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Orientador
Prof. Dr. Geraldo Moretto
BLUMENAU
SANTA CATARINA BRASIL
2008
ROGER STRAPAZZON
APROVADA em 26/02/2008
Prof. Ms. Andr Paulo Nascimento
Prof. Dr. Sidney Luiz Sturmer
BLUMENAU
SANTA CATARINA BRASIL
AGRADECIMENTOS
SUMRIO
Resumo .............................................................................................................................2
1. Introduo.....................................................................................................................3
2. Material e mtodos .......................................................................................................6
2.1. Coleta do caro Varroa destructor ............................................................................6
2.2. Extrao do DNA ......................................................................................................7
2.3. Amplificao do DNA (PCR) ...................................................................................7
2.3.1. Determinao dos hapltipos .................................................................................7
2.3.2. Determinao dos microssatlites ..........................................................................8
3. Resultados.....................................................................................................................9
4. Discusso ....................................................................................................................10
5. Agradecimentos ..........................................................................................................13
6. Referncias .................................................................................................................14
Anexos ............................................................................................................................19
Roger Strapazzon
Rua Antnio da Veiga, 140 - Victor Konder
89012-900 - Blumenau SC
roger_bio@yahoo.com.br
1. Introduo
2. Material e mtodos
coletadas em crias de operrias e/ou crias de zanges e/ou em operrias e zanges adultos.
Os caros foram acondicionados em etanol 70% no momento da coleta e posteriormente
armazenados a -20o C.
COXRa
finalizar, um ciclo extra de 10 min a 72C. A visualizao dos alelos dos microssatlites foi
realizada em gel de poliacrilamida 12%, corado com nitrato de prata.
3. Resultados
A amplificao via PCR da regio COI do genoma mitocondrial do caro V.
destructor, gerou um segmento de aproximadamente 570 pares de bases (pb) em todas as
amostras coletadas em Santa Catarina e Fernando de Noronha-PE. As digestes desses
produtos de PCR com as endonucleases Xho I e Sac I geraram padres polimrficos entre
as amostras de Santa Catarina e Fernando de Noronha. Em todas as amostras das duas
localidades, a digesto do produto de PCR com a enzima Xho I, resultou em fragmentos de
300 e 270 pares de bases. Entretanto, quando submetidas a enzima Sac I as 160 amostras de
Santa Catarina no apresentaram o stio de clivagem caractersticos do hapltipo Coreano.
Para esta mesma enzima, as 30 amostras originrias de Fernando de Noronha apresentaram
o padro hapltipo Japons, com produtos de digesto de 340 e 230 pb (Fig. 1).
Analisando o genoma nuclear nas quatro regies de microssatlites estudadas, as 30
amostras de Fernando de Noronha apresentaram gentipos homozigotos, caractersticos do
padro Japons. Foram observados apenas 2,77% indivduos com alelos especficos para o
gentipo Japons nas amostras do estado de Santa Catarina. Dentre as quatro regies de
microssatlites analisadas, apenas a regio VD112 no apresentou alelos caractersticos do
padro Japons, sendo todas classificadas como gentipo Coreano.
Na regio VD119, em apenas uma amostra obtida do apirio de So Joaquim foi
verificada a presena do gentipo homozigoto para o padro Japons, sendo as restantes
homozigotas para o padro Coreano (Fig. 2).
4. Discusso
O caro V. destructor uma espcie invasora que rapidamente se difundiu na
espcie A. mellifera causando grande impacto em colnias desta abelha espalhadas pelo
mundo. Nos pases localizados nas regies tropicais e subtropicais, sobretudo na Amrica
do Sul e Central, o parasita tem causado menores danos s abelhas africanizadas (Moretto
et al. 1991, De Jong & Soares 1997). Alguns fatores so relacionados a este baixo impacto
sobre as abelhas, como a maior resistncia das raas Africanas sobre as Europias (Moretto
et al. 1991, Medina & Martin 1999), as condies climticas (Moretto et al. 1991), e a
diferena do gentipo do Varroa que infesta os apirios (Guzman et al. 1998).
Guzman et al. (1997) utilizando marcadores RAPD diferenciaram os dois bitipos
de varroa, sendo o Russo (R) para as populaes dos Estados Unidos, Rssia Marrocos,
Alemanha, Itlia, Espanha e Portugal e o Japons (J) para as populaes do Japo, Brasil, e
Porto Rico. Anderson & Trueman (2000), utilizando marcadores de DNA mitocondrial,
tambm classificaram o bitipo em hapltipo Coreano (= Russo) e Japons.
10
5. Agradecimentos
Ao todos os apicultores que forneceram o material biolgico para realizao deste
trabalho e em especial ao professor David De Jong pela amostras de oriundas de Fernando
de Noronha (PE).
13
6. Referncias
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