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GUA DE PRCTICAS
F-CV3-3B-2
INTRODUCCIN
entender y
F-CV3-3B-2
I. PRCTICA N 1
REVISIN SISTEMTICA Y USO PRCTICO DE LAS OBRAS OFICIALES:
FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS DE AMRICA (USP),
FARMACOPEA BRITNICA (BP)
Y FARMACOPEA EUROPEA (EP), EDICIONES VIGENTES
1.1
Marco terico
F-CV3-3B-2
Para que las normas y los patrones sean, primero, aplicables y, luego, debidamente cumplidos,
todas las partes interesadas deben participar tan activamente como sea posible.
1.2
Competencias
Relaciona los tipo de medicamentos y formas farmacuticas, en funcin de los procesos
de fabricacin y los estndares que las obras oficiales exigen en cuanto criterios
microbiolgicos.
-
1.3
-
Materiales y equipos
Texto de las principales obras oficiales (ediciones vigentes):
o Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica (USP).
o Farmacopea Britnica (BP).
o Farmacopea Europea (EP).
1.4 Procedimiento
-
1.5 Resultados
F-CV3-3B-2
1.6 Cuestionario
-
Defina lo siguiente:
o
o
o
o
Farmacopea.
Estndar.
Monografa.
Artculo farmacopeico.
1.7
Fuentes de informacin
Ulises E. Mapas mentales una forma de estimular las ideas. [Blog en internet]. 2007,
Agosto.
[acceso
26
de
julio
de
2009];
Disponible
en:
http://el50.com/2007/08/14/mapas-mentales-una-forma-de-organizar-y-estimularlas-ideas/Autor/es.
F-CV3-3B-2
II. PRCTICA N 2
PREPARACIN Y CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO, CONTROL DE CEPAS DE
PRUEBA, CONTROL DE EQUIPOS, REGISTRO Y EVALUACIN DE INFORMACIN
USO DE INDICADORES BIOLGICOS Y QUMICOS PARA ESTERILIZACIN EN LA
INDUSTRIA FARMACUTICA
2.1
Marco terico
Competencias
Reconoce las tcnicas que sustentan las buenas prcticas de un laboratorio microbiolgico
y aplicarlas.
Aplica y experimenta las buenas prcticas microbiolgicas ejecutando las operaciones per
se.
Asume la optimizacin de las prcticas microbiolgicas en la liberacin de productos
farmacuticos.
2.3
-
Materiales y equipos
Materiales, Reactivos y Medios de cultivo:
o 30 Tubos estriles de 18 x 150 mm (con tapa rosa)
o 28 Placas Petri estriles descartables
o 12 Placas Rodac estriles descartables
o 7 Frascos x 250 mL
o 1 Frasco x 1 L
o 4 Probetas x 100 mL x 250 mL
o 1 Probeta x 1 L
o 4 Beaker de 100 mL
o 20 Pipetas x 1 mL
o 4 Pipetas x 2 mL
o 2 Micropipeta de 10-100 uL
o 30 Tips
o 2 Litros de agua destilada
o 8 Baguetas de vidrio
o 1 Bao de agua a ebullicin
o 4 Trpodes
o 4 Ollas
o 4 Guantes quirrgicos estriles
o 4 Apsitos de algodn
o Cepas de estudio:
F-CV3-3B-2
2.4 Procedimiento
2.4.1 Medios de Cultivo:
Operaciones preliminares:
- Del personal y del rea de trabajo:
Proveerse de los elementos de proteccin necesarios para la prctica microbiolgica.
Registro:
Cada vez que se prepara un medio de cultivo, se procede al registro respectivo en el formato
correspondiente, en el cual se anotan los siguientes datos: fecha, nombre del medio de
cultivo, lote, cantidad preparada, pH, nmero de lote asignado al medio preparado.
Preparacin:
F-CV3-3B-2
AGAR
PLATE
COUNT
AGAR
PLATE
COUNT
- En el recipiente elegido depositar una parte del agua medida, luego agregar el medio de
cultivo y completar con el resto del agua.
- Disolver el medio, si se trata de caldos nutritivos, con suficiente agitacin, si se trata de
medios de cultivo que contienen agar, disolver poco a poco con agua caliente hasta
observar que el medio est transparente.
- Tomar el pH del medio con el potencimetro o con cintas indicadoras de pH de rango
adecuado. Si fuera necesario, corregir el pH mediante el uso de NAOH HCl diluidos.
- Distribuir el medio de cultivo preparado en frascos, tubos u otro material segn el anlisis a
realizar.
Esterilizacin
- Cerrar los envases que contienen el medio de cultivo disuelto.
- Proceder a la esterilizacin en autoclave siguiendo las indicaciones de esterilizacin para
cada medio.
Control
- Distribuir los medios que contienen agar y as lo requieran en placas petri estriles y dejarlos
solidificar.
- Incubar los medios preparados incluyendo los distribuidos en las placas petri a una
temperatura de 30C 35C por 48 horas.
- Transcurrido el periodo de incubacin retirar los medios y almacenarlos en condiciones
adecuadas hasta su uso.
- Los
F-CV3-3B-2
Expiracin
mediosFig.
de2.5.cultivo
preparados y esterilizados, ya
Rotulado de las placas
Rev. Junio 2007
sean conservados en los recipientes que fueron esterilizados o dispensados en otros envases
en forma asptica, sern utilizados hasta un mes despus de su preparacin, en la
refrigeradora a una temperatura de 2C 8C, luego del cual sern eliminados si no se
utilizaron.
- Tambin se pueden almacenar a temperatura ambiente protegidos de la luz por un perodo
mximo de 15 das.
- Los frascos de medios de cultivo, cerrados, tendrn la vigencia que reporta el fabricante,
siempre que hayan sido conservados en condiciones adecuadas.
- Los medios de cultivo se emplearn dentro de fecha de vigencia, salvo que presenten
manifestacin visible de su deterioro, por ejemplo: en medios no reconstituidos, cambio de
color, apelmasamiento del polvo, etc. o en medios reconstituidos, agrietamiento por
desecacin, cambio de color.
Fig. 2.7.2.Indicadores
Qumicos y Biolgicos
F-CV3-3B-2
III. PRCTICA N 3
TOMA DE MUESTRA Y ANLISIS MICROBIOLGICO DEL AGUA
CRITERIOS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS EN LA INDUSTRIA
FARMACUTICA
3.1
Marco terico
Competencias
Materiales y equipos
Materiales
o 4 Frascos estriles x 500 mL con 0,5 mL de Tiosulfato de Sodio al 3%
o 4 Frascos x 500 mL con 300 mL de agua destilada estril
o 4 Mecheros Bunsen
o 4 Mecheros de alcohol
o 8 Pipetas bacteriolgicas de vidrio estriles x 10 mL con algodn
o 4 Equipos de filtracin estriles (embudo y porta membrana) dos para agua potable y
otro dos para agua purificada
o 4 Bombas de vaco
o 4 Kitasatos estriles x 1 L
o 30 Membranas filtrantes de 0,45 m de dimetro con cuadrculas, estriles
o 8 Pinzas estriles
o 10 Placas petri con agar recuento de placa (plate count) o agar de recuento de placa
de mtodos estndar o TGYA.
o 4 Frascos con 100 mL de Agar Recuento de Placa (Plate Count) o Agar de Recuento de
Placa de Mtodos Estndar o TGYA licuado
o 12 Pipetas estriles x 1 mL x 2 mL
o 24 Placas Petri estriles
o 4 Placas con Agar Mac Conckey.
o 4 Placas con Agar Cetrimide.
Medios de Cultivo
o Agar de Recuento de Placa (plate count) o Agar de Recuento de Placa de Mtodos
Estndar (TGYA): 4,125 g para 150 mL para 6 placas con medio solidificado.
o Agar de Recuento de Placa (plate count) o Agar de Recuento de Placa de Mtodos
Estndar (TGYA) 2,35 g por cada 100 mL de medio licuado.
o Agar Mac Conckey, 8 g para 160 mL de medio.
o Agar Cetrimide, 7,2 g para 160 mL de medio.
3.4 Procedimiento
-
F-CV3-3B-2
Toma de muestra:
o Desinfectar el grifo o punto de salida del agua, flameando con un mechero de alcohol.
3.5 Resultados
Registrar los resultados obtenidos.
3.6 Cuestionario
- Defina:
o Niveles de alerta
o Niveles de accin.
3.7
-
F-CV3-3B-2
IV. PRCTICA N 4
TOMA DE MUESTRA Y ANLISIS MICROBIOLGICO DE AMBIENTES Y SUPERFICIES
CRITERIOS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS EN LA INDUSTRIA
FARMACUTICA
4.1
Marco terico
Dado que los microorganismos se desarrollan en una amplia variedad de ambientes naturales,
es importante controlar su presencia, ms an cuando en la industria farmacutica se llevan a
cabo procesamientos aspticos de frmacos a granel, formas farmacuticas y en ciertos casos,
dispositivos mdicos, adems de la necesidad de la necesidad del establecimiento y control de
la calidad microbiolgica de ambientes controlados (vase USP 32, <1116>).
4.2
Competencias
Reconoce la importancia y adquiere destreza en la realizacin de controles
microbiolgicos de los ambientes en la industria farmacutica.
Aplica y experimenta la metodologa para la toma de muestra de ambientes y
superficies.
Observa las especificaciones y requerimientos de los cuartos limpios y ambientes
controlados en la industria farmacutica.
4.3
Materiales y Equipos
-
Materiales:
4.4 Procedimiento
-
_________________________
* Material preparado en la prctica N 2
F-CV3-3B-2
Control de ambientes
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
Control de superficies
4.6 Cuestionario
4.7
-
F-CV3-3B-2
V. PRCTICA N 5
PRUEBAS DE PROMOCIN DE CRECIMIENTO Y APTITUD DEL MTODO PREVIO
AL ANLISIS DE UN PRODUCTO FARMACUTICO NO ESTRIL: LISTA DE
CHEQUEO Y EJECUCIN
5.1
Marco terico
F-CV3-3B-2
Reconoce
la necesidad de ejecutar procedimientos previos a las pruebas
microbiolgicas de recuento en productos no estriles.
Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de promocin de crecimiento y
de aptitud de los mtodos de recuento microbiano.
Material y Equipos
Materiales
o 35 Tubos con 10 mL de Buffer pH 7,2 (volumen total 350 mL).
o 15 Tubos con 10 mL de Buffer pH 7,2 (volumen total 350 mL) ms Polisorbato al
0,05%
o 88 Placas Petri estriles
o 5 Pipetas de 0,1 1,0 mL
o Gradillas
o 15 Esptulas de Drigalsky estriles
o 24 Pipetas de 2,0 mL
o 12 Placas con Agar Manitol Salado
o 12 Placas con Agar Cetrimide
o 12 Placas con Agar Sabouraud
o 4 Frascos con 100 mL de Agar Digerido de Casena y Soja
o 4 Frascos con 100 mL de Agar Manitol Salado
o 4 Frascos con 100 mL de Agar Cetrimide
o 4 Frascos con 100 mL de Agar Sabouraud
o 8 Tubos com 9 mL de Caldo Agar Digerido de Casena y Soja
o 4 Tubos com 9 mL de Caldo Sabouraud
Medios de Cultivo y Reactivos:
o Fosfato monobsico de potasio
o Agar Manitol Salado
o Agar Cetrimide
o Agar Sabouraud
o Agar Digerido de Casena y Soja
o Agar Manitol Salado
o Agar Cetrimide
o Agar Sabouraud Glucosado
o Caldo Digerido de Casena y Soja
o Caldo Sabouraud
Cepas de estudio:
o
o
o
5.4 Procedimiento
Para la prueba de promocin del crecimiento de los medios se emplearn los mtodos de:
Vertido en placa, Extensin en superficie e Inoculacin Directa utilizando:
a. Agar Digerido de Casena y Soja.
b. Agar Saboureaud Dextrosa.
c. Agar Cetrimide.
d. Agar manitol salado.
e. Caldo Digerido de Casena y Soja.
-
o
o
o
-
o
o
o
-
Esparcir un volumen de 0,1 mL de suspensin (inculo de 100 ufc) en las placas que
contienen los medios segn sea el caso.
Incubar segn se indic anteriormente.
Realizar el recuento y reportar la media aritmtica del nmero de ufc obtenido en
cada medio
Contrastarlo con el nmero de ufc del inculo original.
- Inoculacin Directa:
F-CV3-3B-2
Microorganismos
5.5
Preparacin de
Cepas
Promocin de Crecimiento
RTMA
RTCHL
S. aureus
ADCS o CDCS
30 35C
18 24 h
ADCS o CDCS
100 ufc
30 35C
3d
__
P. aeruginosa
ADCS o CDCS
30 35C
18 24 h
ADCS o CDCS
100 ufc
30 35C
3d
__
B. subtilis
ADCS o CDCS
30 35C
18 24 h
ADCS o CDCS
100 ufc
30 35C
3d
__
C. albicans
A. SAB o C.SAB
20 25C
23d
A. niger
A. SAB o PDA
20 25C
57d
ADCS
100 ufc
30 35C
5d
ADCS
100 ufc
30 35C
5d
A. SAB
100 ufc
20 25C
5d
A. SAB
100 ufc
20 25C
5d
RTCHL
ADCS o CDCS
(NMP)
100 ufc
30 25C
3d
ADCS o CDCS
(NMP)
100 ufc
30 25C
3d
ADCS o CDCS
(NMP)
100 ufc
30 25C
3d
ADCS
100 ufc
20 25C
5d
ADCS
100 ufc
20 25C
5d
__
__
__
SAB
100 ufc
20 25C
5d
SAB
100 ufc
20 25C
5d
Resultados
5.7
-
F-CV3-3B-2
VI. PRCTICA N 6
ANLISIS MICROBIOLGICO DE FORMAS SLIDAS ORALES: TABLETAS Y CPSULAS
VALIDACIN DEL MTODO
61.1 Marco terico
El anlisis microbiolgico de estas formas farmacuticas incluye pruebas que permiten calcular
el nmero de microorganismos aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y
levaduras presentes, as como determinar la ausencia de especies microbianas patgenas
consideradas como indicadores de contaminacin(vase USP 32: <61>, <62>).
6.2 Competencias
-
Cepas de estudio:
Rev. Junio 2007
6.4. Procedimiento
6.4.1.Criterios a aplicar segn la solubilidad de las muestras:
Proceder a preparar las muestras a analizar para cada una de las siguientes pruebas segn los
criterios que se describen:
a. Productos solubles en agua: Dilucin 1 en 10 (o adicionales de ser necesario) del producto a
examinar (ajustando el pH de 6 a 8, de ser necesario), en:
- Solucin Amortiguada de Cloruro de Sodio-Peptona de pH 7,0
- Solucin Amortiguada de Fosfato de pH 7,2
- Caldo Digerido de Casena y Soja
b. Productos no grasos insolubles en agua: dem al anterior; puede aadirse un tensoactivo (1
g por L de polisorbato 80).
Prom. de crecimiento
Inhibitoria
Prom. Crecim + Indic.
Prom. De crecimiento
Inhibitoria
Prom. Crecim + Indic.
C. Moss
VRB
C.Mc
MC
E. Coli / P. aeruginosa
S. aureus
E. Coli / P. aeruginosa
E. coli
S. aureus
E. coli
Medio
CRV
Salmonella
XLD
Pseudomona aeruginosa
CT
Staphylococcus aureus
Mn
Clostridios
Candida albicans
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C.Ref
A.Col
C.Sab
SAB
Propiedad
Cepa
Prom. de crecimiento
Inhibitoria
Prom. Crecim + Indic.
Indicadora
Prom. de crecimiento
Inhibitoria
Prom. Crecim + Indic.
Inhibitoria
S. typhimurium
S. aureus
S. typhimurium
E. coli
P. aeruginosa
E. coli
S. aureus
E. coli
Prom. de crecimiento
Cl. sporogenes
Prom. de crecimiento
Cl. sporogenes
Prom. de crecimiento
C. albicans
C. albicans
6.5.
Pruebas de Aptitud de los Mtodos de Recuento y de Microorganismos Especficos:
Para cada producto nuevo a analizar, realizar una preparacin de la muestra de 1 en 10, al
momento de la mezcla, agregar cada cepa de prueba en el medio indicado en una cantidad de
no ms de 100 ufc (medio ms producto a analizar y ms inculo).
Realizar la prueba segn se indica en el perodo ms corto de incubacin; cualquier
actividad
antimicrobiana, requiere de la neutralizacin correspondiente.
A. Aptitud del Mtodo de Recuento
a. Inoculacin y dilucin: Agregar a las muestras de productos preparadas y a un control (sin
producto), un volumen de suspensin microbiana para obtener un inculo de 100 ufc.
b. Recuperacin de microorganismos en presencia de producto:
Filtracin por Membrana (vase figura 3.1.):
- Transferir una cantidad que represente 1 g del producto al filtro de membrana con un
volumen adecuado de diluyente.
- Transferir el filtro de membrana a la superficie del Agar Digerido de Casena y Soja
para determinar el recuento total de microorganismos aerobios (RTMA).
- Transferir el filtro de membrana a la superficie del Agar Saboureaud Dextrosa para
determinar el recuento total combinado de hongos filamentosos y levaduras (RTCHL).
- Incubar.
- Realizar el recuento y reportar.
Recuento en Placa:
Trabajar por duplicado cada medio y usar el recuento medio del resultado.
- Mtodo de Vertido en Placa (vase figura 3.2.):
Agregar 1 mL de la muestra preparada y 15 a 20 mL de los medios slidos, Agar
Digerido de Casena y Soja, y,
Agar Saboureaud Dextrosa segn sea el caso, manteniendo la temperatura de
ambos medios a no ms de 45C.
Incubar segn se indica en 5.1.c.
Realizar el recuento y reportar la media aritmtica del nmero de ufc obtenido
en cada medio
Contrastarlo con el nmero de ufc del inculo original.
Mtodo de Extensin en Superficie:
- Agregar de 15 a 20 mL de los medios slidos, Agar Digerido de Casena y Soja, y,
Agar Sabouraud Dextrosa segn sea el caso, mantenidos a la temperatura de no ms
de 45C, a cada placa.
Dejar solidificar.
Esparcir un volumen de 0,1 mL de la muestra preparada.
Incubar.
Realizar el recuento y reportar la media aritmtica del nmero de ufc obtenido
en cada medio
Contrastarlo con el nmero de ufc del inculo original.
c. Neutralizacin/Eliminacin de la actividad Antimicrobiana:
- Comparar el nmero de microorganismos recuperados a partir de la muestra
preparada y diluida versus el nmero de microorganismos recuperados a partir de la
muestra control.
- Si se inhibe el crecimiento en un factor mayor a 2 modificar el procedimiento segn
se indica a continuacin:
i. Aumentando el volumen del diluyente o medio de cultivo.
ii. Incorporando agentes neutralizantes generales o especficos en el diluyente.
iii. Filtracin por membrana.
iv. Una combinacin de todos los anteriores.
B. Aptitud de los mtodos para las pruebas de microorganismos especficos.
a. Bacterias Gram Negativas Tolerantes a la bilis (vase Fig. 6.2.a).
Preparar las muestras e inocularlas, usando como diluyente Caldo Digerido de Casena y
Soja. Mezclar e incubar a 20 - 25C por 2 horas (suficiente para resucitar bacterias),
pero no ms de 5 horas.
- Prueba de Ausencia: usar un volumen correspondiente a 1 g del producto e inocular
Caldo Mossel para enriquecimiento de Enterobacterias: incubar de 30 a 35C, durante
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24-48 horas. Subcultivar en Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa; incubar de 30 a 35C
durante 18-24 horas. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias.
- Prueba Cuantitativa: inocular Caldo Mossel para enriquecimiento de Enterobacterias
con preparaciones que contengan 0,1 0,01 g y 0,001 g mL de la muestra a evaluar;
incubar a 30 - 35C durante 18-24 horas. El producto cumple con la prueba si no se
desarrollan colonias; indicar la menor cantidad de producto que produce resultado
positivo y la mayor cantidad de producto que produce resultado negativo(vase Tabla
6.2.a.).
Tabla 6.2. Interpretacin de Resultados en la Prueba Cuantitativa de
Bacterias Gram Negativas Tolerantes a la Bilis
Cantidad probable de
Resultados para cada cantidad del producto
bacterias
0,1 g mL
0,01 g mL
0,001 g mL
+
+
+
-
+
+
-
+
-
Ms de 103
Menos de 103 y ms de 102
Menos de 102 y ms de 10
Menos de 10
CDCS (90mL)
10 g 10mL
20 25C
25h
10mL
0,1 g. o mL
0,1 g. o mL
0,1 g. o mL.
Caldo Mossel
(100mL)
30 35C
24 48 h
VRB
VRB
30 35C
24 48 h
30 35C
24 48 h
Prueba de Ausencia
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Prueba Cuantitativa
b. Salmonella: Preparar las muestras e inocularlas, usando como diluyente Caldo Digerido de
Casena y Soja; usar no menos de 10 g 10 mL para inocular Caldo Digerido de Casena y
Soja, mezclar e incubar de 30 a 35C durante 18-24 horas. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL
de Caldo Digerido de Casena y Soja e incubar a de 30 a 35C durante 18-24 horas. Transferir
0,1 mL a 10 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis para Enriquecimiento de Salmonella, e incubar
a 30 - 35 C, durante 18-24 horas. Subcultivar en una placa de Agar Xilosa Lisina
Desoxicolato. Incubar a una temperatura de 30-35C por 18-48 horas (vase Fig. 6.2.b.).
El crecimiento de colonias color rojo (con o sin centro negro) indica posible presencia de
Salmonella, lo cual debe confirmarse con pruebas de identificacin.
CDCS (90mL)
10g o 10mL
30 35C
18 24 h
0,1mL
Caldo Rappaport
Vassiliadis (10mL)
30 35C
18 24 h
XLD
30 35C
18 48 h
Fig. 6.2.b. Samonella sp.
c. Escherichia coli: Preparar las muestras e inocularlas, usando como diluyente Caldo Digerido de
Casena y Soja; usar 1 g 1 mL para inocular Caldo Digerido de Casena y Soja, mezclar e
incubar de 30 a 35C durante 18-24 horas. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL de Caldo Mac
Conckey e incubar a 42 - 44 C, durante 24-48 horas. Subcultivar en una placa de Agar Mac
conckey a 30-35C por 18-72 horas.
El crecimiento de colonias indica posible presencia de E. coli, lo cual debe confirmarse con
pruebas de identificacin (vase Fig. 6.2.c-e.).
d. Pseudomonas aeruginosa: Preparar las muestras e inocularlas, usando como diluyente Caldo
Digerido de Casena y Soja; usar 1 g 1 mL para inocular Caldo Digerido de Casena y Soja,
mezclar e incubar de 30 a 35C durante 18-24 horas. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL de
Caldo Digerido de Casena y Soja e incubar a de 30 a 35C durante 18-24 horas. Subcultivar
en una placa de Agar Cetrimide. Incubar a una temperatura de 30-35C por 18-72 horas.
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Dilucin 1/10
Diluyente (90mL)
10mL
10mL
10mL
CDCS
(100mL)
80C
10 min
30 35C
18 - 24 h
C.T.
30 35C
3-5d
Mn.
Caldo MC
(100mL)
42 44C
24 - 48 h
30 35C
18 - 72 h
Pseudomonas
aeruginosa
30 35C
18 - 72 h
M.C.
Escherichia coli
Caldo SAB
(100mL)
30 35C
18 - 72 h
Staphylococcus
aureus
Caldo Ref.
(100mL)
Caldo Ref.
(100mL)
Anaerobiosis
30 35C
48 h
A.Col.
A.Col.
SAB.
30 35C
24 48 h
Candida albicans
Anaerobiosis
30 35C
48 h
Clostridium sp.
e. Staphylococcus aureus: Preparar las muestras e inocularlas, usando como diluyente Caldo
Digerido de Casena y Soja; usar 1 g 1 mL para inocular Caldo Digerido de Casena y Soja,
mezclar e incubar de 30 a 35C durante 18-24 horas. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL de
Caldo Digerido de Casena y Soja e incubar a de 30 a 35C durante 18-24 horas. Subcultivar
en una placa de Agar Cetrimide. Incubar a una temperatura de 30-35C por 18-72 horas.
El crecimiento de colonias color amarillo, o blanco rodeado de amarillo indica posible
presencia de Staphylococcus aureus, lo cual debe confirmarse con pruebas de identificacin
(vase Fig. 6.2.c-e.).
6.4.4. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en A. y B. pero sin inculo.
6.5 Resultados
Emisin de reporte final.
6.6 Cuestionario
- Si se trata de realizar el examen microbiolgico de un antibitico, explique las operaciones
preliminares y fundamente su respuesta.
- De no contar con suficiente material de vidrio para la ejecucin de todos las pruebas
preliminares Qu hara? Obviara alguna de ellas? Procedera a la ejecucin de todas
consecutivamente? Si es as En qu orden procedera ? Fundamente su respuesta.
6.7 Fuentes de informacin
- Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP 32NF 27).
- Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin. (International Pharmacopoeia, fourth edition),
2008.
F-CV3-3B-2
VII. PRCTICA N 7
ANLISIS MICROBIOLGICO DE FORMAS SLIDAS ORALES: TABLETAS Y CPSULAS
VALIDACIN DEL MTODO
7.1
Marco terico
Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la
prctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos
aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como
determinar la ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de
contaminacin (vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
7.2 Competencias
-
Materiales
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
Polisorbato estril
Buffer, pH 7,2
Caldo Digerido de Casena y Soja
Agar Digerido de Casena y Soja
Agar Sabouraud
Caldo Digerido de Casena y Soja
Rev. Junio 2007
o
o
o
o
o
o
o
7.4 Procedimiento
7.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
7.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
7.5 Resultados
Emisin de reporte final.
7.6 Cuestionario
-
7.7
Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.
Fuentes de informacin
F-CV3-3B-2
VIII. PRCTICA N 8
VALIDACIN DEL MTODO
PRUEBAS DE APTITUD DEL MEDIO PREVIO AL ANLISIS DE UN PRODUCTO
FARMACUTICO ESTRIL
8.1
Marco terico
Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la
prctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos
aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como
determinar la ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de
contaminacin (vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
8.2 Competencias
-
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
Medio de Cultivo
Microorganismo
Especie
Incubacin
Cepa ATCC
Tiempo
S. aureus
C. sporogenes
P. aeruginosa
19404
3035C
3 das
Caldo Casoy
B. subtillis
6538
6633
9027
3035C
3 das
Caldo Casoy
B. subtillis
C. albicans
A. niger
10231
16404
2025 C
5 das
Caldo Tioglicolato
F-CV3-3B-2
7.4 Procedimiento
7.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
7.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
7.5 Resultados
Emisin de reporte final.
7.6 Cuestionario
-
7.7
Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.
Fuentes de informacin
F-CV3-3B-2
IX. PRCTICA N 9
ANLISIS DE UN PRODUCTOS FARMACUTICO ESTRIL Y
VALIDACIN DEL MTODO (TRANSFERENCIA DIRECTA: DISPOSITIVO MDICO Y
POLVO PARA RECONSTITUIR)
9.1 Marco terico
Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la prctica
precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos aerbicos
viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como determinar la
ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de contaminacin
(vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
9.2 Competencias
- Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos
especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
- Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.
9.3 Material y Equipos
o
o
o
o
o
o
o
o
o
4 Kitasatos estriles de 1 L
4 Equipos de filtracin estriles
8 Pinzas estriles
6 Membranas filtrantes estriles
1 Bomba de vaco
8 Jeringas de 20 mL descartables estriles
12 Frascos con 100 mL de peptona pH 7,1
8 Frascos con 100 mL de Medio Tioglicolato Lquido
8 Frascos con 100 mL de Caldo Digerido de Casena y Soja
9.4 Procedimiento
9.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
9.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
9.5 Resultados
Emisin de reporte final.
F-CV3-3B-2
PRUEBA DE ESTERILIDAD:
Mtodo de Transferencia Directa
Limpiar la superficie de
las envolturas que
contienen las muestras
con alcohol al 70% y
abrirlas cuidadosamente
con tijeras estriles
Con ayuda de
pinzas estriles
Llevar a
incubar por 14
das:
Caldo tioglicolato,
a 20 a 25C
Caldo tripticase
soya a 30 a 35C
Presencia de
crecimiento: el
producto no cumple
con los
requerimientos de la
prueba
Ausencia de
crecimiento: el
producto cumple
c o n lo s
requerimientos de
la prueba
9.6 Cuestionario
-
9.7
Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.
Fuentes de informacin
F-CV3-3B-2
X. PRCTICA N 10
ANLISIS DE UN PRODUCTOS FARMACUTICO ESTRIL Y VALIDACIN DEL
MTODO (FILTRACIN POR MEMBRANA: SOLUCIN INYECTABLE).
10.1
Marco terico
Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la prctica
precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos aerbicos
viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como determinar la
ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de contaminacin
(vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
109.2 Competencias
- Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos
especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
- Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.
10.3 Material y Equipos
3 Balanzas
8 Frascos con 100 mL de Medio Tioglicolato Lquido
8 Frascos con 100 mL de Caldo Digerido de Casena y Soja
4 Frascos con 500 mL de Medio Tioglicolato Lquido
4 Frascos con 500 mL de Caldo Digerido de Casena y Soja
4 Cultivos puros de Aspergillus niger en Agar Sabouraud (agar inclinado), de por lo menos
5 a 7 das.
o 4 Cultivos puros de Staphylococcus aureus en Agar Casoy (agar inclinado), de por lo menos
24 horas antes de la prctica.
o
o
o
o
o
o
10.4 Procedimiento
10.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
10.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
10.5 Resultados
Emisin de reporte final.
F-CV3-3B-2
PRUEBA DE ESTERILIDAD:
Mtodo de Filtracin por Membrana
Limpiar la
superficie de las
ampollas con
alcohol al 70%
Desmontar el equipo
aspticamente y con pinzas
estriles tomar la membrana
cortarla y transferir:
20 a 25C
Incubar por 14
das a...
30 a 35C
La otra mitad a
100 mL de caldo
thioglicolato
10.6 Cuestionario
-
Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.
F-CV3-3B-2
XI. PRCTICA N 11
OPERACIONES PREPARATORIAS PARA LA PRUEBA DE ENDOTOXINAS
BACTERIANAS, CLCULOS PARA HALLAR EL MVD: LISTA DE CHEQUEO
DETERMINACIN DE LOS LMITES DE ENDOTOXINAS PARA ARTCULOS NO
FARMACOPEICOS
11.1
Marco terico
Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la
prctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos
aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como
determinar la ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de
contaminacin (vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
Consiste en verificar si el Reactivo de Lisado de Amebocitos (LAL) tiene la sensibilidad
etiquetada y/o se encuentra dentro de los rangos aceptables (0,5 lambda a 2 lambda).
Para esto, se enfrentan diferentes concentraciones de un Control Estndar de Endotoxinas con
el reactivo de LAL.
Se reconstituye el Control de Endotoxinas (5 000 EU/vial) con 5 mL de agua apirgena
certificada, homogenizndola en un vortex por 30 minutos.
Usando micropipetas calibradas y tubos despirogenados, se hacen diluciones en forma asptica
hasta obtener concentraciones de endotoxina de: 2 , , 0,5 , 0,25 , las cuales son
equivalentes a:
Spike*: 0,6 UE/ mL
2 : 0,06 UE/ mL
: 0,03 UE/ mL
0,5 : 0,015 UE/ mL
0,25 : 0,0075 UE/ mL
11.2 Competencias
- Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos
especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
- Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.
11.3 Material y Equipos
2 Bao Mara a 37C
4 Gradillas para 40 tubos de 10 mm x 100 mm
4 Gradillas para tubos de 18 x 150 mm
4 Cronmetros
4 Termmetros
4 Micropipetas de 100 uL (Eppendorf)
4 Micropipetas de 10 uL (Eppendorf)
4 Agitadores Vortex
8 Paquetes de 50 tubos cada uno apirgenos de 10 x 75 mm
4 Cajas de tips apirgenos de 5 a 100 uL
1 Caja de tiras indicadoras de pH
50 Tubos de 18 x 150 mm despirogenizados con tapas de acero (180C x 3 horas) envueltas
en paquetes de 8 tubos con papel aluminio.
o 10 Pipetas de 10 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o 10 Pipetas de 5 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o 20 Pipetas de 1 a 2 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
F-CV3-3B-2
11.5 Resultados
Emisin de reporte final.
11.6 Cuestionario
-
Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.
F-CV3-3B-2
XII. PRCTICA N 12
PRUEBA DE ENDOTOXINAS BACTERIANAS Y PRESENTACIN DE UNA MATRIZ QUE
INCLUYE TODAS LAS ACTIVIDADES INVOLUCRADAS
12.1
Marco terico
Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la
prctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos
aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como
determinar la ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de
contaminacin (vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
Consiste en verificar si el Reactivo de Lisado de Amebocitos (LAL) tiene la sensibilidad
etiquetada y/o se encuentra dentro de los rangos aceptables (0,5 lambda a 2 lambda).
Para esto, se enfrentan diferentes concentraciones de un Control Estndar de Endotoxinas con
el reactivo de LAL.
Se reconstituye el Control de Endotoxinas (5 000 EU/vial) con 5 mL de agua apirgena
certificada, homogenizndola en un vortex por 30 minutos.
Usando micropipetas calibradas y tubos despirogenados, se hacen diluciones en forma asptica
hasta obtener concentraciones de endotoxina de: 2 , , 0,5 , 0,25 , las cuales son
equivalentes a:
Spike*: 0,6 UE/ mL
2 : 0,06 UE/ mL
: 0,03 UE/ mL
0,5 : 0,015 UE/ mL
0,25 : 0,0075 UE/ mL
12.2 Competencias
- Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos
especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
- Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.
12.3 Material y Equipos
2 Bao Mara a 37C
4 Gradillas para 40 tubos de 10 mm x 100 mm
4 Gradillas para tubos de 18 x 150 mm
4 Cronmetros
4 Termmetros
4 Micropipetas de 100 uL (Eppendorf)
4 Micropipetas de 10 uL (Eppendorf)
4 Agitadores Vortex
8 Paquetes de 50 tubos cada uno apirgenos de 10 x 75 mm
4 Cajas de tips apirgenos de 5 a 100 uL
1 Caja de tiras indicadoras de pH
50 Tubos de 18 x 150 mm despirogenizados con tapas de acero (180C x 3 horas) envueltas
en paquetes de 8 tubos con papel aluminio.
o 10 Pipetas de 10 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o 10 Pipetas de 5 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o 20 Pipetas de 1 a 2 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
F-CV3-3B-2
F-CV3-3B-2
12.5 Resultados
Emisin de reporte final.
12.6 Cuestionario
-
Elabore un alista de verificacin sobre todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.
F-CV3-3B-2
XIII. PRCTICA N 13
PRUEBA DE POTENCIA ANTIBITICA PARA UN ANTIMICROBIANO:
OPERACIONES PRELIMINARES, PREPARACIN DE MATERIALES, ESTNDAR,
INCULOS Y EJECUCIN DEL ANLISIS
13.1
Marco terico
Este ensayo aplica a las formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la
prctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos
aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como
determinar la ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de
contaminacin (vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
Consiste en verificar si el Reactivo de Lisado de Amebocitos (LAL) tiene la sensibilidad
etiquetada y/o se encuentra dentro de los rangos aceptables (0,5 lambda a 2 lambda).
Para esto, se enfrentan diferentes concentraciones de un Control Estndar de Endotoxinas con
el reactivo de LAL.
Se reconstituye el Control de Endotoxinas (5 000 EU/vial) con 5 mL de agua apirgena
certificada, homogenizndola en un vortex por 30 minutos.
13.2 Competencias
- Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos
especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
- Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.
13.3 Material y Equipos
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
3 Frascos x 50 mL
3 Frascos x 100 mL
3 Frascos x 400 mL
3 Frascos x 1 L
2 Frasco Roux
30 Perlas de vidrio
60 Placas Petri
10 Pipetas x 1 mL
10 Pipetas x 2 mL
10 Pipetas x 5 mL
10 Pipetas x 10 mL
4 Sacabocado
4 Beaker x 10 mL
3 Alcohol al 70% x 200 mL
3 Gasa
13.4 Procedimiento
13.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
13.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
F-CV3-3B-2
13.5 Resultados
Emisin de reporte final.
13.6 Cuestionario
-
Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.
F-CV3-3B-2
XIV. PRCTICA N 14
SEMINARIO DE INVESTIGACIN: PRESENTACIN DEL PROTOCOLO DE VALIDACIN
DE UN MTODO MICROBIOLGICO
14.1
Marco terico
14.2 Competencias
- Disea el protocolo de validacin de un mtodo microbiolgico y realiza la parte
experimental a nivel grupal como actividad colaborativa recopilando la data de todos los
ensayos.
- Asume la importancia de la validacin de un mtodo microbiolgico presentando el estudio
completo en el tiempo establecido.
F-CV3-3B-2
F-CV3-3B-2