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I. OBJETIVO
Conocer sus partes y su funcin, as como el cuidado, manejo y
utilidad en el
Laboratorio de Microbiologa.
APERTURA NUMERICA
Esta expresin, que suele abreviarse AN, indica la cantidad de luz que
entra en un objetivo desde un punto del campo del microscopio. Tal
valor es de suma importancia, ya que, como se dijo anteriormente, de
l depende el Poder de Resolucin, la propiedad ms importante de
un objetivo.
La AN de una lente depende del ndice de refraccin (N) del medio
que llena el espacio entre el objeto y la parte frontal del objetivo, y
del ngulo () de los rayos de luz ms oblicuos que puedan entrar al
objetivo. La frmula para calcular la AN es:
AN = N x sen /2
El aire tiene un ndice de refraccin de 1.0, que limita la resolucin
que se puede obtener, pero se puede incrementar la AN poniendo
aceite de inmersin entre el espcimen y el objetivo, aumentando as
el poder de resolucin del microscopio. El aceite de inmersin tiene
un ndice de refraccin de 1.5, lo que aumenta considerablemente la
AN y esto mejora el poder de resolucin del microscopio.
TIPOS DE MICROSCOPIO
Simple.
Los primeros microscopios, construidos por Leeuwenhoek alrededor
de 1675, eran simples, es decir, contenan slo una lente o lupa.
Compuesto.
Tiene varias lentes combinadas, capaces de producir gran aumento.
Existen varios aditamentos que utilizados en el microscopio ptico
ordinario, aumentan mucho su rendimiento como instrumento de
observacin, p. ej. Microscopio en Campo Oscuro (Ultramicroscopio),
Microscopio de Contraste de Fases, Microscopio de Fluorescencia,
Microscopio de Luz Ultravioleta, Microscopio de Interferencia,
Microscopio de Contraste de Interferencia Diferencial de Nomarski.
METODOS DE MICROSCOPIA
Examen de organismos vivos.
La forma ms simple de examinar las bacterias y otros
microorganismos vivos es suspenderlos en agua u otro lquido,
colocar una gota de esta suspensin en un portaobjetos ordinario y
encima un cubreobjetos, utilizando para su observacin al
microscopio los objetivos seco dbil y seco fuerte. Existen otros
mtodos como son el de gota pendiente y el microcultivo.
Examen de bacterias teidas.
La forma y estructura de las bacterias se revelan con ms claridad
cuando son desecadas sobre un portaobjetos y son coloreadas o
examinadas contra un fondo teido. Existen diversas tcnicas de
tincin.
PARTES DEL MICROSCOPIO Y SU FUNCION
Base, soporte y brazo.
Sirven para mantener en posicin las partes pticas esenciales. La
base y el brazo son fuertes, para disminuir la vibracin.
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Tubo intercambiable.
Su funcin es ajustar la longitud mecnica del tubo, es decir, la
distancia entre la lente del ocular que est arriba y la unin del
objetivo al revlver, que est abajo.
Tornillos macromtrico y micromtrico.
Sirven para enfocar, logrando que la muestra se vea ntida y clara, ya
que permiten subir y bajar todo el cuerpo del tubo junto con sus
lentes y en microscopios modernos, junto con la platina. El tornillo
micromtrico permite subir o bajar muy ligeramente.
Platina.
Parte del microscopio donde se coloca la muestra que va a ser
examinada.
Pinzas de la Platina.
Estas sirven para sujetar la muestra a examinar.
Tornillos para desplazar la Platina.
Estos sirven para mover la muestra que est sobre la platina, hacia
arriba, abajo, derecha o izquierda, hasta enfocar el campo adecuado.
Fuente de Luz.
Se encuentra colocada debajo del objeto; sta emite la luz que pasa
por el condensador, para despus iluminar la preparacin.
Condensador.
Antes de que la luz alcance la muestra en la platina, se condensa y
enfoca a travs de una gran lente condensadora que se halla bajo la
platina.
Diafragma.
Sirve para controlar la luz a travs del condensador.
Objetivos.
La funcin de stos es delimitar el tamao de la imagen:
Objetivo de pequeo aumento "Seco dbil".
Util para observar microorganismos grandes, p. ej. Protozoarios.
Este objetivo est marcado con un 3 2/3, que significa 2/3
de pulgada 16 mm. Tambin est marcado como 10X. Tiene
una lente en el extremo mucho ms grande que cualquiera de
los otros objetivos.
Objetivo de gran aumento "Seco fuerte".
Este se usa para el examen de microorganismos vivos
suspendidos en gotas de agua u otros lquidos. Est marcado
con 6 1/6 que significa 1/6 de pulgada 4 mm. Tambin
est marcado como 45X 50X. La lente del extremo es de
menor tamao que la del seco dbil.
Objetivo de inmersin en aceite.
Este objetivo es indispensable para el examen de frotis teidos
de bacterias. La lente visible del extremo es mucho ms corta
que la de los objetivos secos. Este objetivo est marcado oil
inmer o homog inmer que significa inmersin homognea.
Tambin est marcado 1/12 (1/12 de pulgada, 1.9 mm, 1.8
mm) y con 97X 100X. Las marcas 10X, 45X y 97X con que
suelen estar marcados los objetivos del microscopio
LABORATORIO N 2
III. PROCEDIMIENTO
Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar
la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente
en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones.
Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas
metlicas.
Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o
colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias.
LABORATORIO N 2
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V. CONCLUSIONES
Se requiere lentes de aumento para una mejor
visualizacin de las muestras, puesto que son
microorganismos.
Para una visualizacin con buena nitidez y con mayor
resolucin, es de suma importancia conocer tanto la parte
mecnica, como la parte ptica del microscopio.
VI. RECOMENDACIONES
LABORATORIO N 2
VII. ANEXOS
CUIDADO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO
1. Para transportar el microscopio a la mesa de trabajo deber
tomarse del brazo con la mano derecha y de la base con la mano
izquierda y en posicin vertical.
2. Antes de usarlo, limpiar perfectamente la fuente de luz del
microscopio, parte superior del condensador, oculares y objetivos con
vaho y frotando suavemente con hisopos.
3. No encender la fuente de luz, sino hasta que se vaya a usar.
4. Colocar la muestra sobre la platina y girar el objetivo que se va a
usar colocndolo en la posicin correcta mientras que se observa el
material.
5. Ver por el ocular y controlar la cantidad de luz adecuada, moviendo
el condensador y diafragma.
6. Para enfocar, bajar el objetivo que se va a usar con el uso del
tornillo macromtrico hasta donde tope, sin forzarlo, luego enfocar
primero con el tornillo macromtrico y una vez que se ha localizado el
campo, usar el tornillo micromtrico para enfocar adecuadamente.
7. Con respecto al objetivo de inmersin, hay que tener mucho
cuidado, ya que la distancia focal es muy corta y habr que emplear
nicamente el tornillo micromtrico y no el macromtrico debido a
que se puede daar la preparacin y el lente del objetivo, para su
utilizacin es recomendable:
a) Levantar el tubo ptico del microscopio, antes de poner el objetivo
en posicin.
b) Colocar una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin. No
usar aceite en exceso, ya que daa el cemento de las lentes.
c) Viendo por fuera del microscopio, como ya se insisti
anteriormente, bajar el objetivo con el macromtrico hasta que toque
la gota de aceite. A partir de ese momento el objetivo estar
prcticamente dentro de su distancia focal.
Enfocar la preparacin con movimientos del tornillo micromtrico.
8. Evitar girar el revlver de los objetivos sin antes levantar el tubo
ptico del microscopio.
9. Recordar que el objetivo 45X es ms largo que el de 10X y ms
todava que el de inmersin, por lo que deber tenerse cuidado, pues
si llegan a rozar, la platina los inutiliza permanentemente.
10. Cuando se vaya a utilizar el objetivo seco fuerte (45X), hacer
primero el enfoque de la preparacin con el objetivo seco dbil, luego,
girar el revlver de tal manera que el siguiente objetivo sea el seco
fuerte, cuidando que la lente no tope con la preparacin.
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VII. BIBLIOGRAFIA
COLORACION DE BACTERIAS
I. OBJETIVOS
Observar la morfologa y estructura de las bacterias, una
vez coloreada con ayuda del microscopio.
Reconocer el proceso de coloracin de Gram en nuestras
muestras de bacterias.
Aprender a interpretar los resultados obtenidos con la
tincin de Gram.
II. FUNDAMENTO TEORICO
Tincin de Gram
Esta tincin es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios donde se
manejan pruebas microbiolgicas. Es definida como una tincin diferencial, ya que utiliza dos
colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos:
LABORATORIO N 2
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