UNIVERSIDAD DE SONORA

DIVISIN DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS

QUMICO BIOLGO CLNICO
LABORATORIO DE BACTERIOLOGA MDICA
Practica #3 Deteccin Fenotpica de Resistencia a Meticilina en
Staphylococcus aureus (SARM)
Equipo #8
Alumnas: Mara Vsquez Hernndez, Alejandra Ruiz Hernndez.
cDra.Gricelda Nez Meja

Objetivo
Detectar la presencia fenotpica de resistencia a Meticilina en Staphylococcus
aureus (SARM)
Introduccin
La incidencia de infecciones por microorganismos grampositivos es elevada, tanto
en el ambiente hospitalario como en la comunidad. El aumento de la resistencia a
los antimicrobianos que se emplean con ms frecuencia en los tratamientos de
estas infecciones requiere la deteccin precoz y eficaz de los mecanismos
implicados para orientar e incluso modificar las estrategias teraputicas. Los
microorganismos grampositivos de mayor trascendencia clnica pertenecen a los
gneros Staphylococcus, principalmente Staphylococcus aureus pero tambin
diferentes especies de estafilococos coagulasa negativa (ECN), Enterococcus
faecalis y Enterococcus faecium y varias especies de Streptococcus. El
aislamiento de estas especies en el laboratorio de Microbiologa permite la
deteccin de su resistencia antimicrobiana, tanto a nivel fenotpico como,
eventualmente, genotpico, lo que posee gran trascendencia clnica y
epidemiolgica. La aproximacin fenotpica permite una rpida inferencia de los
mecanismos de resistencia presentes as como de las resistencias asociadas a
antimicrobianos no relacionados. La presencia de bajos o altos niveles de
expresin de resistencia a determinados antimicrobianos as como de poblaciones
heterorresistentes, entre otros, se pueden detectar a nivel fenotpico mediante la
aplicacin de tcnicas y condiciones especiales y de este modo facilitar la actitud
teraputica ante las infecciones causadas por microorganismos que producen este
tipo de mecanismos de resistencia.
La aparicin de cepas de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (SAMR),
fue descrita inicialmente en 1960, poco tiempo despus de la introduccin de este
antibitico en la prctica clnica. En esa poca se utilizaba meticilina para evaluar
y tratar infecciones por S. aureus. Ahora, la meticilina ya no es un agente de
eleccin en el manejo clnico, ni para evaluar la susceptibilidad de S. aureus. En
su lugar, se utiliza la oxacilina (ms estable), por lo que el trmino correcto sera S.

aureus resistente a oxacilina (SAOR); sin embargo, debido a su rol histrico, el

acrnimo SAMR es an usado por la mayora para describir estos aislamientos.
La resistencia de los estafilococos a las penicilinas puede detectarse mediante la
prueba de nitrocefin, pero tambin mediante la tcnica de difusin con disco o por
dilucin en caldo o en agar.
Para la determinacin de la CMI a las penicilinas se utiliza el medio de MuellerHinton, cuya concentracin de cationes debe estar ajustada en el caso de que se
realice mediante el mtodo de dilucin en caldo. Se requiere un inculo ajustado al
0,5 de la escala de McFarland y entre 18-20 horas de incubacin a 35-37C.
Cuando el halo de inhibicin con el disco de penicilina de 10 unidades sea de 29
mm (sensible) o por dilucin en caldo o en agar, la CMI de penicilina sea de 0,12
mg/L (sensible) se debe confirmar que el microorganismo es realmente sensible a
las penicilinas; para ello se realiza la prueba de nitrocefin utilizando las colonias
crecidas en el borde del halo de inhibicin de la penicilina ya que, en estas
colonias, la produccin de penicilinasa ha sido inducida por la incubacin previa en
presencia de este antimicrobiano. En resumen, las cepas de estafilococos que son
resistentes a la penicilina pero sensibles a la oxacilina producen penicilinasa, lo
que implica resistencia a todas las penicilinas pero no a las penicilinas
semisintticas (oxacilina, meticilina, cloxacilina, nafcilina) que poseen una
estructura molecular que las protege frente a la accin de esta betalactamasa.
Asimismo, estas cepas son sensibles a las combinaciones de betalactmico con
inhibidor de betalactamasa, a las cefalosporinas y a las carbapenemas.
El fenotipo de resistencia a la meticilina (y a la oxacilina) es mucho ms frecuente
entre las diferentes especies de ECN que en S. aureus. Esta resistencia se debe a
la adquisicin del gen mecA que codifica la protena fijadora de penicilina (PBP)
PBP2a, que posee baja afinidad por los betalactmicos.
La resistencia a la meticilina (oxacilina, meticilina, cloxacilina, nafcilina) en
estafilococos se debe a la adquisicin de ADN exgeno que codifica la produccin
de una protena fijadora de penicilina (PBP) supernumeraria, de baja afinidad por
los betalactmicos y que no se inhibe por estos antimicrobianos. S. aureus
normalmente contiene 4 PBPs, de las cuales las PBPs 1, 2 y 3 son esenciales.
El fenotipo de resistencia a la meticilina en Staphylococcus se puede detectar en
el laboratorio mediante la tcnica de difusin con discos de oxacilina (1 g) y/o
cefoxitina (30 g) o por dilucin en caldo o en agar (Figura 1). Para ello se utiliza el
medio de Mueller Hinton suplementado con 2% de NaCl. Se requiere un inculo
equivalente al 0,5 de la escala de McFarland y 24 horas completas de incubacin
en atmsfera aerobia a 35C. La incubacin a temperaturas superiores a 35C
puede no permitir la deteccin de la resistencia a la meticilina en los estafilococos.
Si el halo mide 21 mm se considera resistente a Meticilina, por el contrario
si el halo mide> 21 mm se considera sensible.

UNIVERSIDAD DE SONORA
DIVISIN DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS
QUMICO BIOLGO CLNICO
LABORATORIO DE BACTERIOLOGA MDICA

Materiales
-Asa bacteriolgica, pinzas estriles, regla graduada en mm, hoja blanca con
contraste rallado.
-Cepas (S. aureus 6538P y S. aureus SARM+), Hisopos estriles, tubos con 7 ml y
10 ml de solucin salina 0.9% estril, Agar Mueller-Hinton en placa Petri con 4 mm
de espesor y placas Mueller-Hinton normales, sensidiscos (cefoxitina) y estndar
de McFarland de 0.5
Procedimiento:
1. Estandarizar el inculo bacteriano en solucin salina, agitando y
comparndolo con el estndar 0.5 McFarland, sobre rayas gruesas negras
de 1 cm de separacin para comprara la turbidez.
2. Sembrar masivamente el inculo de S. aureus 1 y S. aureus 2 en cada
placa agar Mueller Hinton con hisopo (cubriendo toda la superficie).
3. Esperar ms de 3 minutos.
4. Aplicar disco de antibitico (Cefoxitina).
5. Incubar a 33 C por 24 horas.
6. Medir el dimetro del Halo de inhibicin con ayuda de una regla.

Conclusin

La resistencia bacteriana es un problema de salud a nivel mundial ya que la

prevalencia de germenes Gram positivos resistentes a antimicrobianos ha
aumentado, y esto hace que a su vez se modifique los tratamientos contra estos.
Para S aureus la teraputica es cada vez ms complicada, ya que a pesar de la
existencia de gran variedad de antibiticos activos in vitro contra este
patgeno, su habilidad natural para desarrollar nuevos mecanismos de resistencia,
compromete su utilidad teraputica.

Bibliografa
http://coesant-seimc.org/documents/DeteccionFenotipos_R-CGP.pdf
https://www.seimc.org/contenidos/ccs/revisionestematicas/bacteriologia/sarm.pdf
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S007552222008000100004&script=sci_arttext