LABORATORIO BIOQUMICA

INTEGRACIN 12 05 2015
Lpidos: Macromolculas heterogneas simples y complejas. Funcin de
reserva como energa, nuevas membranas y proteccin (ceras), estructura
de membrana, hormonas.

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

-

El papel del cloroformo y el metanol, los lpidos se disuelven en el

cloroformo y el metanol sirve para precipitar porque baja la constante
dielctrica del agua.
El bao de hielo es para evitar que dicho cloroformo se volatilice.
El volumen del filtrado = rendimiento del colesterol
El KCl es una sal y la utilizamos para realizar un salting out
quedando as tres fases, siendo la ltima fase (cloroformo + lpidos) la
que utilizamos.

Esquema representativo de la idea anterior, imaginar que son las fases

contenidas en el tubo en el que se realiz la obtencin de los lpidos antes
de la cromatografa.

AGUA
KCl
CLOROFORMO +
LPIDOS
Placas de silica
-

Los lpidos que se identificaron fueron los siguientes

Molibdato: 5 manchas de manifiesto, lpidos neutros no.

Bismuto: Grupo colina (buscar frmula)
Ninhidrina: grupo amino
Yodo: dobles enlaces

DETERMINACIN DE COLESTEROL
-

Lieberman-Burchard (lpidos en cloroformo): complejo entre los 2

colesteroles que segn la unin ser el color del complejo ya sea azul
o amarillo, la combinacion de ambos da el color verde que es el que
se lee en el espectrofotmetro.
PARA SACAR LA CURVA TIPO
NOTA: El volumen de filtrado para los equipos que utilizamos
el estndar de colesterol hecho por la profesora Lourdes se
tomar como 4.5 ml, para aquellos que utilizaron el de el o los
frascos color mbar, debieron anotar el volumen de filtrado
que vena en dichos recipientes.
La grfica:
Absorbancia

Pb = abs

Colesterol (mg) o (g) DE

PREFERENCIA UTILIZAR mg

PARA CALCULAR EL RENDIMIENTO DE COLESTEROL

Usar una regla de 3
Cantidad de colesterol en mg del Pb
ml
X
del filtrado (VER NOTA)

-------------

5L o 0.005

-------------

volumen

Sin embargo el resultado de X que salga slo ser el de de yema,

ESE VALOR DEBER multiplicarse por 2 para obtener el valor de
rendimiento de una yema entera.

GLUCGENO 1
Obtencin del glucgeno, muerte cervical del ratn, extraer hgado ya
que ste rgano contiene mayor almacenamiento de glucgeno, al
igual que msculo esqueltico.
Lavar en agua fra, eliminar exceso de sangre para evitar que
enzimas, y protenas isgan actuando, en ste caso, la adrenalina que
degrada al glucgeno.
Pesar hgado y depositar en mortero fro en pedacitos para evitar que
las enzimas sigan hidrolizando.
Agregar TCA 10% (disuelve el glucgeno) + arena (abrasivo que
rompe membranas y saca el glucgeno).
Centrifugar al sobrenadante se le agrega CH 3CH2OH para precipitar al
glucgeno (porque disminuye la cte. Dielctrica y por lo tanto p.p.).
Lavar mortero con TCA 5% con el afn de recoger el glucgeno que
pueda llegar a quedar y volver a centrifugar.
La pastilla ahora contiene al glucgeno que obtuvimos.

CLCULOS
Porcentaje terico del glucgeno = 7%
OTRA REGLA DE TRES AQU TAMBIN

El peso del hgado experimental que utilizaron ------------------ 100%

X

------------------

7%

ESE RESULTADO
X resultado de glucgeno en gramos --------------------------------- 100 %
Aqu va la diferencia en el peso de la charola vaca y con glucgeno -------X
STE LTIMO RESULTADO SER EL VERDADERO RESULTADO DE
RENDIMIENTO EN PORCENTAJE.

CARACTERIZACIN DEL GLUCGENO

Molisch debe dar positiva sino no existe presencia de CHOs

Biuret (unin de Cu con enlace peptdico a partir de 3 a.. en
adelante) si es positiva ser morado si es negativa azul.
Ninhidrina debe dar una coloracin violcea.
Lugol rojizo por ser un polisacrido ramificado.
Para saber las unidades que forman al glucgeno
HIDRLISIS (cortar los enlaces glucosdicos de la glucosa)
1. Hidrlisis cida: HCl 4N, incubacin 30 min. 92C rimpe los enlaces
1-4 y 1-6
2. Hidrlisis enzimtica: Amilasa concentrada + NaCl 5%, 30 min. A
temp. Amb. Rompe enlaces 1-4 liberando solamente glucosas
pero deja unidos los 1-6.

ltimas pruebas para los tubos hidrolizados

Fehling, hidrlisis cida positiva (mayor p.p. por la ruptura de todos

los enlaces), agua negativa e hidrlisis enzimtica positiva (menor
p.p. porque no se rompen todos los enlaces).
Seliwanoff, ser positiva en un tiempo prolongado ya que la glucosa
es una aldosa, se espera negativo en un tiempo corto.
Lugol, en ste punto, ahora deber ser negativo puesto que ya no es
un polisacrido despus de la hidrlisis.

LTIMA NOTA: COMPAEROS, SI ALGO DE LO LEDO

ANTERIORMENTE NO LO HABIS COMPRENDIDO NO DUDEN EN
CONSULTARME PARA DISIPAR SU DUDA, AUNQUE UNA OPCIN
PROPUESTA TAMBIN POR LAS PROFESORAS DEL LABORATORIO FUE
EL HECHO DE LAS BUSQUIS PARA ACLARACIONES MS
PROFUNDAS, ESPERO LES SEA DE AYUDA LA INFORMACIN
ANTERIOR, QUE, LITERALMENTE FUE TODO LO QUE NOS DIERON EL
VIERNES PASADO.