo de metilo (MR) es
una prueba cuantitativa basada e n el
uso de un indicador de pH, el rojo de
metilo,
para
determinar
la
concentracin de ion hidrogeno (pH)
cuando un microorganismo fermenta
la glucosa). La concentracin de ion
hidrogeno depende de la relacin de
gases (C02 y H2 ). Lo que a su vez es
un ndice de las diferentes vas
metablicas de la glucosa exhibidas
por los diversos microorganismos.
Los
diferentes
patrones
de
fermentacin se deben a las
variaciones
en
las
enzimas
relacionadas con el metabolismo del
cido pirvico en el microorganismo.
Todos los miembros de la familia
Enterobacteriaceae
son
por
definicin, fermentadores de la
glucosa en el caldo MR/VogesProskauer (VP). Despus de 18-24 h
de incubacin, la fermentacin
resultante
produce
derivados
metablicos cidos: en consecuencia,
en
un
comienzo
todos
los
microorganismos entricos. Si se
prueban, darn una reaccin rojo de
metilo positiva. Sin embargo, luego
de una incubacin requerida para el
procedimiento
(2-5
das),
los
microorganismos rojo de metilopositivos continan con la produccin
de cidos, lo que origina un pH
terminal bajo que vence el sistema de
buffer fosfato y mantiene un ambiente
acido en el medio de prueba (pH 4,2
o menor) (MAC FADDIN-1980).
Los microorganismos rojos de metilo
negativos metabolizan an ms los

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productos de fermentacin iniciales

por descarboxilacin para producir
acetilmetilcarbinol neutro (acetoina).
que produce una disminucin de la
acidez en el medio y eleva el pH
hacia la neutralidad (pH 6 o mayor)
(MAC FADDIN-1980).
Interpretacin:
A. MR positivo (+): el cultivo es
suficientemente acido para permitir
que el reactivo rojo de metilo
permanezca con un color distintivo
rojo brillante, estable (pH 4.4), en la
superficie
del
medio.
Los
microorganismos
MR-positivos
producen ms cidos con un pH
resultante terminal bajo. Ellos vencen
el sistema buffer fosfato y mantienen
una acidez en el medio (pH 4,2 o
menor) (MAC FADDIN-1980).
B. MR negativo (-): color amarillo (pH
6) en la superficie del medio.
C. Reaccin tarda (- +): el color
naranja
rojizo
indica
que
el
microorganismo
produce
menos
acido a partir del sustrato de prueba.
continuar la incubacin hasta 4 das y
repetir la prueba. (MAC FADDIN1980).
Resultados:
Discusin:
Conclusin:
Referencias:

1. Arango, A., Mattar, S., &

Visbal, J. (2001). Chlamydia
trachomatis:
Aspectos
microbiolgicos, clnicos y
epidemiolgicos.
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causadas
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