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I. INTRODUCCION
Las protenas son macromolculas que contienen nitrgeno, El nombre protena
proviene de la palabra griega ("prota"), que significa "lo primero" o del dios
Proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar.. Son el componente clave de
cualquier organismo vivo y forman parte de cada una de sus clulas y son para
nuestro organismo lo que la madera es para el barco. Cada especie, e incluso entre
individuos de la misma especie, se hallan diferentes protenas, lo que les confiere un
carcter especfico tanto gentico como inmunolgico. La mayor similitud con los
humanos, la encontramos entre los animales mamferos como los bovinos o porcinos
y la menor con las protenas de los moluscos y las de las plantas. Las protenas estn
formadas por: carbono, oxgeno, hidrgeno y nitrgeno fundamentalmente, aunque
tambin podemos encontrar, en alguna de ellas, azufre, fsforo, hierro y cobre. Las
protenas se distinguen de los carbohidratos y de las grasas por contener adems
nitrgeno en su composicin, aproximadamente un 16%.
La parte ms pequea en que pueden dividirse las protenas son los aminocidos.
Estos aminocidos son como las letras del abecedario, que con un nmero
determinado se pueden formar infinidad de palabras. Existen 20 aminocidos y con
ellos se forman todas las protenas. De estos aminocidos 8 son esenciales
(imprescindibles como fenilalanina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, treonina,
triptfano, valina y solo los nios: arginina y la histidina), es decir los tenemos que
ingerir con la dieta ya que nuestro organismo no los puede obtener de ninguna otra
forma. El consumo de protenas es necesario, adems de para aportar todos los
aminocidos esenciales, para cubrir las siguientes funciones:
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II. OBJETIVOS
Reconocer la presencia de algunos aminocidos en las protenas.
Adquirir informacin sobre algunas propiedades fsicas y qumicas de
aminocidos
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vivientes;
muchas hormonas, reguladores de actividades celulares;
la hemoglobina y otras molculas con funciones de transporte en la sangre;
los anticuerpos, encargados de acciones de defensa natural contra infecciones o
agentes extraos;
los receptores de las clulas, a los cuales se fijan molculas capaces de
durante la contraccin;
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el colgeno, integrante de fibras altamente resistentes en tejidos de sostn.
Estructura primaria.
Estructura secundaria.
Nivel de dominio.
Estructura terciaria.
Estructura cuaternaria.
A partir del nivel de dominio slo las hay globulares.
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de
pH
(conocido
como
efecto
tampn):
Actan
como
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aminocidos se combinan en una reaccin de condensacin que libera agua
formando un enlace peptdico. Estos dos "residuos" aminoacdicos forman un
dipptido. Si se une un tercer aminocido se forma un tripptido y as,
sucesivamente, para formar un polipptido. Esta reaccin ocurre de manera natural
en los ribosomas, tanto los que estn libres en el citosol como los asociados al
retculo endoplasmtico.
Todos los aminocidos componentes de las protenas son alfa-aminocidos. Por lo
tanto, estn formados por un carbono alfa unido a un grupo carboxilo, a un grupo
amino, a un hidrgeno y a una cadena (habitualmente denominada R) de estructura
variable, que determina la identidad y las propiedades de los diferentes
aminocidos; existen cientos de cadenas R por lo que se conocen cientos de
aminocidos diferentes, pero slo 20 forman parte de las protenas y tienen
codones especficos en el cdigo gentico.
La unin de varios aminocidos da lugar a cadenas llamadas polipptidos o
simplemente pptidos, que se denominan protenas cuando la cadena polipeptdica
supera los 50 aminocidos o la masa molecular total supera las 5.000 uma
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Cuando una molcula presenta carga neta cero est en su punto isoelctrico. Si
un aminocido tiene un punto isoelctrico de 6,1 su carga neta ser cero cuando
el pH sea 6,1.
Los aminocidos y las protenas se comportan como sustancias tampn.
pticas.
Qumicas.
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Este complejo toma una coloracin caracterstica violeta. La prueba se denomina
Biuret a que la urea calentada por encima de su punto de fusin se descompone en
amoniaco, acido cinico y CNOH, el cual junto con otra molcula de urea forma
Biuret: NH2.CO.NH.CO.NH2, sustancia que con el sulfato de cobre en medio bsico da
la coloracin caracterstica.
O
H2N
NH2
H2N
NH
NH
NH2
HN
NH2
OH
OH
O
H2N
NH3
NH
NH
R
O
O
N
2-
Cu
2Na+
R
CH3
CH3
Curso de la Determinacin
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Protena de
huevo,
carne y
harina
Glicina
(Aminoci
do)
Figura 1.
Discusin de Resultado
Como sabemos la reaccin de Biuret se usa para reconocer el grupo peptdico, por
tanto, sustancias en cuya estructura se halle la presencia de este darn positivo a
esta reaccin (cambio de coloracin a violeta) , por este motivo era de esperarse que
las protenas de huevo, carne y harina den positivo a la reaccin, debido a que las
protenas son compuestos formados por series de aminocidos unidos mediante
enlaces peptdicos, en el caso de la glicina, la respuesta a la reaccin ser negativa
debido a la glicina es un aminocido, no forma un enlace peptdico en su estructura y
por tanto el reactivo de Biuret no forma del complejo (por consiguiente no habr
cambio en la coloracin de la solucin).
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Curso de la Determinacin
En cinco tubos de ensayo se coloc las siguientes muestras: solucin diluida de
protena de huevo, solucin de protena de carne, solucin de protena de harina,
solucin de alanina y - alanina (estos dos ltimos aminocido).
A estos tubos con muestra se les aadi dos gotas de ninhidrina al 0.5% obteniendo
como resultado una coloracin azul (resultado positivo) para las
muestras de:
Figura 2.
Discusin de Resultado
La reaccin con ninhidrina nos ayuda a diferenciar y (u otros) aminocidos en su
forma libre o como grupo amino y su presencia en molculas como las protenas,
fundamentndose en la posicin de este grupo amino. Por tanto podemos decir que
tanto en la solucin diluida de protena de huevo, solucin de protena de carne y
alanina encontramos grupos amino que dan coloracin azul con la ninhidrina,
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ahora si bien podemos decir que en las
Reaccin Xantoproteica
Esta prueba sirve para caracterizar los aminocidos bencnicos. En esta prueba se
produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos tirosina,
fenilalanina y triptfano, obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se
vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formacin del cido pirmico o
trinitrofenol).
La adicin de cido ntrico concentrado
vuelve bsica.
superficie.
Curso de la Determinacin
En cuatro tubos de ensayo se coloc las siguientes muestras: solucin diluida de
protena de huevo, solucin de protena de carne, solucin de protena de harina y
solucin tirosina (aminocido). A las muestras se le aadi tres gotas de cido ntrico
concentrado y se calent en bao de agua hasta ebullicin obteniendo como
resultado una coloracin amarilla (resultado positivo) para todas las muestras a
analizar. (Ver figura 3).
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Proten
a de
Huevo
Tirosina
(Se ven
los
vapores
nitrosos)
Figura 3.
Protena
de Harina
y Carne
(Se ve
menor
intensidad
de
coloracin)
Discusin de Resultado
El resultado positivo en todos los ensayos nos indica la presencia de restos fenlicos
en todas las muestras, se ve en la figura una intensa coloracin en la muestra de
protena de huevo, y desprendimiento de vapores nitrosos en la muestra de tirosina
(esto se da producto del calentamiento), adems de acuerdo a la intensidad en
coloracin de las soluciones podemos decir que en la protena de huevo hay mayor
concentracin de sustancias que contienen anillo bencnico que en la protena de
carne y en la de harina.
Reaccin de Millon:
La reaccin del Milln se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molcula
proteica. Cualquier compuesto fenlico que no est sustituido en la posicin 3,5 como
la tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reaccin. De estos
compuestos, slo la tirosina est presente en las protenas, de manera que slo las
protenas que tienen este aminocido ofrecen resultados positivos. En esta prueba los
compuestos mercricos en medio fuertemente cido (cido ntrico) se condensan con
el grupo fenlico formando un compuesto de color rojo ladrillo o rojizo. La prueba no
es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgnicas en gran cantidad, ya
que el mercurio del reactivo del Milln es precipitado y se vuelve negativo, razn por
la cual este reactivo no se usa para medir albmina en orina. Debe tomarse en
cuenta que en el caso de que la solucin a examinar sea muy alcalina, debe ser
previamente neutralizada, ya que el lcali precipitara al in mercurio en forma de
xidos amarillos. Adems, protenas como la ovoalbmina producen un precipitado
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blanco que progresivamente por accin del calor se torna rojo; pero, las peptonas,
dan solamente una solucin de color rojo.
Curso de la Determinacin
En cuatro tubos de ensayo se coloc las siguientes muestras: solucin diluida de
protena de huevo, solucin de protena de carne, solucin de protena de harina y
solucin tirosina (aminocido). A las muestras se le agreg tres gotas del reactivo de
Millon y calentando los tubos de ensayo en bao de agua (el calentamiento debe ser
menor a 50) obteniendo como resultado en el caso de la protena de huevo un
precipitado en la superficie del tubo de color violeta (resultado positivo) y en el caso
de la o tirosina una coloracin naranja rojizo (resultado positivo).
(Ver figura 4).
Protena de
Huevo
(ntese que
se formo en la
parte
superficial del
precipitado)
Tirosin
a
Figura 4.
Discusin de Resultado
Podemos apreciar que tanto la protena de huevo como la o tirosina dan positivo
con el reactivo de Millon, esto nos indica la presencia de grupos fenlicos tanto en la
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protena como en el aminocido que forman sales de mercurio insolubles en medio
fuertemente cido, tambin nos permite reconocer la ausencia de estos en la
protena de carne y en la protena de harina.
de
agua,
para
disolver
el
precipitado
formado,
luego
se
adicion
Glioxlico (impureza del acido actico glacial) con el triptfano en medio de acido
sulfrico, este compuesto es el bis-2-triptofanilmetano. (ver figura 5).
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La
ausencia
triptfano.
No
produce el
complejo
ni el anillo
coloreado.
Figura 5.
Formacin
del anillo
marrn
por
presencia
de
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Figura 6.
Reaccin de Aminocidos que contienen Azufre con Nitroprusiato de
Sodio
Este mtodo se fundamenta en la capacidad del sulfuro de sodio, obtenido por
hidrlisis alcalina de aminocidos que contienen azufre (como la cistena y la
metionina) de formar con Nitroprusiato de sodio un complejo de coloracin pardo
rojizo mediante la siguiente reaccin.
OH
SH
NH2
NH2
Na OH
Na2S
H2O
HO
HO
Na 2 S Na 2 Fe CN 3 NO Na 4 Fe CN 3 NOS
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Figura 7.
Reaccin de Sakaguchi
Este mtodo se basa en la reaccin de coloracin en medio fuertemente alcalino de
las guanidinas con naftol en presencia de un agente oxidante fuerte, la reaccin
consiste en la unin del naftol con el grupo guanidnico en presencia de iones
hipobromito (hipoyodito o hipoclorito) que oxidan el compuesto formado a una
quinonimina, en los cuales el hidrogeno del grupo imino esta sustituido por un radical
alquilo o arilo dando la coloracin rojo naranja respectiva.
OH
OH
NaBrO
NH2
HN
NH
NH
OH
NH2
HN
+ NaBr + H2O
O
OH
NH
NH2
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V. CONCLUSION
Las protenas estn constituidas por aminocidos, por los cuales los
mtodos se basan en el reconocimiento de los aminocidos.
diluidas,
pero
precipitan
en
medio
neutro.
Las
protenas
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VI. BIBLIOGRAFIA
Bioquimica, Mary K.Campbell,Shawn O.Farrell. 4ta edicion,2004,editorial
Thompson ,pag 91,92.
Bioquimica. Pea, Arroyo, Gomez.2da edicin,2004,editorial Limusa Mexico.pag
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Pertierra. Editorial Alfa Omega, pag 27-37
www.wikipedia.com
Bioqumica de Harper,Robert K.Murray.Editorial El Manual Moderno S.A. de
C.V.Mexico D.F Santa Fe de Bogota.13 edicin, 1994.pag 51-69.
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