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1.
Objetivos
Cromatografa en papel:
2. Introduccin
En 1910, el botnico ruso M. Tswett describi por vez primera esta
tcnica, que fue aplicada a la separacin de pigmentos de plantas,
dndole el nombre de cromatografa en referencia a las bandas
coloreadas de pigmentos que se separaban por su adsorcin selectiva
sobre columnas de yeso. Tras su descubrimiento, la cromatografa quedo
prcticamente olvidada hasta 1930 ao en que fue redescubierta por
Kuhn y Lederer, quienes la aplicaron para la separacin de carotenoides;
a partir de este momento, el uso de esta tcnica se fue extendiendo
cada vez ms, al tiempo que se desarrollaban diferentes versiones de la
misma: cromatografa de reparto (Martin y Synge, 1941),de papel
(Consden, Gordon y Martin, 1944), de capa fina (Stahl, 1958), etc. Un
hito importante en el desarrollo de la cromatografa lo constituy el
desarrollo de la cromatografa gas-lquido (Martiny James, 1952), tcnica
que encontr rpidamente aplicaciones de gran importancia, lo que llevo
a su vez al desarrollo de la teora de la separacin cromatogrfica (Van
Deemter, 1956; Giddings, 1965, etc.)
Es la tcnica ms desarrollada en los ltimos aos, empleada en la
qumica analtica.
Su empleo presenta notables ventajas:
1. Es sencilla, rpida y no requiere aparatos complicados.
2. Abarca escalas micro analticas hasta escalas industriales.
3. Es una tcnica poco o nada destructiva que puede aplicarse a
sustancias lbiles.
Constituye una metodologa imprescindible en estudios bioqumicos,
toxicolgicos, estructurales, etc. No solo utilizando como tcnica de
separacin e identificacin, sino como mtodo preparatorio, incluso a
escalas industriales.
3. Fundamento Terico
La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de los
componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos
contrapuestos.
a) Retencin. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla
por una fase estacionaria, que puede ser un slido o un lquido
anclado a un soporte slido.
b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la
mezcla por una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas.
Tipos de cromatografa:
Tcnicas cromatogrficas:
Segn la forma de llevar a cabo la separacin cromatogrfica, es decir,
segn el dispositivo utilizado para conseguir entre la fase mvil y la
estacionaria, cabe distinguir dos tipos de tcnicas cromatogrficas: en
columna y plana.
Cromatografa en columna: Se usa para la separacin de
mezclas de sustancias. La muestra ha separar se deposita
(siembra) en la parte superior de la columna y se va adicionando
la fase mvil o eluyente, el que arrastrar las sustancias hacia
abajo, mientras que la fase fija tratar de retenerlas.
Etapas:
1. Llenado
de
la
columna,
preparar
una
columna
uniformemente compactada, son burbujas de aire ni
rajaduras.
2. La aplicacin de la siembra, se hace con una solucin de la
misma, el solvente usado debe ser de una polaridad similar
al que se va a usar al iniciar la elucin.
3. Elucin o desarrollo,
la muestra que queda debe ser
absorbida por la fase fija. Eluir los compuestos que se
desplazan lentamente usando otro solvente con mayor
polaridad.
1. Aplicacin de la muestra
2. Se sumerge el extremo inferior en la fase mvil
3 a 5. La fase mvil asciende por capilaridad y se va
produciendo la separacin de los componentes
6. Se marca el frente de avance del disolvente y se deja
secar la placa
7. Revelado de los componentes ya separados y medida de
su avance
Cromatografa sobre papel:
La cromatografa en papel es la tcnica de separacin de identificacin
de sustancias qumicas en la cual la fase estacionaria es el agua
absorbida. La fase mvil es una solucin que consiste en u disolvente o
de una mezcla de varios lquidos que contiene agua.
Es la ms sencilla de las tcnicas, pero slo nos dar resultados
cualitativos. Est casi en desuso. El proceso de cromatografa tiene dos
fases distintas: una fase estacionaria y una fase lquida. La
cromatografa en papel es parte de la fase estacionaria. En la
4. Parte Experimental
4.1 Cromatografa en columna
a) Preparacin de la columna:
Introducir un trozo de algodn hasta el fondo de la columna
adicionndole luego 10 ml de Etanol, luego 5g silicagel y por
ltimo 20ml de etanol. Abrir la llave de la columna hasta que
sobrepase 1 mm la superficie del adsorbente.
b) Siembra:
Aadir 2ml de mezcla a separar con etanol, abrir la llave hasta que
todo el colorante sea adsorbido por la fase fija.
c) Elucin:
Adicionndole etanol hasta que se eluya el colorante, luego se
cambia el etanol por agua acidulada para eluir el siguiente
colorante.
d) Comparar el color y aspecto de las fracciones obtenidas.
Rf = a/b
2 3 gotas del
colorante
2 3 gotas de la
mezcla
1.7
cm
5. Discusin
5.1 Cromatografa en columna
Rf = a/b
5.2 Cromatografa en Papel
6. Conclusiones y Recomendaciones
6.1 Cromatografa en columna
Conclusiones
Recomendaciones
7. Bibliografa
8. Apndice
8.1 Cuestionario 1 Cromatografa en columna
1 Cul es la principal utilidad de la cromatografa en
columna?
La cromatografa en columna es el mtodo ms utilizado para la
separacin de compuestos orgnicos. Se emplea para la separacin de
mezclas o purificacin de sustancias a escala preparativa.
La utilidad de la cromatografa en columna se basa en el anlisis, la
separacin o purificacin de sustancias o mezcla de stas a travs de
ciertas tcnicas y mtodos muy eficientes usados en los laboratorios de
qumica.
2 Qu fenmenos fsicos intervienen en una columna
cromatogrfica que utilice silicagel como base fija?
Los fenmenos fsicos que intervienen en la columna cromatografa son
la adsorcin y desorcin. La adsorcin es un proceso mediante el cual se
extrae materia de una fase y se concentra sobre la superficie de otra
fase y desorcin es el proceso inverso a la adsorcin, es la separacin de
las molculas adheridas en la superficie de la fase.
Fenmeno de adsorcin
Colector de fracciones
3. Cite algunas
especialidad
aplicaciones
de
la
cromatografa
en
su
En agronoma /zootecnia/forestal: