IDENTIFICACIN DE LOS GENES DE ALICYCLIPHILUS SP.

BQ1 INVOLUCRADOS EN LA
DEGRADACIN DE POLIURETANO
Claudia Julieta Sols Gonzlez2, Nancy Barajas1, Patricia Coello Coutio2, Jess Campos Garca1 y
Herminia Loza Tavera2*
1
Instituto de Investigaciones Qumico-Biolgicas, Universidad Michoacana, Edif. B-3, Ciudad Universitaria,
CP 58030, Morelia, Michoacn 2 Facultad de Qumica, Depto. de Bioqumica. UNAM. Ciudad Universitaria,
Mxico D.F. CP 04510 * tel. (55) 56 22 52 80, correo electrnico: hlozat@unam.mx
Palabras clave: poliuretano, biodegradacin, Alicycliphilus.
Introduccin. El poliuretano (PU) es un polmero Acidovorax sp., bacteria filogenticamente relacionada
sinttico utilizado ampliamente en la industria y en la vida con Alicycliphilus, tambin se encontr similitud con una
diaria. Sus desechos se han acumulado en el ambiente hidrolasa de Rodospirillum palustris (tabla 1).
debido a que los tratamientos qumicos y fsicos resultan Hasta hace poco, se aislaron dos genes (pueA y pueB)
ineficientes y costosos. Los PUs de tipo polister tienen que codifican protenas con actividad lipasa en
mayor susceptibilidad al ataque microbiano siendo la Pseudomonas chlororaphis. Ha sido reportado un cluster
biodegradacin una alternativa en desarrollo para el gnico denominado PUase gene cluster empleando
tratamiento de estos desechos1. Actualmente, se sabe genome walking. Dentro de este cluster se han
que actividades enzimticas de tipo esterasa, lipasa, encontrados sietes genes que codifican diferentes
proteasa y ureasa estn involucradas en la protenas: una protena tipo ABC, protenas de fusin a
biodegradacin del PU2. En nuestro laboratorio, se membranas, los genes pueA y pueB y dos serina
identific una cepa bacteriana, denominada BQ1, como proteasas. Dado que este cluster tiene similitud con
Alicycliphilus sp., la cual es capaz de crecer en un medio clusters de P. fluorescens, se ha propuesto que los
mnimo cuya nica fuente de carbono es un barniz productos gnicos estn relacionados con la produccin
de poliuretanasas y su secrecin, a travs de un sistema
comercial de PU soluble en agua (MM-PUh)3.
de secrecin tipo I2. Esta idea nos ha llevado a
Para aclarar las bases bioqumicas y moleculares de la considerar la existencia de un sistema que involucre
actividad de Alicycliphilus sobre PU, el objetivo de este diversos genes en la actividad sobre PU en Alicycliphilus
trabajo es generar mutantes incapaces de crecer en PU e sp y que pudieran comportarse en forma similar al
identificar los genes afectados por las mutaciones para encontrado en P. chlororaphis, razn por la cual, los
identificar la va de degradacin de este polmero. En posibles genes afectados por el transposn han resultado
este trabajo se describen los avances logrados hasta el muy interesantes.
momento.
Metodologa. Se generaron clonas mutantes mediante la
insercin del transposn Mariner Himar1::GmR ApR
contenido en el plsmido suicida pFAC4. La identificacin
de las mutantes de BQ1 incapaces de asimilar el PU se
realiz mediante su siembra en MM-PUh y en cajas
rplica de LB con Sm y Gm. Las secuencias en las que
se insert el transposn fueron identificadas y analizadas
utilizando el algoritmo BLAST. A travs de RACE (rapid
amplification of cDNA), se buscar amplificar y obtener
las secuencias completas de los genes afectados. Los
genes completos sern clonados en un vector de
recombinacin
homloga
para
realizar
la
complementacin de las mutantes. Se observar si las
mutantes transformadas recuperan su capacidad de
crecer en el polmero, comprobando entonces, que los
genes aislados estn involucrados con la degradacin del
PU.
Resultados y discusin. Tres clonas (8, 9 y 38)
incapaces de crecer en MM-PUh Gm30Sm50 fueron
generadas por el procedimiento anteriormente descrito.
Las secuencias afectadas por la insercin presentan
similitud con las secuencias de los genes de una
transglicosilasa y una xido-reductasa presentes en

Tabla 1. Anlisis de las secuencias nucleotdicas de las

mutantes
Mutante

Gen mutado

Similitud/organismo

Transglicosilasa ltica

92% Acidovorax sp

/ hidrolasa

53% Rodospirillum palustris

38

Deshidrogenasa/reductasa

83% Acidovorax sp

Conclusiones. Hasta el momento tres clonas mutantes

incapaces de crecer en MM-PUh han sido generadas a
travs de mutagnesis por transposicin.
Bibliografa.
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