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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS


BIOLGICAS
Lic. Qumico Farmacutico Industrial

PRACTICA N
8

HIDRLISIS DE UNA PROTENA


Y ENSAYOS PARA PROTENAS Y
AMINOCIDOS
UNIDAD DE APRENDIZAJE:
Qumica Orgnica I
GRUPO: 2FM1

EQUIPO: #8

INTEGRANTES:
Garca Garca Ana Alicia
Hernndez Hernndez Elena
Anglica
Vera Palacios Alejandro

7 DE JULIO DE 2015

OBJETIVOS:
Efectuar la hidrlisis total de una protena.
Identificar algunos aminocidos presentes en un hidrolizado e
protena, por medio de sus propiedades fsico-qumicas.
Identificar por cromatografa en placa fina algunos de los
aminocidos presentes en un hidrolizado de protena

CUESTIONARIO EXPERIMENTAL
En la hidrlisis de grenetina, indicar: 1. Cmo sabra si la
hidrlisis fue parcial o total?
Con el experimento numero 3 demostramos enlaces peptdicos, estos enlaces solo los
encontramos (Durante esta prctica) en las protenas en su estado normal. Una vez
hidrolizada en su totalidad la protena estos enlaces no estn presentes en la muestra.
Con este experimento se forma un complejo de cobre que da una coloracin a la muestra,
si no hay coloracin quiere decir que no hubo reaccin y por tanto no estn presentes
enlaces
peptdicos

2. Investiga y describe tres tipos de hidrlisis de protenas.


I. Bsica: se ocupan bases fuertes (generalmente NaOH y NaOH) a ebullicin lenta y se
destruyen indiferenciadamente los enlaces peptdicos.
II. Acida: se ocupan cidos (generalmente HCl y H2SO4) a ebullicin lenta, destruye
completamente los enlaces peptdicos indiferenciadamente.
III. Enzimtica: es una reaccin muy lenta y muy selectiva as que no reacciona en
cualquier sito activo y no destruye todos los enlaces peptdicos.

3. Qu tipo de aminocidos o protenas dan positiva la


reaccin xantoprotica?
Los aminocidos que tienen en su estructura un anillo aromtico
como es la fenilalanina, tirosina y triptfano
4. Escribe el mecanismo que se lleva a cabo en la reaccin
xantoprotica.
La reaccin es especfica para los grupos fenilos sustituidos. En ella ocurre la nitracin del
grupo fenilo, que contiene una molcula orientadora hacia la posicin orto del anillo,

cuando se ponga en contacto con el cido ntrico. La nitracin del anillo determinar que
el producto de reaccin tenga un color amarillo.

5. Cul es la razn de agregar hidrxido de sodio en la


reaccin xantoprotica?
Para llevar la solucin a un pH alcalino.

6. Qu tipo de aminocidos debe contener una protena,


para dar positiva la reaccin de precipitacin con acetato
de plomo?
Un amino acido que contenga enlaces disulfuro (R-S-S-R).

7. Resumir las conclusiones obtenidas en la reaccin con


acetato de plomo.
La solucin D (solucin de albumina) tiene azufre en su
estructura.
8. Indicar por medio de reacciones, el efecto regulador de
aminocidos.

9. Explicar los resultados obtenidos en la prueba del efecto


regulador de los aminocidos.
En la solucin un in dipolo de un aminocido es una base que acepta un protn
proveniente
del
cido
clorhdrico
para
formar
un
catin.
En la solucin que se volvi bsica al adicionarle hidrxido de sodio, es un cido que
pierde un protn y da lugar a un anin.

10. En qu consiste la prueba de Van Slyke?


Prueba qumica para la determinacin de aminocidos primarios.
Esta prueba es producto de mezclar una solucin de nitrilo de
sodio, cido actico y agua, con la solucin problema, as produce
se produce un desprendimiento de nitrgeno gaseoso
evidenciando aminocidos primarios.
11. Escribe la frmula de los aminocidos que identific por
cromatografa.
Glicina

12. Explicar el fundamento de la cromatografa en capa fina


y mencionar cul es la fase mvil y cul la estacionaria en
el sistema utilizado en esta prctica.
Se basa en el reparto de soluto entre la fase mvil y la
estacionaria, as los compuestos ms afines (por polaridad) a la
dase estacionaria tardan ms en eluir.
Fase mvil: Mezcla de Alcohol terbutilico agua 3:1
Fase estacionaria: Placa de silica
13. A qu tipo de protenas pertenecen las que se
emplearon en la prctica?
Colgeno = Fibrosas

Ovoalbmina=Fosfoprotena

14. Investigar algunos de los aminocidos


encuentran presentes en grenetina y albmina.

que

Grenetina: prolina, lisina y glicina


Albmina: fenilalanina, valina, triptfano, leucina.

15. Investigar de qu protena se obtiene la grenetina.


Del colgeno hidrolizado.

Observaciones

se

Basarnos en la literatura para tener el conocimiento y saber que


coloracin se debemos esperar en cada reaccin, en la reaccin
xantoproteica se espera un color anaranjado oscuro, en la de Biuret un
color azul-violeta y en la de ninhidrina un purpura oscuro en caso de
contar con la presencia de aminocidos.
Se utiliz solo (1ml) de cada solucin A, B, C y D para a identificar los
distintos aminocidos presentes en ellas.

Resultados
Reaccin Xantoproteica:
Esta reaccin sirve para identificar grupos aromticos, (el
vire se observara de color amarillo-naranja).
a) Solucin A (grenetina hidrolizada): Negativa
(aparentemente ya que la prueba arroj un
resultado positivo mostrando una coloracin
amarilla muy tenue al ser agregado el cido ntrico,
pero en el bao Mara y al agregar NaOH el color
desapareci., asi que habra que investigar si la
grenetina contiene anillos aromticos)
b) Solucin D (albumina): POSITIVA (cambio de color amarillo a
naranja).

Reaccin de precipitacin:
Esta reaccin nos sirve para identificar protenas que tienen
en su composicin aminocidos con azufre (el vire ser

color marrn oscuro o pardo).


a) Solucin A (grenetina hidrolizada): NEGATIVA
(aparentemente ya que se forma un precipitado entre
gris y negro).
b) Solucin D (albumina): POSITIVA con precipitacin. Al
agregar el acetato se torn de color blanco y al agregar
el NaOH, se form el precipitado entre gris y negro.
c) Agua destilada: NEGATIVA sin precipitacin.

Reaccin Biuret:
Esta reaccin sirve para identificar la presencia de enlaces peptdicos.
Produce un color violeta, purpura-rosado al reaccionar
con una solucin alcalina de sulfato de cobre
a) Tubo testigo con hidrxido de sodio y agua
destilada
b) Solucin C (grenetina sin hidrolizar) en medio
bsico: POSITIVA
c) Solucin D (albumina): POSITIVA
d) Solucin A (grenetina hidrolizada) en medio bsico:
NEGATIVA
e) Solucin D (albumina) en medio bsico: POSITIVA
f) Solucin A NEGATIVA

Reaccin con ninhidrina:


Esta reaccin sirve para identificar alfaaminoacidos (el vire se observara de color purpura
oscuro).
a) agua destilada: NEGATIVO
b) solucin C (grenetina sin hidrolizar) en
medio bsico: POSITIVO
c) solucin A (grenetina sin hidrolizar.): NEGATIVO
d) solucin D (albumina): NEGATIVO
e) aminocido patrn: NEGATIVO

Reaccin con cido nitroso


Reaccin para identificar grupos amino libres:
a) solucin
A
(grenetina
hidrolizada):
POSITIVO
b) solucin C grenetina sin hidrolizar:
NEGATIVO
c) solucin D (albumina): NEGATIVO

d) tubo testigo sin protena: NEGATIVO

Reaccin reguladora de aminocidos


a) Solucin B grenetina hidrolizada pH neutro
+ HCl + rojo cong: despus de un tiempo
tarda en virar a rojo indicando el medio acido
esto por la capacidad del aminocido de
actuar como anftero y vira hasta adicionar
un exceso de cido clorhdrico.
b) agua destilada HCl + rojo cong: vira
inmediatamente.
c) solucin B grenetina hidrolizada pH neutro
+ NaOH+ fenolftalena: despus de un tiempo
tarda en virar a rosa indicando el medio bsico, esto por la
capacidad del aminocido de actuar como anftero y vira hasta
adicionar un exceso de hidrxido de sodio vira.
d) agua destilada + NaOH+ fenolftalena: vira inmediatamente a
rosa.

Anlisis de Resultados
Los resultados al cambiar de coloracin caracterstica de la
xantoproteica nos indic que la albumina contiene aminocidos que
tienen en su estructura un anillo aromtico.
La albumina dio positivo al precipitar el sulfuro de plomo de color blanco
ya que tiene aminocido con azufre en su estructura sin importar si esta
hidrolizada o no. Ya que la sola presencia del azufre la har precipitar.
En los hidrolizados de los aminocidos ya sea en medio acido o bsico
dio negativo puesto que los enlaces peptdicos se han roto.

En esta reaccin dieron positivo los tubos en los cuales exista un


hidrolizado en medio acido o bsico ya que los alfa-aminocidos estn
libres ya que se rompi su enlace peptdico.
Dio positivo el tubo que tena hidrolizada la protena indicando grupos
amino libres.
En el experimento de reaccin de biuret
Los pptidos (a partir de los tripeptidos) y las protenas reaccionan con
el reactivo de Biuret. Los iones cpricos forman un complejo de
coordinacin con los pares de electrones no compartidos del N,
presentes en los aminocidos de las protenas.
Las protenas disuelven el hidrxido cprico del reactivo y forman
compuestos coloreados purpura, violeta rosado que depende de la
naturaleza de las protenas
En el experimento de reaccin por precipitacin dio positiva la solucin
de albumina, lo que indica que hay presencia de protenas que tienen en
su composicin aminocidos con azufre, se pone de manifiesto por la
formacin de un precipitado negruzco (plomo). Esta reaccin se basa en
la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al
reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo

Conclusiones
La estructura qumica bsica de un aminocido consta de grupo amino, un
grupo carboxilo, un hidrgeno y un grupo distintivo llamado R unidos a un
mismo carbono denominado carbono-a .El grupo R es una de su principal
caracterstica ya que en algunas aminocidos este grupo es un anillo aromtico
como en el caso de la tirosina y gracias a ello pudimos identificarlo en la
prctica mediante la reaccin Xantoproteica.
Se hidrolizo la grenetina para romper los enlaces amidicos y as se liberan los
aminocidos que forman a esta protena para posteriormente los
identificarlos, con la clara de huevo se llev a cabo una desnaturalizacin,
que no es ms que el simple desdoblamiento de una protena.
Sustancias similares que contienen en lugar del grupo carboamino grupos CS
(NH), tambin responden a la prueba. Esto indica que compuestos no proteicos
que contienen los grupos necesarios, respondern a la prueba

BIBLIOGRAFA
Mcmurry J. Qumica Orgnica. 6 Edicin. Editorial Thomson. Mxico. 2005.
Qumica orgnica fundamental. Louis F. Fieser, EDT. Reverte
Principios de qumica orgnica, T. A. Geissman, EDT. Reverte
www.bib.uia.mx/gsdl/docdig/didactic/IngCienciasQuimicas/lqoa006.pdf