Interacciones microbianas

Microbiologa Ambiental
Facultad de Ingeniera Ambiental
UNIVERSIDAD EL BOSQUE
Bocanegra Vargas Daniela Mara, Cardona Osorio Ana Mara, Ramrez Gngora
Oscar David
RESUMEN
Objetivo. Llevar a cabo diferentes interacciones entre microorganismos por
metodologas tradicionales de enfrentamiento, reconociendo y analizando que
clase de relaciones se daban entre ellos. Materiales y mtodos. Las relaciones
se analizaron utilizando la tcnica de Igarashi, que consiste en enfrentar el hongo
Fusarium, con el hongo Trichoderma (que acta como biocontrolador), sembrados
a tres centmetros entre ellos en dos cajas, una de agar avena y otra de agar PDA.
Tambin se sembr Fusarium en el centro de la caja de Petri y una siembra
masiva de Trichoderma alrededor de este; adems se hizo una siembra de
crecimiento libre de Fusarium en avena. La ltima tcnica utilizada fue la de
Gauze, en la cual se enfrentaron las bacterias de la siguiente manera: una
siembra masiva de actinobacteria y un tringulo y en cada vrtice se sembr una
bacteria diferente, estas fueron: E. Coli y Bacillus. Despus se hizo un
enfrentamiento de Gauze modificado, en el cual se llev a cabo el mismo
procedimiento pero la siembra masiva fue de E. Coli y en los vrtices del tringulo
se sembr una actinobacteria. Resultados. Se obtuvieron que mediante las
tcnicas el Trichoderma se inhibi el crecimiento de Fusarium. Conclusiones. en
la tcnica de Igarachi y de crecimiento dual,hubo una interaccin negativa de
amensalismo y antibiosis , y en la tcnica de Gauze se inhibi el crecimiento de
los microorganismos.Palabras clave: Interaccin microbiana-Igarashi-GauzeTrichoderma- Fusarium- E. Coli.-Biocontrolador.
INTRODUCCIN
Los
seres
humanos
y
los
microorganismos habitan en el mismo
planeta y sus caminos se cruzan de
muchas y variadas maneras de modo
que las interacciones entre ellos son
inevitables. (10)El tipo de poblacin
microbiana a la que se expone una
persona y el mecanismo de
exposicin
a
menudo
son
consecuencias
directas
de
la
actividad de esa persona. Ciertas
actividades
implican
diferentes

riesgos de contacto y hay un espectro

amplio de actividades o situaciones
sobre las que una persona puede
tener un control absoluto o carecer
totalmente de control (1)(11)(14).
El ambiente juega un papel bastante
importante
para
la
interaccin
microbiana, pues debido a lo
mencionado anteriormente, de alguna
u otra manera los seres humanos
estn
en
contacto
con
los

microorganismos de manera indirecta

y esto repercute a la relacin
con
los
microorganismos
de
diferentes factores que podran
afectar la salud humana.(13)(15)
Algunos microorganismos como virus,
bacterias, hongos y protozoos,
presentes en el aire interior, pueden
ser portadores de polen, detritus
animal, fragmentos de insectos y
caros y sus productos de excrecin,
lo que puede empeorar la calidad
ambiental (2)(9).
En base a esto, se han generado
muchas
expectativas
para
la
implementacin
de
nuevas
tecnologas para el trabajo de generar
antibiticos que actan en el
organismo humano como una potente
sustancia qumica actuando sobre las
bacterias
e
impidiendo
su
propagacin y crecimiento en el
organismo. nicamente no slo
sucede con las bacterias, sino
tambin, ocurre con hongos; es por
esto que se acude a hacer controles
biolgicos como mecanismo de
control de plagas y enfermedades
que se presentan en muchos
aspectos como la agricultura, vida
humana, animal y vegetal, entre
otros.(4)(6)
Con base en el potencial que poseen
los microorganismos para modificar el
ambiente donde viven, existen
bsicamente dos formas hipotticas
de hacer prevencin de una
enfermedad de tipo infeccioso. Una
de
estas
formas
de
control
microbiolgico, consiste en prevenir
una
enfermedad
de
carcter
infeccioso por medio de la sustitucin
del microorganismo causante de tal
enfermedad por otro microorganismo
de caractersticas similares, pero con

la diferencia de ser inocuo para el

husped en el que se est haciendo
la prevencin; en otras palabras el
microorganismo que se utilice con
este fin no debe producir ningn dao
por s mismo, ni predisponer al
husped a otras enfermedades, y no
desequilibrar el ecosistema en el que
reside (3)(7)(8).
En el presente informe de laboratorio
se har nfasis en el tipo de
interacciones realizadas con unas
tcnicas implementadas para el
anlisis in vitro con la que se llev a
cabo la prctica, dando as, un
entendimiento al aprendizaje sobre el
comportamiento
de
diferentes
microorganismos que actan en el
control biolgico, aclarando, que el
organismo encargado de controlar el
patgeno
se
conoce
como
antagonista, y su accin depende del
ambiente.
MATERIALES Y MTODOS
Tcnica de enfrentamiento
dual
En los medios de cultivo PDA y
avena se sembraron en dos
puntos equidistantes del borde
de la caja de Petri y
equidistante entre las dos
especies sembradas, fusarium
y Trichoderma. A una distancia
de 3 cm de la pared de la caja
de Petri y de la otra bacteria.
Tambin se sembr Fusarium
en crecimiento libre. Se
llevaron a incubacin por 7
das a una temperatura de 22
C.

3 cm

Tcnica de Igarashi:
Esta tcnica se realiz en los
medios de cultivo agar Avena y
en PDA, haciendo en ambas
un cuadro de 3 cm por 3 cm,
colocando en el centro de este
un agente patogeno el cual es
Fusarium y alrededor una
siembra masiva del controlador
en
este
caso
es
el
Trichoderma.
Estos
dos
procedimientos tuvieron una
incubacin durante 7 das y
por 22C, con el fin de analizar
la inhibicin de Trichoderma
frente a Fusarium, al igual que
la influencia que tienen los
medios de cultivos utilizados
en
las
interacciones
microbianas
de
los
microorganismos utilizados.

3 cm

Tcnica de Gauze:
Se
sembr
masivamente
actinobacteria en medio de
cultivo agar avena, as mismo
se colocaron en tres puntos
equidistantes tres diferentes
especies de bacterias, E. coli y
Bacillus, de forma invertida. Se
realiz la incubacin por 7 das
a los 22C y al final se
midieron los halos de inhibicin
de
las
tres
bacterias
sembradas. Adems se realiz
la
tcnica
de
Gauze
modificada que consista en
colocar
en
tres
puntos
equidistantes actinobacteria y
se sembr masivamente la
bacteria E, coli.

RESULTADOS
1) Tcnica de enfrentamiento dual.
Microorganismo

Crecimiento libre (mm)

90

Crecimiento
influenciado(mm)
13.75 mm

No aplica

40 mm

Fusarium oxysporum
Trichoderma sp

Porcentaje de inhibicin micelial:

En condiciones normales el crecimiento libre es de 9 cm

PIM =
PIM: Frmula de Porcentaje de Inhibicin Micelial
PIM =

Crecimiento libreCrecimiento influenciado

100
Crecimiento libre

*NOTA: Esta frmula es usada para la tcnica de enfrentamiento dual

PIM =

90 mm13.75 mm
100=84.72
90 mm

2) Tcnica de Gauze.
Microorganismo
s

Halos de
inhibicin en
mm de E. coli

Actinobacteria

No

Halos de
inhibicin en
mm de
Bacillus sp.
si

Tcnica Gauze modificada

Microorganismo

Promedio de halos de inhibicin

generados por actinobacteria
3
3

e. coli
Basillus sp
3) Tcnica de igarashi.
Microorganismo
Fusarium oxysporum

mm en crecimiento
radial agar avena
No hubo

Tcnica de Igarachi

mm en crecimiento
radial agar PDA
1.425 mm

Tcnica de Gauze
DISCUSIN
Durante los resultados obtenidos de la tcnica del enfrentamiento dual, fue posible
observar que la inhibicin del crecimiento del antagonista se encontr distante del
patgeno, posiblemente a travs de la antibiosis, mecanismo caracterstico para
estas especies de biocontroladores. La forma en que Trichoderma sp
probablemente inhibe el crecimiento radial, aun estando a distancia del patgeno,
esta mediada por diversos mecanismos, destacndose la produccin de
compuestos inhibitorios al medio; antibiosis por produccin de metabolitos voltiles
y no voltiles. (18)(19). Por esta razn, resulta ms efectivo utilizar un antagonista
que crezca primero que el patgeno y que adems comience la inhibicin de
forma temprana.
Los aislamientos de Trichoderma sp utilizados presentaron un modo de accin
favorable por competencia de nutrientes y espacio, ya que crecen rpidamente,
superando el crecimiento de Fusarium oxysporum, impidiendo el desarrollo normal
e inhibiendo en ms del 50% el desarrollo de este, esto es posible detallarlo en el
valor correspondido al PIM (Porcentaje de Inhibicin Micelial) y adems se pudo
entender de que cumpla una interaccin de amensalismo.(16)(20).
En las tcnicas de Gauze en Agar Avena, se sembr masivamente (organismo
controlador) actinobacteria por todo el medio de cultivo y se observ que este
microorganismo creci de manera espontnea como se puede ver en la imagen
(Tcnica de Gauze).

Lo ms interesante es ver que durante esta tcnica y en el Agar Nutritivo,

actinobacteria., pas a ser el microorganismo inhibidor junto con E.coli y. En esta
prueba se us actinobacteria., como organismo controlador y, as mismo, se
realiz su siembra masiva en todo el Agar. Es bueno saber, que la actinobacteria.,
es una bacteria patgena y despus de haber realizado y completado hasta su
finalizacin la tcnica, no present ningn cambio en cuanto a crecimiento, es
decir, la caja petri con Agar Nutritivo permaneci estable durante antes y despus
de la incubacin, y los microorganismos no presentaron cambios a nivel
macroscpico. Se podra deducir de esto, que la presencia de actinobacteria es
fundamental como agente inhibidor vs. Otros organismos.(15).
En la tcnica de Igarashi que se desarroll en el medio de cultivo Agar PDA, se
observ que el organismo controlador empleado Trichoderma sp tuvo un
excelente resultado, ya que Trichoderma sp tiene excelentes propiedades para el
control biolgico, siendo especialmente efectiva contra Rhizoctonia, Fusarium y
Pythium. A su vez, es un excelente estimulador del crecimiento radicular (20).
Se observ un crecimiento alrededor de la cuadricula realizada de 3x3cm donde
en su centro se haba sembrado el patgeno (Fusarium oxysporum) y esto hace
nfasis a las propiedades del organismo controlador que se us. El Agar PDA
puede ser suplementado con antibiticos o cidos para inhibir el crecimiento
bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el recuento colonial.
Tambin puede ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y levaduras
de importancia clnica. Es un medio muy usado que sirve para aislar todo tipo de
hongos (18).
Debido a estas razones, juega un papel muy importante para el control biolgico
del organismo patgenos en cuanto a su propagacin de enfermedad (vindolo en
un nivel ms macro) o, en cuanto a su crecimiento. Aunque si hubo un crecimiento
radial de Fusarium oxysporum nunca sobrepas la cuadrcula, siendo as, que el
organismo controlador Trichoderma sp no permiti la propagacin del hongo y se
relacion con la interaccin microbiana de antibiosis, y la tcnica fue satisfactoria
para lo que se quera analizar.(20).

CONCLUSION
Las tcnicas de crecimiento dual e Igarashi se relacionan prcticamente porque es
un tipo de interaccin negativa en la cual el Amensalismo y Antibiosis
fundamentaron en el anlisis de los microorganismos que estaban sembrados en

los Agares. Estas tcnicas son bastante interesantes de analizar porque se puede
entender cmo es la interaccin microbiana dependiendo de sus propiedades, de
su medio, y cmo es esa dinmica que generan con otros organismos (ya sean
controladores o patgenos). Cabe resaltar que para un Ingeniero Ambiental le es
til este tipo de conocimientos porque se puede entender desde un punto de vista
integral, cmo los sistemas que estn en constante interaccin son afectados o, a
su vez, son favorecidos por las condiciones en que se encuentran para su
crecimiento y desarrollo.
Para que sea ms fcil que se genere inhibicin en un medio de cultivo, es
importante que el
microorganismo antagonista crezca antes que el
microorganismo patgeno, es decir que empiece a generar aquellas sustancias
que inhiben el crecimiento de los microorganismos patgenos para as servir como
un controlador biolgico y ser ms eficiente en la regulacin del crecimiento.
La temperatura y la cantidad de tiempo a la que se encuba un medio de cultivo es
importante en el crecimiento de los microorganismos tanto patgenos como los
antagnicos, por lo general estas condiciones estn ligadas a lo que se quiere
generar en las tcnicas, por ejemplo en la tcnica de Gauze en la cual fue
sembrada masivamente actinobacteria, esta inhibi el crecimiento de las otras
bacterias. Que la actinobacteria se incubara durante 7 das a una temperatura de
22 C gnero las condiciones necesarias para que esta produjera aquellas
sustancia que inhibi completamente el crecimiento de las otras bacterias.

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