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METODOS INSTRUMENTALES DE ANALISIS

Anlisis Ambiental
Origen (Caracterizacin de fuentes)
Transporte y distribucin
Procesos de degradacin bitica o/y abitica
(nuevos contaminantes txicos?)
Destino final (bioacumulacin, etc)
Efectos
Lmites legales

Identificacin y Anlisis de compuestos


qumicos en el medio ambiente

Lmites exigidos por la normativa


No
75/440/EEC

Ttulo
Aguas superficiales

80/778/EEC

Agua para consumo humano

76/659/EEC

Aguas con peces

76/464/EEC

Substancias peligrosas Lista 1

Compuestos orgnicos
Cyfluthrin
Hidrocarburos
Permerthrin
Plaguicidas
Fenoles
Hidrocarburos aromticos policclicos (PAHs)
Plaguicidas individuales
Plaguicidas totales
Benzo-3,4-pireno
Tetracloruro de carbono
Tricloroetano
Tetracloroetano
Trihalometanos
Fenoles
PAHs
Cyfluthrin
Flucofuron
PCSDs i PAD
Permethrin
Sulcofuron
Tetracloruro de carbono
Cloroformo
DDT
Endrin
Aldrin
Dieldrin
Isodrin
Hexaclorobenceno
Hexaclorobutadieno
Lindano
Pentaclorofenol
1,2-dicloroetano
Percloroetileno
Triclorobenceno
Tricloroetileno

Lmites (ug/L)
0.001
50-1000
0.01
1-5.0
1-100
0.2-1.0
0.1
0.5
0.01
3.0
30.0
10.0
100.0
0.5
0.2
0.001
1.0
0.05
0.01
25.0
12.0
12.0
0.01
0.005
0.01
0.01
0.005
0.03
0.01
0.11
2.0
10.0
10.0
0.1
10.0

ppb

Anlisis especficos vs multiresiduos


Determinacin de
Determinacin del
un solo compuesto
mximo nmero de
o grupo de
contaminantes con
compuestos en una
propiedades fsicomatriz ambiental
qumicas diferentes
especfica
Metabolitos
Contaminacin global
EPA Priority Pollutants
Efectos sinrgicos o
Protocols
antagnicos

Eleccin de mtodos analticos


Parmetros qumicos

pH
Alcalinidad*
Carbono orgnico total
Oxgeno disuelto
Demanda Bioqumica de Oxgeno, DBO5
Demanda Qumica de Oxgeno, DQO*
Nitratos
Nitritos
Amonaco/amonio
Nitrgeno kjeldahl
Compuestos de fsforo
Aceites y grasas

Determinacin de compuestos
orgnicos traza

Hidrocarburos alifticos
Hidrocarburos aromticos
Aldehdos
Alcoholes y fenoles
Anilinas y bencidinas
VOCs (Disolventes clorados)
SOCs (PCBs, dioxinas)
Plaguicidas apolares y polares
Ftalatos i adipatos
Tensioactivos
...y muchos ms

Anlisis Ambiental
Toma de muestra

Tratamiento previo

Extraccin
Purificacin
(Clean-up)

Anlisis Instrumental
GC
HPLC
GC-MS; HPLC-MS

Cuantificacin

Compartimentos medioambientales

Anlisis Ambiental
Toma de muestra

Tratamiento previo

Extraccin

Purificacin
(Clean-up)

Anlisis Instrumental
GC
HPLC
GC-MS; HPLC-MS

Cuantificacin

Anlisis Ambiental
To m a de m u e stra

Tratamiento previo
Se dim e n to s, su e lo s

Eliminacin agua

Elim inacin m aterial grueso


Tam iz ado (> 250 m , 63 m )

Homogeneizar

Agua
Particulado
Eliminacin agua
Aire
Particulado
Eliminacin agua
Organismos
Eliminacin agua

Digestin cida o alcalina

H om ogeneiz ar

Eliminacin de agua

Liofilizacin
Secado en horno (35-40 oC)
Tratamiento con desecantes
Pre-extraccin con disolventes
orgnicos miscibles en agua

Anlisis Ambiental
Toma de muestra

Tratamiento previo

Extraccin
Matrices acuosas

Lquido-Lquido
Extraccin en fase slida (SPE)
Matrices slidas
Ultrasonidos

Soxhlet
Extraccin asistida con Microondas (MAE)
Extraccin con disolventes acelerada (ASE)
Extraccin con fluidos supercrticos (SFE)

Matrices acuosas. Extraccin lquido-lquido


Se extrae el total de componentes
(particulado+disuelto)
Consumo de grandes cantidades de disolvente
Problema medioambiental
Problema de blancos
Paso de eliminacin del disolvente

Protocolos largos

prdidas

Extraccin en fase slida (SPE)


Paso a travs de un adsorbente de slice
modificada qumicamente
o Cadenas hidrocarbonadas (C8 y C18)

Se extraen solo los componentes disueltos


(filtrar previamente)
Muy verstil
Rpida y sencilla (automatizacin)
Relativamente barata
Bajo consumo de disolventes
A considerar :
o Volumen de ruptura
o Capacidad
o Limpieza

Extraccin en Soxhlet
Refrigerante

Muestra
(Cartucho de
Celulosa)

1-200 gr
100-200 ml disolvente

Calor

Diagrama de fases
ASE, accelerated solvent extraction
MAE, Microwave assisted extraction
SFE, supercritical fluid extraction
Pc, presin crtica
Tc, temperatura crtica
Pc
C, punto crtico

Presin

Slido

FS

Lquido

SFE
ASE

MAE

Soxhlet
Sonicacin

Temperatura

Gas
Tc

Tcnicas de extraccin de compuestos


orgnicos en matrices slidas
Soxhlet

Sonicacin

SFE

MAE

ASE

Tiempo

++++

++

Disolventes

++++

++

++

++

Automatizacin

+++

Dificultad de
optimizacin

+++

++

++

++++

++++

+++

++

+++

Costes

Robustez

++++ +++ ++++


+++ ++++

Anlisis Ambiental
Toma de muestra

Tratamiento previo

Extraccin

Purificacin
(Clean-up)

Anlisis Instrumental
GC
HPLC
GC-MS; HPLC-MS

Cuantificacin

Anlisis Ambiental
Toma de muestra

Tratamiento previo

Interferencias ms importantes:

Extraccin

Purificacin
(Clean-up)

Cromatografia de adsorcin en columna


Ataque cido o bsico
Extraccin en fase slida (SPE)

Lpidos
Azufre
Carotenoides
Pigmentos...

Clean up del extracto


Cromatografa de columna lquido-slido
Fase mvil
Polaridad creciente

apolar

Fase estacionaria polar

Adsorbentes ms comunes:

Slice (uso general)


Almina
Florisil (Clean-up de plaguicidas organoclorados)
Poliestireno, poliacrilamida
Geles para GPC (Por ej.: Sephadex LH-20, Bio-Beads SX)
(Clean-up de muestras con alto contenido lipdico)

Eliminacin de azufre
Reaccin con mercurio
Sulfuro de mercurio
Reaccin con cobre
Sulfuro de cobre
Reaccin con sulfito de sodio en hidrxido
de tetrabutilamonio

Concentracin del analito


Evaporacin del disolvente a presin reducida
(rotavapor)
Kuderna-Danish
Corriente de nitrgeno

Anlisis Ambiental
Toma de muestra

Tratamiento previo
Extraccin

Purificacin
(Clean-up)

Anlisis Intrumental
GC
HPLC
GC-MS; HPLC-MS

Sistemas de Cromatografa
Volatilidad

Cromatografa
de gases (GC)
Cromatografa
Lquida (HPLC)

Baja

Polaridad
(Solubilidad en agua)

Alta

Mezcla de PCBs. GC-ECD

HPLC. Cromatografa lquida de alta resolucin


Generalmente en fase inversa: fase estacionaria de C8-C18;
fase mvil acuosa con acetonitrilo o etanol
til para substancias:
alto peso molecular
baja volatilidad
Lbiles, degradaciones trmicas
polares
Si son muy polares: cromatografa de
par inico o en fase normal (aminopropil, fases
mviles con disolventes orgnicos)

HPLC. Detectores
Detector de ultravioleta-visible
Detector de fluorescencia
Detector de fotodiodos (Diode-array)

Espectrometra de Masas
Identificacin inequvoca de
sustancias en matrices
complejas (CG,CL...)
Anlisis de sustancias con
propiedades fisico-qumicas
distintas (tomos a
biopolmeros)
Anlisis cuantitativos (lmites
de deteccin ppb,ppt)

Selectividad
Universalidad

Sensibilidad

Espectrmetro de Masas
Presin ~ 10-6-10-8 Torr

Introduccin
muestra

Fuente de iones
(Ionizacin)

+
+ + +
+ +

Analizador
(Separacin)

100 %

+ + +
M/Z

Detector de iones
(Deteccin)

Acoplamiento GC/LC-MS
100

Separacin
cromatogrfica

Ionizacin
0

2.00

4.00

6.00

8.00

rt
10.00 12.00 14.00 16.00 18.00

t (min)
218

100

220
%

162
164

83
84

Anlisis
espectral

98 123

100

154
150

165

222
177 216
200

223 256
250

284288
300

masa/carga

Dioxinas. Cuantificacin por EM(IE)


M+.
(M-COCl)+

Cl

Cl

Cl

Cl

2,3,7,8-Tetraclorodibenzo-p-dioxina

Anlisis Ambiental
Toma de muestra

Tratamiento previo

Extraccin
Purificacin
(Clean-up)

Anlisis Instrumental
GC
HPLC
GC-MS; HPLC-MS

Cuantificacin

Cuantificacin
Calibracin con patrones externos e internos
(identificacin por tiempo de retencin)
Blancos del procedimiento
Determinacin de
Validacin del mtodo
sensibilidad

lmite de deteccin
intervalo de linealidad
precisin
exactitud
robusteza
interferencias del mtodo

Confirmacin por GC-MS o HPLC-MS

HAP. Anlisis por CG-EM (SIM)


TIC (SIM)

+
+

Rango lineal :250-10.000 ng/ml (ppb)


LDD (S/N =3) : 2,5 - 10,5 pg

tR (min)

Anlisis multiresiduos
Sedimento marino

Liofilizacin

Tamizado (250 m)

Extraccin
Soxhlet
DCM:MeOH
(2:1)

Cromatografa adsorcin
Silica:Almina
(5% agua)

Tratamiento HCl

Anlisis elemental
% C orgnico

Hexano
Alcanos

Hexano:DCM (90:10)
PCBs, LABs

Hexano:DCM (80:20)
HAP, esteres cridos

Hexano:DCM (50:50)
Alquilnitrilos, aldehidos

DCM
Cetona esteroidales

DCM:MeOH (80:20)
Fosfatos alquilo
Esteroles, alcoholes

Eter dietlico
Trialquilaminas

CG/FID

Tratamiento Cu

GPC

CG/NPD
CG/FID

CG/FID

Derivatizacin
trimetilsilil

CG/NPD

CG/ECD
CG/FID

CG/EM

CG/FID
CG/NPD