Benemrita Universidad

Autnoma de Puebla

Facultad de Ciencias Qumicas

Practica No. 12
CARACTERIZACIN DE BACTERIAS DEL
GNERO Bacillus

Ana Gabriela Machorro Jurez

M.C Maricruz Meneses Snchez.

Laboratorio de Bacteriologa l

Otoo 2014

Objetivo

Identificar por pruebas de laboratorio al gnero Bacillus.

Metodologa
1. Inocular una placa de agar sangre carnero, en el masivo se coloc un
sensidisco de novobiocina.
2. Inocular un tubo de caldo nutritivo e incubarlo a 42 C.
3. inocular en LIA
4. Leer morfologa colonial, buscar hemlisis, hacer tincin de Gram y
Shaeffer-Fulton
5. Interpretar resultados.
Numero de cepa
Cepa 49
Resultados
Tincin Gram: Bacilos grampositivos
Produccin de alpha hemolisis
Crecimiento masivo en Agar sangre, colonias blaquecinas, grandes
LIA: alcalino/acido
Descarboxilacin de la lisina negativa
Caldo: crecimiento en todo el tubo, se not la turbidez

Cuestionario
1. Cul es el fundamento de la tincin de Shaeffer-Fulton y
cmo se realiza en el laboratorio?
La envuelta de la endospora es mas compleja e impermeable que la
envuelta de las clulas vegetativas en las que se forma. Slo se puede
teir el contenido de la espora alterando su envuelta. La
impermeabilidad de las cubiertasdificulta que las endosporas se
decoloren una vez teidas.

El verde de malaquita es un colorante dbilmente bsico (tiene una

carga positiva dbil) y por tanto, se une dbilmente a la bacteria.
Penetra en las clulas vegetativa . Cuando se calienta la preparacin
tambin penetra las endosporas.
Durante el lavado con agua, el verde de malaquita se elimina de las
clulas vegetativas, pero no de la endospora.
El colorante de contraste (la safranina) solo puede teir a las clulas
vegetativas (decoloradas por el agua).
2. Menciona otras pruebas para diferenciar especies de
Bacillus.
Nuevos mtodos moleculares para la identificacin y tipificacin de B.
anthracis, basados en repeticiones en tndem de nmero variable o en
diferencias genticas detectadas por secuenciacin, desarrollados en los
ltimos aos. Los aspectos moleculares de los factores de virulencia
tradicionales, cpsula, antgeno protector, factor letal y factor edema se
describen en profundidad, junto con factores de virulencia
recientemente propuestos, como los siderforos, petrobactina y
bacilibactina, la adhesina de la capa S y la lipoprotena MntA. Tambin se
detalla la organizacin molecular de los megaplsmidos pXO1 y pXO2,
incluyendo la isla de patogenicidad de pXO1. El esqueleto gentico de
estos plsmidos se ha encontrado en otras especies relacionadas,
probablemente debido a eventos de transferencia lateral. Finalmente, se
presentan los dos receptores celulares del antgeno protector,
ANTXR1/TEM8 y ANTXR2/CMG2, esenciales en la interaccin del
patgeno con el hospedador. Los estudios moleculares realizados en los
ltimos aos han permitido aumentar enormemente el conocimiento de
los diferentes aspectos de este microorganismo y su relacin con el
hospedador, pero a la vez han abierto nuevos interrogantes sobre este
notorio patgeno.
3. Menciona medios de cultivo para el aislamiento de Bacillus.
Para llevar a cabo la determinacin presuntiva de B. cereus se utilizan
medios que contengan yema de huevo en su composicin, para poner
de manifiesto la lecitinasa, produciendo una zona opaca que rodea la
colonia, mientras que otras bacterias formadoras de esporas como por
ejemplo, B. thuringiensis, por lo general no producen la zona opaca, o si
la producen, es muy restringida. En los medios que contienen manitol y

rojo de fenol como indicador, el B. cereus no fermenta el carbohidrato y

por lo tanto las colonias se presentan rodeadas por zonas de color rojo.
Los medios de cultivo recomendados para su determinacin son, el agar
selectivo para Bacillus cereus segn MOSSEL, agar yema de huevopolimixina-rojo de fenol, agar yema de huevo piruvato, agar selectivo
segn REUTER y agar sangre de caballo en el cual se puede observar la
hemlisis provocar por cepas de B cereus.
4. Menciona las medidas de seguridad que debe tener el
laboratorio para poder trabajar con Bacillus anthracis.
Todos los procedimientos que se realizan para el diagnstico e
identificacin de B. anthracis deben ser procesados en una cabina de
seguridad 2.
Los procedimientos podrn ser realizados en los laboratorios de
microbiologa que cumplan con las normas de bioseguridad 2 como son:
-

El personal del laboratorio debe estar debidamente capacitado en

el manejo de agentes patgenos.
El acceso al laboratorio debe ser limitado. nicamente debe entrar
el personal capacitado
Los profesionales deben lavarse las manos antes y despus de los
procedimientos
No se debe pipetear con la boca.
Se debe evitar la formacin de aerosoles.
Nunca se deben tocar las superficies limpias con los guantes y se
deben lavar las manos despus de retirarse los guantes.
Descontaminar las reas antes y despus de trabajar.
No se necesita vacunacin previa.
El personal debe tener entrenamiento en bioseguridad y tener un
manual con las polticas de manipulacin y descontaminacin de
reas en casos de accidentes.
Equipo de proteccin

5. De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de

dibujos:
a) Morfologa colonial.

Agar sangre: colonias con apariencia de vidrio esmerilado.

b) Tincin de Gram.

Bacilos grampositivos
c) Pruebas de catalasa y oxidasa.
No se realizaron
d) Otras pruebas.

Medio LIA (-)

crecimiento en todo el tubo

Bibliografa:

Caldo nutritivo:

Recuperado de http://www.scielo.org.ar/pdf/ram/v43n4/v43n4a10.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/3patogenos3-nonormados_6425.pdf
http://www.col.ops-oms.org/sivigila/antrax/protocolo.htm