INTRODUCCION

El presente trabajo comprende los resultados de la segunda sesin de

laboratorio de bioqumica, que trata sobre los factores en el actividad de las
enzimas.
Las enzimas son catalizadores biolgicos de naturaleza proteica que aceleran
las reacciones que tendrn de manera espontnea sin perderse ni modificarse
en su accin, permitiendo las reacciones bioqumicas celulares indispensables
para los seres vivos.
Las actividades enzimticas se encuentra determinada por la condiciones tales
como la cantidad de enzimas, sustrato, la temperatura el pH, el tiempo de
reaccin, presencia de cofactores, presencia de moduladores, presencia de
inhibidores.

1.1 MARCO TEORICO

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

La eficacia de un enzima se mide por la velocidad de transformacin del
sustrato en producto. La actividad de las enzimas se ve afectada por diversos
factores entre los que destacan los siguientes:

Concentracin del sustrato

En toda reaccin catalizada por un enzima, si se mantiene constante la
concentracin del E, la velocidad de la reaccin aumenta exponencialmente al
incrementarse la concentracin del sustrato, ya que al existir ms molculas de
sustrato es ms probable el encuentro con el enzima y la formacin del
complejo E-S.
Este aumento de velocidad es rpido para concentraciones bajas de sustrato y,
a medida que este aumenta, se va haciendo ms lento hasta que la
concentracin del sustrato alcanza un cierto valor, a partir del cual, aunque
aumente la concentracin del mismo, no aumenta la velocidad de la reaccin.
Esto es debido a que el enzima esta saturada por el sustrato; es decir, todas
las molculas del enzima estn unidas al sustrato formando el complejo E-S.
Cuando ocurre esto, se dice que la reaccin ha alcanzado la velocidad mxima.
FORMULA
Dnde:
V es la velocidad de la reaccin para una determinada concentracin de
sustrato.
V max es la velocidad mxima de la reaccin.
[S] es la concentracin del sustrato.
Km es una constante denominada constante de Michaelis-Menten, es
caracterstica de cada enzima.
Si en la ecuacin (1) hacemos V = Vmax y despejamos Km obtenemos que
Km = [S]
Km. Se puede definir como la concentracin de sustrato necesario para que la
velocidad de la reaccin sea la mitad de la velocidad mxima. Se mide en
unidades de concentracin. El Km nos indica la afinidad de un enzima por su
sustrato:

Si Km es alta indica que el enzima tiene poca afinidad por el sustrato ya que
se necesita una concentracin de sustrato elevada para alcanzar la mitad de la
velocidad mxima.
Si Km es baja indica que el enzima tiene mucha afinidad por el sustrato ya que
se necesita una concentracin de sustrato baja para alcanzar la mitad de la
velocidad mxima.

Temperatura
La T influye en la actividad enzimatica. En general por cada 10C que aumente
la temperatura la velocidad de la reaccin aumenta de 2 a 4 veces. Esta regla
se cumple hasta que la temperatura alcanza un valor mximo (T ptima)
donde la actividad es mxima. Esto se debe a que al aumentar la T aumenta
el movimiento de las molculas y, por tanto aumenta la probabilidad de
encuentro entre el S y el E.
Si la T aumenta por encima de la T ptima, disminuye e incluso cesa la
actividad enzimtica debido a que la enzima se desnaturaliza.
Cada enzima posee una T ptima, en las enzimas humanas suele estar
alrededor de 37C. Los animales poiquilotermos debido a que carecen de
mecanismos para regular la T corporal, se ven obligados a hibernar en la
estacin fra pues la actividad de sus enzimas debido a las bajas temperaturas
es muy baja.

pH
El pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica, debido a que el pH
influye en la ionizacin de los grupos funcionales de los aminocidos que
forman la protena enzimtica. Cada enzima realiza su accin dentro de un
determinado intervalo de pH, dentro de este intervalo habr un pH ptimo
donde la actividad enzimtica ser mxima. Por debajo del pH mnimo o por
encima del pH mximo el enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. En la
mayora de las enzimas el pH ptimo est prximo a la neutralidad, aunque hay
excepciones.

Inhibidores:
Son compuestos qumicos que se unen al enzima, en distintos puntos del
mismo y disminuyen o incluso impiden su actividad. Estos compuestos pueden
ser de distintos tipos: iones, molculas orgnicas y a veces el producto final de
la reaccin. A la accin que realizan se la denomina inhibicin. La inhibicin
puede ser:
Inhibicin irreversible: Cuando el inhibidor impide permanentemente la
actividad enzimtica, bien porque se une de forma permanente con grupos
funcionales importantes del centro activo o bien porque altera su estructura. A
estos inhibidores se les denomina venenos y a la inhibicin que realizan se la
denomina envenenamiento del enzima. Ej. La penicilina que inhibe las enzimas
que sintetizan la pared bacteriana. El ion cianuro acta sobre la citocromo
oxidasa (enzima respiratorio).
Inhibicin reversible: El inhibidor se une al enzima de forma temporal
mediante enlaces dbiles e impide el normal funcionamiento del mismo, pero
no la inutiliza permanentemente.
Puede ser de dos tipos:
Competitiva: El inhibidor es similar al sustrato y se puede unir al centro activo
del enzima impidiendo que lo haga el sustrato. Es decir ambos, inhibidor y
sustrato compiten por unirse al centro activo del enzima. La accin suele
anularse aumentando la concentracin del sustrato

No competitiva: El inhibidor no compite con el sustrato, puede actuar de 2

formas:
-Sobre el enzima, unindose a l en un lugar diferente al centro activo y
modificando su estructura lo que dificulta que el enzima se pueda unir con el
sustrato.
-Sobre el complejo E-S unindose a l y dificultando su desintegracin y por lo
tanto la formacin de los productos.

2.2 MATERIALES

Tubos de ensayo

- Albmina 2%

Gradilla

- Pepsina 1%

Pipetas

- HCl 1N

Beacker

- Agua destilada

2.3 PROCEDIMIENTOS
En una gradilla disponer 8 tubos de prueba de 13 x 100 mm. y proceder
como sigue:
1.

TUBOS

Agua destilada ml.

8.0

7.0

6.0

5.0

4.0

3.0

2.0

HCl 1N

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

6.0

7.0

5.0

ml.

Albmina ml.
Pepsina 1% ml.

1. Leer en el espectrofotmetro a 440 nm, el contenido de los tubos 1, 2, 3,

4, 5, 6 y 7. Anotar las absorbancias (Lectura inicial).
2. Luego, incubar los ocho tubos a 37C durante 5 minutos.
3. Enseguida adicionar 0.5 ml de la pepsina que se encuentra en el Tubo
8, a cada uno de los tubos del 1 al 7. Incubar a 37 C por 10 minutos.
4. Incubar a 37 C por 10 minutos.
5. Retirar y Enfriar
6. Leer nuevamente el contenido de los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 7 en el
espectrofotmetro. (Lectura Final).
Actividad enzimtica = Lectura inicial Lectura Final
El resultado de sta diferencia se considerar como Actividad
Enzimtica.
AE 1=lectura Inicial lectura final=

2.4 RESULTADO

Lectura inicial:

Lectura Final

1.- 0,051
2.-0,339
3.-0,280
4.-0,564
5.- 10,020
6.-1,907
7.-2,498

1.- 0,804
2.- 0,199
3.- 1,685
4.- 1,370
5.- 1,518
6.- 2,466
7.- 2,581

A. E

(1)

(2) (3)

(4) (5)

(6)

(7)

Sustrato

1)
2)
3)
4)
5)
6)
7)

0,051 0,804= -0.753

0,339 0,199= 0.14
0,280 1,685= -1.405
0,564 1,370= -0.806
10,020 1,518= 8.502
1,907 2,466= -0.559
2,498 2,581= -0.083

2.5 CONCLUSIONES
2.6 CUESTIONARIO
1. Graficar en papel milimetrado: la Actividad Enzimtica vs concentracin del sustrato.
2. Por que el hielo en la practica influye en la reaccin enzimtica por que?