OBJETIVOS

Aplicar adecuadamente la tcnica descrita para la deteccin del gnero

Salmonella y Siguella
Explicar el fundamento de las etapas del mtodo de deteccin de
Salmonella y Siguella en alimentos.

INTRODUCCION
El gnero Salmonella pertenece a la tribu Salmonelleae, de la familia
Enterobacteriaceae.
Los miembros del gnero Salmonella son bacilos gram-negativos, de 0,7-1,5
x 2,0-5m, generalmente mviles por flagelos peritricos (excepto S.
Gallinarum), son anaerobios facultativos, no esporulados. No fermentan la
lactosa (excepto S. enterica subep. arizonae y S. enterica subesp.
diarizonae), fermentan glucosa con produccin de gas (excepto S. Typhi); no
producen indol; no degradan urea; decarboxilan lisina y ornitina.
Salmonelosis: es una zoonosis de distribucin mundial. Se notifica con
mayor frecuencia en los paises desarrollados, ya que poseen mejores
sistemas de notificacin. Es una enfermedad de origen alimentario, porque
los alimentos contaminados constituyen el principal modo de transmisin.
La tasa de incidencia de la infeccin es mayor en los lactantes y en ninos de
corta edad. Desde el punto de vista epidemiolgico, las infecciones por
Salmonella pueden causar pequenos brotes en la poblacin en general, sin
embargo el 60 - 80% de los casos son esporadicos; a veces se producen
grandes brotes en hospitales, jardines maternales, geriatricos, restaurantes.
La fuente mas frecuente de infeccin son los alimentos contaminados en su
origen, o con menor frecuencia durante su manipulacin por un portador; es
tambin importante la transmisin de persona a persona.
Las bacterias del gnero Salmonella causan en el hombre una
gastroenteritis aguda, con cefalalgia, dolores abdominales subitos, diarrea,
nauseas, fiebre y vmitos. La deshidratacin puede ser grave sobre todo en
menores de 1 ano, ancianos e inmunocomprometidos.
IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION BIOQUIMICA
Aislamiento
Para el aislamiento se utilizan medios diferenciales y selectivos como: agar
MacConkey (MC),agar Eosina Azul de Metileno (EMB), agar Salmonella
Shigella (SS), agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD),agar Hektoen (HE), agar
verde brillante (BG). Las placas se incuban a 37oC durante 18 a 24 horas y
se observan colonias, de 2 mm de diametro, con las caracteristicas
indicadas en el cuadro1.

CUADRO 1: Caracteristicas de las colonias en medios selectivos y

diferenciales

MEDIO DE CULTIVO

SELECTIVIDAD

ASPECTODE COLOIAS

Agar MacConkey

Baja

Incoloras

Baja

Incoloras

Agar EMB
Agar SS
negro

Alta

Agar XLD
Agar HE
negro

Alta
Alta

Agar BG

Incoloras con centro

Rojas con centro negro
Verdes-azuladas con centro

Alta

Rosadas palidas

Identificacion Bioquimica
La identificacin requiere la realizacin de pruebas bioquimicas y de
serotipificacin, de distinta complejidad, dependiendo de la capacidad del
laboratorio. Es conveniente que los laboratorios con menores
disponibilidades envien las cepas aisladas a laboratorios de nivel intermedio
(provinciales y/o regionales), para completar las pruebas bioquimicas y
realizar pruebas de serotipificacin. A su vez el Laboratorio Nacional de
Referencia realiza las pruebas bioquimicas de mayor complejidad y pruebas
de serotipificacin complementarias.
El gnero Salmonella esta compuesto por dos especies: Salmonella enterica
y Salmonella bongori. S. enterica a su vez esta subdividida en seis
subespecies, a cada una de las cuales se las denomina con un nombre y un
numero romano. Por ej. Salmonella enterica

Para que se utiliza un medio de cultivo en Salmonella y Siguella?

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas
especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los
cuales se sospeche su presencia.

Frmula (en gramos por litro)

Pluripeptona
5.0
Extracto de carne
5.0
Lactosa
10.0
Mezcla de sales biliares
8.5
Citrato de sodio
8.5
Tiosulfato de sodio
8.5
Citrato frrico
1.0
Agar
13.5
Verde brillante
0.00033
Rojo neutro
0.025
pH final:

Instrucciones
Suspender 60 g del polvo por litro de agua
destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta
homogeneizar. Calentar a ebullicin durante 2 o
3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por
placa. Secar la superficie del medio unos
minutos en la estufa.
7.0 0.2

Distribuir unos 20 ml por cada placa de medio

Hacer la
Dilucion

Previamente hacer

el

sembrado a cada

medio

de cultivo

Microorganismos

Colonias

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Transparentes, centro negro

Shigella flexneri

Incoloras

Shigella sonnei

Incoloras

Proteus mirabilis ATCC 43071

Transparentes, centro negro

Escherichia coli ATCC 25922

Rosadas a rojas

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Rosadas cremosas y mucosas

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Incoloras, de muy escaso crecimiento

Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben
el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoria de los coliformes y el
desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentacin de la
lactosa, y a la formacin de acido sulfhidrico a partir del tiosulfato de sodio. Los
pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar,
acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose
colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros
microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de
cultivo, y producen colonias transparentes. La produccin de acido sulfhidrico
se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro
de hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente
la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).

SiembraSembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.

Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar
E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey (B02-114-05).
IncubacionDurante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

Resultados

Salmonella sp..H2S
Caracteristicas del medioMedio preparado: rojo naranja.
Almacenamiento:Medio deshidratado: a 10-35 C.
Presentacion
x 100g :Cdigo: B02-138-05
Tetrationato Caldo.

X 500g :Cdigo: B02-138-06

Introduccion
Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp.
a partir de heces, orina, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.

Fundamento
El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para
el desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe
metabolitos txicos. La selectividad esta dada por la presencia de tiosulfato de
sodio, tetrationato (generado en el medio por el agregado de la solucin iodoiodurada) y sales biliares, los cuales permiten el desarrollo de bacterias que
contienen la enzima tetrationato reductasa, como ser la Salmonella spp. e
inhiben el desarrollo de la flora acompanante. Para evitar la proliferacin de
especies de Proteus spp., se recomienda agregar 40 mg/l de Novobiocina,
antes de la solucin iodada.
Resultado

CARACTERISTICAS DEL MEDIO

Medio prepara: Suspensin blanco lechosa

Lisina Hierro Agar

Introduccion
Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente
Salmonella spp., basado en la decarboxilacin / desaminacin de la lisina y en
la produccin de acido sulfhidrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los
nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las
enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el
tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de acido sulfhidrico. El
purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH
igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8. Por
decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el
medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilacin
de la lisina, tiene lugar en medio acido, por lo que es necesario que la glucosa
sea previamente fermentada.
Resultado
1- Decarboxilacion de la lisina:
-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
2-Desaminacin de la lisina: Pico rojizo/fondo amarillo
. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y alguna cepas de
Morganella spp
3-Produccin de acido sulfhidrico: Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el limite del
pico y fondo)
Caracteristicas del medio Medio preparado: color violeta.

BIBLIOGRAFIA
http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/gss/publications/documents/
Argentina-LevelI/Manual_procedimientos_Salmonella.pdf
http://es.slideshare.net/roberchavez/medios-de-cultivo-ypruebas-bioquimica-presentation
http://nadiiie-ezperfectoo.blogspot.com/2009_05_01_archive.html