GRAM DE ORINA SIN CENTRIFUGAR

Objetivo:
Determinar cuando existe contaminacin, como en el caso de que
se observen mezcla de microorganismos (ms de una morfologa
bacteriana).
Realizar la presuncin de la etiologa microbiana causante de la
infeccin, segn la morfologa observada y por lo tanto el
direccionamiento del tratamiento previo a la confirmacin con el
antibiograma.
Establecer la posibilidad de bacteriuria anaerbica en el caso de
frotis positivo con urocultivo negativo.
Alcance:
Aplica a muestras de orina que se sospeche de infeccin del tracto urinario

Condiciones generales:

Muestra de orina con recoleccin no mayor a 1 hora

Definiciones

El Gram de orina sin centrifugar es un mtodo rpido, econmico,

sensible, especfico, fcil de practicar y al alcance de todos los
laboratorios, Diferentes estudios han demostrado que la concordancia
entre la coloracin de Gram y la existencia infeccin urinaria con
urocultivo positivo es del 90.9 % con una sensibilidad del 94 %,
especificidad 90 %.

Documentos de referencia

World Health Organization Guidelines on Standard

Operating Procedures for MICROBIOLOGY. Chapter 19Urinary tract infection . 2006
Cardoso Celso Luis: Simplified Technique for Detection of
Significant Bacteriuria by Microscopic Examination of
Urine. The journal of clinical microbiology . 2008
Marina de Cueto: Diagnstico microbiolgico de la
infeccin del tracto urinario. Enferm Infecc Microbiol Clin
2005.
Achkar Jacqueline et al. Candida infections of the
genitourinary tract. Clin Micro Rev. 2010

Descripcin Narrativa

6.1 EQUIPOS
-Microscopio
-Soporte para coloracin
6.2 MATERIALES

-Portaobjetos
-Papel absorbente
-Asas bacteriolgicas
-Colorantes
1.- Cristal Violeta:
Solucin A.- Cristal Violeta................ 2,0 grs.
Alcohol Etlico. ..............20. c.c.
Solucin B.- Oxalato de Amonio........ 0,8 horas
Agua Destilada............. 80. c.c.
2.- Lugol:
Iodo Metlico................ 1,0 grs
Ioduro de Potasio.......... 2,0 grs
Agua Destilada............ 300. c.c.
3.- Alcohol Acetona:
Acetona........................ 25 c.c.
Alcohol de 95%..........
75 c.c.
4.- Fucsina Diluida:
Fucsina bsica............. 1,0 grs
Etanol.......................... 5,0 c.c.
Agua Destilada........ 1.000 c.c.

6.3 TECNICA
Utilizar una muestra de orina sin centrifugar y recin emitida. Mezclar
muy bien por inversin Utilizando una pipeta estril un asa
bacteriolgica, depositar una gota en una lmina portaobjetos ( sin
extender ) Dejar secar al aire y fijar por calor. Colorear con Gram y
examinar el frotis con objetivo de inmersin ( 100x ).
Se observa la morfologa bacteriana y se cuantifica en nmero por
campo examinando mnimo 20 campos microscpicos. La presencia
de una bacteria/campo de inmersin tiene una correlacin de > 1 x
105 UFC/mL en el urocultivo (en el 85% de los casos) correspondiente
a una bacteriuria significativa.

6.4 REPORTE
Con base en el nmero de bacterias observado y para unificar el
reporte cuantitativo, se sugiere utilizar la siguiente escala:
0
No se observan bacterias >1 Bacterias por campo (describir la
morfologa bacteriana) < 1 Bacterias por campo
En el Gram de orina sin centrifugar no deben informarse
leucocitos ni clulas epiteliales; ya que no existen criterios
interpretativos estandarizados para su reporte y pueden
desorientar el manejo teraputico.
Informe de Blastoconidias tipo Candida species:
Para el reporte de blastoconidias en el gram de orina sin centrifugar;
puede utilizarse una escala semicuantitativa as: Escasas 1- 5 /c,
moderada cantidad : 6-10/c , Abundantes >10/c. Es importante
diferenciar las blastoconidias de los precipitados de colorante que
tambin pueden presentar formas ovales. (Realizar un examen en
fresco).

ANTIFUNGIGRAMA PARA LEVADURAS

(ATBTMFUNGUS3)
Objetivo: La galera ATB FUNGUS 3 permite determinar la sensibilidad de
Cndida y Criptococcus neoformans frente a antifngicos en medio semislido
en condiciones muy prximas a las de la tcnica de referencia de microdilucin
(segn recomendaciones de EUCAST (1,6, 8) y de la CLSI (2,6).
Alcance:
Aplica a todos los cultivos de los que se aslen levaduras.
Condiciones generales:
Cultivos de menos de 24 horas, en agar saboreau
Definiciones
La galera ATB FUNGUS3 contiene 16 pares de cpulas, el primer par, sin
antifngico sirve de control de crecimiento, las 15 cpulas siguientes contienen
5 antifngicos a varias concentraciones y permiten determinar las CMI y/o
categoras clnicas, la levadura a analizar es puesta en suspensin, despus se
transfiere al medio de cultivo y se inocula en la galera, despus de incubarse
realiza lectura de manera manual, el resultado obtenido permite dar CMI
anfotericina B, fluconazol, itraconazol, voriconazol y flucitosina.
Descripcin Narrativa
EQUIPOS
-Incubadora
MATERIALES
API NaCl 0.85% Medium
Api suspensin mdium
Estndar Macfarland
Pipeta automtica
TECNICA
Abrir la ampolla cuidadosamente, colocando el protege-ampolla y
sostenindola de manera vertical y se aprieta el tapn.
sacar la galera de su embalaje, anotar la identificacin de la levadura
a analizar sobre la lengeta lateral de la galera.
con la ayuda de una pipeta tomar varias colonias de un cultivo que
pase de 4 das, realizar una suspensin de turbidez equivalente al
patrn 2 de Macfarland.
comparar con el testigo de turbidez.

NOTA: se recomienda controlar la pureza del inoculo y re-aislar en

caso de cultivos mixtos.
Transferir 20 ul de esta suspensin a ATB F2 Medium, con pipeta
automtica y homogenizar evitando formacin de burbujas, inocular
135 ul de ATBF2 Medium, por cada cpula con pipeta automtica y se
incuba a 37C por 24 horas.
Para lectura e interpretacin verificar la presencia de crecimiento
suficiente en las cpulas testigo, para cepas de cndida, si el
crecimiento es insuficiente o no hay crecimiento en estos 2 pocillos y
es imposible la lectura se deje por otras 24 horas en aerobiosis si
persiste el poco crecimiento se invalida la prueba.
Determinar CMI (AMB, FCA, ITR, VRC), buscar y cuantificar cada
cpula mediante lectura visual, sobre un fondo negro. Para cada
antifngico partir de la concentracin ms baja y anotar sobre la ficha
de resultados de crecimiento para cada una de las cpulas
conparando con las cuplas testigo.
DEFINICIN
Ausencia de reduccin de crecimiento
Ligera reduccin de crecimiento
Marcada reduccin de crecimiento
Crecimiento muy dbil
Ausencia de crecimiento

VALORACIN
4
3
2
1
0

Para la Anfotericina B (AMB), la CMI corresponde a la concentracin ms baja

que permite obtener una inhibicin completa del crecimiento (valoracin 0)
Nota: 1 colonia aislada con un crecimiento en la periferia de la cpula debe
valorarse como 1. para el fluconazol (FCA), Itraconazol (ITR) y Voriconazol
(VRC) debido a la posibilidad del fenmeno de crecimiento residual la CMI
correspondiente a la concentracin de antifngicos ms baja permite obtener
una valoracin 2, 1 o 0.
Nota: 1 colonia aislada con un crecimiento en la periferia de la cpula debe
valorarse como 1.
Interpretacin de Flucitosina (5FC): buscar y cuantificar en las 2 cpulas un
crecimiento mediante lectura visual. cuando es probada a 2 concentraciones:
Escala de crecimiento
Resultados
La cepa es
c
C
c
C
0/1/2
0/1/2
S
Sensible
3/4
0/1/2
+
I
Intermedia
3/4
3/4
+
+
R
Resistente
CONCENTRACIONES CRTICAS UTILIZADAS
Concentraciones en mg/L recomendadas por la CLSI/NCCLS para Candidas
S
I
R
Flucitosina
4
8-16
32
Anfotericina B
ND (no definido CLSI)
ND
ND

Fluconazol
Itraconazol
Voriconazol

8
0.125
1

16-32
0.25-0.5
2

64
1
4