04/09/2015

Propiedades moleculares de las subclases

de IgG humanas y sus implicaciones en el
diseo de anticuerpos monoclonales
teraputicos contra enfermedades
infecciosas
GRUPO 2
Andrade Aguilar Jess
Castillo Caballero Andrs
Florres Valdes Paola

ELSEVIER
Elsevier es la mayor editorial de libros de
medicina y literatura cientfica del mundo.
Forma parte del grupo Reed Elsevier y fue
fundada en 1880. Con base en msterdam,
la empresa tiene subsidiarias en el Reino
Unido, Estados Unidos, Mxico, Brasil,
Espaa y en el resto del mundo.

ORIGEN
Elsevier tom ste nombre de una
tradicional editorial holandesa de nombre
House of Elzevir (Casa de Elzevir). La familia
Elzevir tena operaciones de venta de libros y
editorial en los Pases Bajos. Su fundador,
Lodewijk Elzevir, (15421617) vivi en Leiden
y estableci su negocio en 1580. La empresa
moderna fue fundada en 1880.

AGENDA
1.-INTRODUCCION
2.-PROPIEDADES MOLECULARES DE LAS
SUBCLASES DE IGG RELEVANTES PARA
ANTICUERPOS TERAPUTICOS
3.-ANTICUERPOS TERAPUTICOS PARA
ENFERMEDADES INFECCIOSAS
4.-SELECCIN DE SUBCLASES DE IGG PARA LAS
THAB CONTRA ENFERMEDADES INFECCIOSAS.
5. CONCLUSIONES

Hay un amplio repertorio de ThAb monoclonales licenciados, cientos en desarrollo

preclinico y clinico

1. INTRODUCCION

Para tratar cncer, desrdenes autoinmunes y transplantes

Emil von
Behring

Descubrimiento
de antitoxinas
para difteria,
ttano y ntrax
(1901)

Con objetivo infecciosos: Palivizumab (virus sincital respiratorio humano)

y Raxibacumab ( Bacillus anthracis)
Da
descubrimiento
de anticuerpos

Mayoria son de tamao completo en vez de fragmentos Fab (por mayor

vida media en suero por interaccion con FcRn, efecto o funcion mejorados)

IgG muestra funciones efectores potentes

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AGENDA

No existen ThAb de IgG3 aprobadas

Muchos alotipos de
IgG3 entre diferentes
poblaciones

Proteolisis
aumentada

Reducida vida
media en suero
comparada con
otras especies

1.-INTRODUCCION
2.-PROPIEDADES MOLECULARES DE LAS
SUBCLASES DE IGG RELEVANTES PARA
ANTICUERPOS TERAPUTICOS
3.-ANTICUERPOS TERAPUTICOS PARA
ENFERMEDADES INFECCIOSAS
4.-SELECCIN DE SUBCLASES DE IGG PARA LAS
THAB CONTRA ENFERMEDADES INFECCIOSAS.
5. CONCLUSIONES

Citotoxicidad
celular
dependiente
de anticuerpos
(ADCC)

2. Propiedades
moleculares de
las subclases de
IgG relevantes
para anticuerpos
teraputicos

Fc interactua con
una variedad de
moleculas para
mediar funciones
efectoras
indirectas

IgG

2 cadenas
pesadas

Citotoxicidad
dependiente
de
complemento
(CDC)

2 cadenas
ligeras
Inmunologa bsica + StudentConsult + StudentConsult en espaol Funciones y
trastornos del sistema inmunitario (Spanish Edition)_nodrm

2.1. Sitio de union enGgG- Fc para

FcgammaRs activadoras e inhibidoras

Fab

Receptores
activadores

Contiene al paratope

Bloqueando una
proteina de
reconocimiento del
hospedero

Fagocitosis
celular
dependiente
de anticuerpos
( ADCP)

Inhibiendo una toxina

o enzima de un
patogeno

Cadenas pesadas comparten ms del 90% de identidad entre subclases de IgG

Diferencias en residuos expuestos en la superficie en los dominios constantes
(CH1, CH2, CH3)

FcgammaRI (CD64)
FcgammaRIIa (CD32a)

Receptores
inhibidores

FcgammaRIIb
(CD32b)

FcgammaRIIc (CD32c)
FcgammaRIIIa (CD16a)
FcgammaRIIIb (CD16b)

Variacion en la region bisagra ( estabilidad, flexibilidad y distancias abarcadas

por dos Fab y Fc acomodadora

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EJEMPLO
FcgammaRIIIa es el mayor
involucrado en activacion
de ADCC

IgG3 (1)e IgG1(2) tiene

afinidad

Union por
glicosilacin en
N297
Partes de CH2

Region bisagra

Region de union FcgammaR

2.2. Deposicin del complemento y

CDC por IgG
CLASICO: IgG + antigeno = complejos inmunes

C1 y dan reacciones enzimaticas

Formacion del complejo de ataque de

membrana y CDC

Deposicion de C1q (union

a IgG-Fc) ocurre conn IgG1,
2 y 3(+ efectiva). IgG4 no
es capaz de interactuar

Union de IgG1 dominio

CH2

Eliminacion del patogeno

Activdad para inducir

potencialmente ADCC

Identificados por

Cristalografa de rayos X de
complejos de IgG1-Fc con
diferentes FCgammaRs

2.3. La union de IgG a FcRn determina

vida media y transporte de la placenta
IgG2 es
menos
eficiente en
el
transporte
placentario

Fcrn tiene
homologia
estructural con
MHC I y participa
en presentacion
de antigenos

Sitio de union FcRn en IgG

Union entre CH2 y CH3

Rica en histidina (H310 y
H435 actuan como sensor
de pH)

Arginina (435) que

sustituye a la histidina

Tomografia crioelectron

Antigeno unido a IgG1 tiene

estructura h7examerica que
interactua con hexamero de C1q

IgG3 vida
media corta
(7d)

Union IgG3
a FcRn
puede ser
inhibida
por IgG1

Union IgG3
a FcRn
puede ser
inhibida
por IgG1

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2.4. La glicosilacion de IgG-Fc impacta

en la funcion efectora

2.5. Alotipos de subclases de IgG

Cadenas pesadas
de IgG (Gm)

Polimorfismos
N-glicanos en Fc son
estructuras complejas(
di-antenarios con
nucleco 1-6 fucosilacion
del residuo N-acetil
g4lucosamida

IgG sitio de
glicosilacion
conservados en
N297 en CH2

IgG1

IgG2

IgG3

13

IgG4

Alotipo de un ThAb puede

contribuir a resistencia a la
terapia asociada a respustas
inmunes anti-Thab

No asociacion significativa entre

alotipo de IgG

ESTUDIOS
Edad, embarazo, enfermedad inflamatoria e
infeccion

Aparacion de respuestas de
anticuerpos antimonoclonales

2.6. La subclase de IgG y la ingenieria

de Fc

EJEMPLO

Extirpacion de
funciones efectoras

Produccion de IgG2 +
resudios de IgG4
Produccion de IgG3 con residuos procedentes de
otras sublclases para aumentar vida media

Evaluacion de mutantes de alanina

Complementa con
otros metodos

Metodos de cribado de alto rendimiento computacionales

Resolucion de estructura de los dominios Fc mutados

Anticuerpos de Fc se han
modificados

AGENDA
1.-INTRODUCCION
2.-PROPIEDADES MOLECULARES DE LAS
SUBCLASES DE IGG RELEVANTES PARA
ANTICUERPOS TERAPUTICOS
3.-ANTICUERPOS TERAPUTICOS PARA
ENFERMEDADES INFECCIOSAS
4.-SELECCIN DE SUBCLASES DE IGG PARA LAS
THAB CONTRA ENFERMEDADES INFECCIOSAS.
5. CONCLUSIONES

Eliminar sitios de proteolisis bacteriana

(modo de evasion inmune)

3.Anticuerpos
terapeuticos para
enfermedades infecciosas

3.1. Anticuerpos terapeuticos para

enfermedades infecciosas

Fracciones de Ig
purificadas de
donantes

Via IV, IM, ISC

Suero humano
agrupado
ThAb
Anticuerpos
monoclonales
recombinantes

Naturaleza
policlonal de IgG
combinada
focalizacion de
multiples
epitopos

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Policlonales

Monoclonales

Contaminacion

Costo

Estandarizacion

Produccion en masa

Eficacia

Poca por dilucion de

anticuerpos funcionales

Rubeola

Varicela
Hepatitis A

3.2. Relevancia de subclases de IgG en

enfermedades infecciosas
Respuestas de subclases pueden diferir de acuerdo
con el patogeno, antigeno o epitopo

Fiebre del dengue

(no medicamentos o
vacunas licenciadas solo
tratamiento de apoyo)

Hepatitis B

Sindromes clinicos ms comunes: Deficiencia de IgG2

( + infecciones por B. encapsuladas) y deficiencia de
IgG3 (Infecciones respiratorias recurrentes)

Virus respiratorio sincitial

Citomegalovirus
Tetano
Sarampion
Rabio

3.3. ThAb monoclonal en las

enfermedades infecciosas en desarrollo

Aplican a

Mayoria de ThAb en desarrollo -> cimiento IgG1 humano con ausencia de otras subclases

Configuracion especifica para tener esporas, toxina o

biopeliculas
Entornos clinicos
Falta de opciones de tratamiento disponibles
Terapias adjuntas que tienen funciones
antiinflamatorias o inmunomoduladoras

Limitaciones

Subclases de IgG en
el desarrollo de
Yhh7Ab es
infravolarado

Caracterizacion especifica de Ab
monoclonal con respecto a los objetivos de
los epitopos y rptas efectoras funcionales
Necesidad de la administracion parental
Costos
Capacidad

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AGENDA
1.-INTRODUCCION
2.-PROPIEDADES MOLECULARES DE LAS
SUBCLASES DE IGG RELEVANTES PARA
ANTICUERPOS TERAPUTICOS
3.-ANTICUERPOS TERAPUTICOS PARA
ENFERMEDADES INFECCIOSAS
4.-SELECCIN DE SUBCLASES DE IGG PARA LAS
THAB CONTRA ENFERMEDADES INFECCIOSAS.
5. CONCLUSIONES

4.1. Subclases y respuesta natural

inmune
Respuestas varian segn edad y genero
Principalmente IgG1 e
IgG3 respuesta
Principalmente
inmune contra VIH, v.
IgG4 S.
del bola, Coxiella
mansoni
burnetii, P. falciparum

4.2. Valoracion funcional de las subclases

aisladas de la respuesta inmune innata

Entre anticuerpos que reflejan exposicion

y que median proteccion funcional

Ensayos funcionales patogeno-especificos

in vitro pueden ser informativos.

Predominancia de
IgG2 con reducidas
cantidades de IgG1 e
IgG3 respuesta de
Ig a polisacaridos
bacterianos

ENSAYO RECIENTE

Comparo subclase
purificada de Ab en un
ensayo de neutralizacion
del Herpes simplre

IgG3 e IgG4 tienen mayor

capacidad de neutrlizar

Incluso cuando no fueron

predominantes

Estudios similares
Estudios similares

Para el VIH,
purificarion IgG1 e
IgG3

IgG3 mas efectivo en

VIH-1 cuando se
usaron muestras
conjugadas

Respuestas contra
enterovirus 71 humano

No se evidencio en
muestras individuales

Uso fracciones
especificas de subclases
purificadas de IgG a
partir de Ig agrupadas

Fracciones IgG1 e IgG2

son ms efectivas en la
neutralizacion

IgG3 aumenta la
infeccion

4.3. Variantes en el cambio de

subclases
Usan mismos dominios
variables (son
expresadas en
cimientos de cadenas
pesadas de diferentes
subclases)

Subclase de
ThAb no
siempre es
crucial hay
otros factores
(niveles de
Ab)

Variantes en el cambio
de subclases son
anticuerpos
monoclonales que se
unen al mismo epitopo

4.3.1 El uso de modelos murinos para guiar el

desarrollo de anticuerpos teraputicos

Evaluadas usando subclases

humanas como murina

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Virus (VIH(1), De la fiebre

amarilla(3), Del Nilo Occidental,
De la varicela Zoster(3)

Estudios
utilizaron
humanos, ratas y
ratones

Bacterias ( S. aureus(2), S del

grupo A, B. anthracis, P.
aeruginosa(3), E. coli(3))

Hongos ( C. neoformans(3))

Diferencias:
(1) neutralizacion,
(2) fagocitosis por
opsonizacion ,
(3) estudios funcionales

Parasitos (P. falciparum)

4.3.2. Funciones especficas de subclases varan

de acuerdo a las caractersticas del eptopo
Identificar eptopo objetivos que median la inmunidad funcional

Existen descubrimientos de estudios de variantes de cambio de subclase murinos a humanos,

tales estudios

es

Ser tiles en el desarrollo de ThAb al incrementar el conocimiento de los mecanismos

protectores del SI y por su aplicacin en modelos animales in vivo.

claramente un componente clave en el desarrollo de una ThAb.

ejemplos incluyen

De forma interesante, el impacto de subclases de anticuerpos en

tales eptopos funcionales

Estudios murinos que han indicado que ThAb debe incluir una funcin FcyR para efectivamente
inducir la neutralizacin de la toxina del anthrax y que inducir fagocitosis opsonica

puede

que es
importante que la actv mediada por el complemento para protegerse contra C. neoformans.

objetivo

gp120 han mostrado

tener una habilidad
neutralizadora mayor

variar dramticamente entre eptopos, incluso dentro de los mismos

organismos.

para VIH que sus

contrapartes en
IgG1,

La relacin entre el objetivo especfico de un eptopo

y la subclase de anticuerpos tambin

Por ejemplo, los anticuerpos

monoclonales IgG3 humanos

Depende
pero tales diferencias de subclase
no fueron encontradas en
anticuerpos monoclonales contra
gp41.

densidad de los eptopos y la flexibilidad de diferentes subclases de

anticuerpos para interactuar con dichos eptopos.

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4.3.3. Evaluando las respuestas de subclases

usando ensayos funcionales in vitro

Por ejemplo,
sugiere

estudios usando variantes

de cambio de subclase
contra P. aeruginosa y el
grupo A streptococcus

por tanto
Densidad antignica
influencia fuertemente la
habilidad de algunas
subclases de anticuerpos
para unirse
efectivamente,

Existe necesidad para un grupo mayor de ensayos

funcionales

resaltando la importancia
de investigar respuestas
de subclases usando
ensayos que reflejen la
conformacin nativa
antignica y su densidad.

que pueda

evaluar sistemticamente el rol de subclases de IgG para

muchas enfermedades infecciosas.

El uso de tales evaluaciones funcionales

Existe tambin evidencia que el efecto funcional de diferentes subclases puede variar de
acuerdo a la cepa del organismo, indicando que es importante tambin investigar una
variedad de cepas cuando se desarrolle ThAb.

necesita ser

combinado con la validacin de estas evaluacin como

indicadores de una proteccin in vivo real.

Ensayos funcionales bienvalidados

Estudios en
respuestas de
subclases murinas

C. neoformans
han demostrado
fuertes
contra

determinar si diferentes
subclases de IgG

pueden ser usados para evaluar la habilidad de

algunos anticuerpos

El potencial de interferir con

accin de otras subclases de IgG,

de tener efectos dainos al aumentar la

infeccin,

discrepancias entre ensayos funcionales in vitro y modelos in vivo.

Ej: La proteccin in vivo contra la E.

coli es asociada con la limpieza
mediada por el complemento;
ThAb debera ser evaluada
usando ensayos funcionales que
reflejen este mecanismo.

Sin embargo, P. aeruginosa es capaz

de resistir la lisis mediada por el
complemento,
un ensayo del complemento no
predecira adecuadamente la
proteccin in vivo.

por ejemplo, bloqueando

anticuerpos.

AGENDA
1.-INTRODUCCION
2.-PROPIEDADES MOLECULARES DE LAS
SUBCLASES DE IGG RELEVANTES PARA
ANTICUERPOS TERAPUTICOS
3.-ANTICUERPOS TERAPUTICOS PARA
ENFERMEDADES INFECCIOSAS
4.-SELECCIN DE SUBCLASES DE IGG PARA LAS
THAB CONTRA ENFERMEDADES INFECCIOSAS.
5. CONCLUSIONES

como es observado en el virus del dengue, el

virus del oeste del Nilo, VIH, y hongos
incluyendo Candida albicans y C. neoformans.

5. Conclusiones
ThAb

Existen 40 ThAb con licencia,solo dos con objetivos patgenos

asociados a enfs. infecciosas.
Casi todos los ThAb licenciados y los de desarrollo clnico, tienen
dominio Fc IgG1 humano.
Las rpts de subclase contra infecciones naturales y la estructura funcional
de las 4 subclases de IgG disminuyen la importancia de considerar las
propiedades de subclases cuando se desarrolla y se prueba ThAb.

Existen 36 nuevos ThAb contra enfs. infecciosas en desarrollo

preclnico,campo comparada con el desarrollo en cncer y autoin.
Existe una multitud de conformaciones potenciales para la
aplicacin de ThAb contra enfs. infecciosas y los pros y cons.

04/09/2015

Se debera incluir el estudio de las rptas de anticuerpos naturalmente adquiridas,

anti. derivados del suero, y variantes de cambio de subclase en estudios in vitro
funcionales relevantes y estudios in vivo donde sea apropiado.

Las subclases de IgG tienen efectos diferentes contra patgenos, siendo

singularmente importante al mediar proteccin contra enfermedades.

La ntza del eptopo especfico es importante para respuestas efectivas y

funcionales, y la densidad del eptopo o cepa patgena usada en el ensayo
afecta los resultados.

Los estudios de cambio de subclase y el entendimiento molecular de las

propiedades de las subclases de IgG permitir el desarrollo de ThAb monoclonales
especficos para patgenos.