Tincin de Ziehl-Neelsen

Visualizacin de Mycobacterium tuberculosis usando la tincin de Ziehl-Neelsen.

La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y

econmica, usada para la identificacin de microorganismos patgenos, como M.
tuberculosis o el gnero Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros.
Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes: Franz Ziehl, un bacterilogo,
y Friedrich Neelsen, un patlogo.

Fundamento[editar]
Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de
cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se
denominan cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como Mycobacterium tuberculosis
y M. marinum se caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La
coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese
la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua,
provoca una nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya no
puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energa cintica de
las molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias
que resisten la decoloracin son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se
utiliza azul de metileno como tincin de contraste.

Tcnica[editar]
Esta tcnica puede realizarse tanto en muestras histolgicas como citolgicas.

Variante histolgica[editar]
Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina.Los reactivos
necesarios para su realizacin son los siguientes:
1. cido perydico 58%
2. carbol fucsina de Ziehl culina(fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden
dado:
1. 0,5 g fucsina bsica
2. 50 ml agua destilada
3. 5 ml etanol absoluto
4. 28,5 g cristales de fenol derretidos

3. hematoxilina
4. alcohol cido 1%:
1. alcohol de 35
2. cido clorhdrico
El procedimiento es el siguiente:
1. desparafinar e hidratar los cortes
2. cido peridico 5%, 10 min
3. lavar con agua destilada
4. fucsina fenicada, 15 min
5. decolorar en alcohol cido al 50%
6. lavar con agua destilada
7. hematoxilina, 10 min
8. azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio
9. deshidratar, aclarar y montar preparaciones
Resultados[editar]
BAAR: rojo.
Ncleos: azul semiamarillo.
Variante clsica o "en caliente"=
1. Hacer un frotis de la muestra.
1. La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido al
portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados
falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse
del portaobjetos durante la tincin.
2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de
tincin con los extendidos hacia arriba.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada.
1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante
5 minutos. Mantenga el calor durante este perodo,
4. Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).

1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada

penetre y tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o
se seque el colorante.
2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua
corriente fra hasta que toda la tincin libre quede lavada. Lave
suavemente de manera que el extendido no se barra del
portaobjetos. Retire el exceso de agua.
5. Decolorar con alcohol-cido.
1. Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, tal como
alcohol cido y mantngalo sobre el portaobjetos durante 7
minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del
esputo que no son bacilos TBC puede permanecer teido.
Enjuague con agua una vez ms los portaobjetos y quite el
exceso de agua. Si los portaobjetos an estn rosa, aplique una
cantidad adicional de la solucin decolorante de 1 a 3 minutos.
6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
1. Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1
minuto.
7. Enjuagar con agua
1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada
portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque
cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.
8. Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersin y haga la
observacin al microscopio con 100 x 100

o en "fro" (Tincin de Kinyoun)[editar]

1. Hacer un frotis.
2. Dejarlo en el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada (solucin con fenol y mayor concentracin de
fucsina).
4. Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.
5. Decolorar con alcohol cido.
6. Lavar con agua del grifo.
7. Contrastar con azul de metileno

Algunos microorganismos cido-alcohol resistentes[editar]

Mycobacterium: fuertemente cido-alcohol resistentes.1

Nocardia y Actinomices: dbilmente cido-alcohol resistentes.2

Parsitos coccdeos (Cryptosporidium) de muestras [fecales].3