Вы находитесь на странице: 1из 81

UNIVERSIDADNACIONALAUTNOMADEMXICO

FACULTADDEQUMICA
DEPARTAMENTODEFARMACIA

FarmacologaI
Clavedelamateria1408

GuindePrcticas
2007

AndrsNavarreteCastro
LianaMedinaCruz
JosLuisBalderasLpez

FarmacologaI.GuindePrcticas.

Estematerialsedesarrolloconelapoyodel

ProgramadeApoyoaProyectosparalaInnovacinyMejoramientodelaEnseanzaPAPIME
conlaclavePE205306

Proyecto:Desarrollodeprocedimientosparalaenseanzadelafarmacologaexperimental
basadaenelprincipiodelas3Rs:Reduccin,RefinamientoyReemplazodeanimalesde
laboratorio.

ElcontenidodeestematerialfuerevisadoporlosprofesoresdeLaboratoriodeFarmacologaI
delsemestre20071.

FarmacologaI.GuindePrcticas.

Tabladecontenido.

PRCTICAS.

1. Marcoconceptualdellaboratoriodefarmacologa

2. Determinacindelaventanadeactividadbiolgicayladosisefectiva50

conunsistemasimulado.
3. Determinacindelaconcentracinletal50(CL50)dedicromatodepotasio

13

enArtemiasp.
4. Determinacindeparmetrosfarmacocinticosenunmodelodevidrio.

21

5. Determinacin experimental de la dosis efectiva 50 (DE50) sedante en

29

ratones.
6. Influenciadelavadeadministracinsobrelarespuestafarmacolgica.

36

7. Excrecinrenaldecidoacetilsaliclicoenvoluntarios.

40

8. Demostracindelefectosinergistayantagonistaenunsistemasimulado.

46

9. Demostracindelefectosinergistayantagonistaenunsistemadergano

54

aislado.

APNDICES.

ApndiceI.TabladeconversindeproporcinaunidadesProbit.

63

ApndiceII.Tcnicasdemanejoeidentificacindeanimalesdelaboratorio(rata

yratn).

64

ApndiceIII.InstructivoparaelusodelpolgrafoBiopacSystemMP100.

69

FarmacologaI.GuindePrcticas.

1.Marcoconceptualdellaboratoriodefarmacologa.

Lafarmacologaesunacienciaexperimentalporexcelencia.Losmtodosutilizadosparaevaluar
laseguridadylaeficaciadelosfrmacosutilizasistemasbiolgicosquevandesdefragmentos
celularesomacromolculasaisladashastapoblacionesenteras.Enunagranpartedelproceso
de investigacin farmacolgica se utilizan animales de laboratorio ntegros. Sin embargo, la
creciente sensibilidad respecto a la prctica de la experimentacin en animales en la
investigacinyenlaenseanzadelascienciasbiomdicas,ylabsquedadeenfoquesnuevos
enlosaspectosprcticosdelamismasonpartedeundebateactual(JukesyChiuia,2003).

La utilizacin de animales de experimentacin en la enseanza de las prcticas de diferentes


asignaturas de las Ciencias Biomdicas y en especial de la farmacologa, ha venido siendo la
metodologamsempleadaportodoslosprofesoresdeestadisciplina.Graciasalautilizacin
deestosanimales,losestudianteshanpodidoapreciarlosdiferentesefectosfarmacolgicosy
losprincipiosdelaaccinfarmacolgica.Entrelasprcticasclsicasquesehanrealizadoenla
mayoradeloslaboratoriosdefarmacologa,algunasdeellastienenuncomponenteimportante
decrueldadysondepocaaceptacinporalgunosdelosestudiantes.Unadelasprcticasque
nosepuedeaceptaresladeterminacindeladosisletal50(DL50)enratasoratones,parmetro
que est en duda su utilidad como parmetro para estimar la seguridad de los frmacos y
sustanciasnuevas.Esobvioqueelusodeanimaleseraelnicomtododelquedisponanlos
profesoreshacealgunosaosparaensearfarmacologa.Peroenlosltimosaoslascosashan
cambiadoyelavancedelainformtica,delastecnologasdelaimagenyladisposicindelneas
celulareshapermitidoeldesarrollodenumerosasalternativasquenorequierenelusodelos
animalesparalograrlosobjetivosdocentesqueseplanteanenlasprcticasdelaboratoriode
farmacologa(VanderValk,etal.,1998;Vinardell,2003;Ederetal.,2006).

Losmtodosutilizadosenlainvestigacin,paralaevaluacindelaseguridady/otoxicidadyen
laenseanzaestnencontinuoprogresoyaqueloscientficosestnenpermanentebsqueda

FarmacologaI.GuindePrcticas.

deposiblesalternativasquemejorenlacalidaddesutrabajo.Elloesdebido,enparte,alalgica
evolucin de los conocimientos cientficos y de sus aplicaciones tecnolgicas, y en parte, a
consideracionesticas,logsticas,econmicas,sociopolticasylegales(SterlingyRispin,2002).
El nmero de animales utilizados en Europa con fines educativos es relativamente pequeo
comparado con el nmero total de animales utilizados en investigacin y se ha venido
reduciendoenlosltimosaos,peroapesardeellotodavasepuedereducirms.EnMxicoel
uso de animales en docencia es alto aunque no se cuentan con datos precisos de cuantos
animales se sacrifican en cada ciclo escolar. Por otro lado la aplicacin de la Norma Oficial
Mexicana(NOM062ZOO1999)hasidolentaenloslaboratoriosdeenseanzadelasciencias
biomdicas. En cambio, en el artculo 25 de la Convencin Europea para la Proteccin de los
Animales Vertebrados utilizados en Experimentacin y otros Fines Cientficos se especifica:
"aquellosprocedimientosllevadosacaboconfineseducativosodeentrenamientosedeben
restringir a los absolutamente necesarios para los fines relativos a la enseanza y el
entrenamiento y se permitirn nicamente si sus objetivos no pueden ser conseguidos por
mtodos audiovisuales u otros que sean suficientemente efectivos". En las legislaciones
relacionadasconlaproteccindelosanimalesdetodoslospasesdelaComunidadEuropease
considerafundamentalaplicarelprincipiodelas3Rs,promulgadoporRussellyBurchen1959
(Russell y Burch, 1959). Este principio nos indica la necesidad de Reemplazar los animales de
experimentacinporotrosmtodos,siemprequeseaposibleyqueelnuevomtodonosaporte
elmismogradodeinformacin,deReducirelnmerodeanimalesdeexperimentacincuando
su uso sea necesario y se presente como el nico mtodo vlido y finalmente, de Refinar las
tcnicasempleadasconlosanimales,conelfindemejorarsueficaciaodisminuireldoloroel
gradodesufrimientoinfligido(vanderValk,etal.,1998;Vinardell,2003).

Enelcasodeladocenciaseplanteaelreemplazodelosanimalesdeexperimentacinporotros
mtodos.Entrelosmtodospropuestossepuedencitar:

a) Modelos,maniquesysimuladoresmecnicos.
b) Pelculasyvdeos.

FarmacologaI.GuindePrcticas.

c) Simulacionesdeordenadorysistemasderealidadvirtual.
d) Autoexperimentacinenelpropioindividuo.
e) Experimentosconvegetalesincluyndosehongosyalgas.
f) Usodematerialprocedentedelosrastros.
g) Estudiosinvitroconlneascelulares,organismosinferiorescomobacterias,nematodos,
insectosopecesenetapatemprana.
h) Aprovechamiento de animales muertos de forma natural o utilizados despus de un
procedimientocientfico(VanderValk,etal.,1998;Vinardell,2003).

EnelLaboratoriodeFarmacologaIseplanteaeldesarrollodeprocedimientosexperimentales
yactividadesenlosquebajoelprincipiodelastreserressereduzca,sereemplaceyserefine
elusodeanimalesdelaboratorioparacubrirlosobjetivosdelaenseanzaexperimentaldela
farmacologa.

Considerando lo anterior, en el laboratorio de farmacologa se realizarn actividades de tres


tipos:

1) Simulaciones. Se realizarn simulaciones en la computadora que permita a los


estudiantes la comprensin de aspectos que sin la necesidad de repetir muchos
experimentos puedan comprender los conceptos y los procedimientos para definir
parmetrosfarmacolgicos.

2) Prcticas. Desarrollo de prcticas sencillas, con lo que se pretende conozca tcnicas y


hbitosdellaboratoriodefarmacologa.

3) Demostraciones. En esta categora se realizan experimentos los cuales debido a las


siguientesrazonesnoesposiblequelarealicenlosestudiantesenformaindividualoen
grupospequeos:

FarmacologaI.GuindePrcticas.

a. El experimento requiere de cierta destreza que en una o dos sesiones no es


posiblequelasaprendaelestudiante.
b. Laexistenciadeequipodelaboratorioenunnmeroreducido.
c. Eltiempolimitadoparalasesindelaboratorio.

4) Autoexperimentacin.Sinponerenriesgoenningngradolaintegridadylasaluddelos
estudiantes.Serealizarunaprcticaparaobservaralgunosprocesosfarmacocinticos
deunfrmaco(cidoacetilsaliclico).

Cualquiera que sea la modalidad del procedimiento que se realice cada uno de ellos debe
comprender las siguientes partes: familiarizacin con el procedimiento, ejecucin del
procedimientoydiscusindelprocedimiento.

Conestosprocedimientossepretende:

Facilitarelaprendizajedelosaspectosfundamentalesdelafarmacologa.

Familiarizaralosestudiantesconelmtodocientficoenexperimentosdefarmacologa.

Enseartcnicasyhbitosdellaboratoriodefarmacologa.

Motivar a los futuros farmacuticos hacia la investigacin y estudio de la farmacologa


comoreadedesarrolloprofesional.

BIBLIOGRAFA.

EderC,FalknerE,NehrerS,LosertUySchoefflH.(2006).Introducingtheconceptofthe
3Rsintotissueengineeringresearch.AltexAlternativenZuTierexperimenten.23:1723.

JukesN,ChiuiaM.(2003).FromGuineaPigtoComputerMouse.2Edicin.InterNICHE.
Lndres.

FarmacologaI.GuindePrcticas.

MeyerB,FerrigniN,PutnamJ,JacobsenL,NicholsD,McLaughlinJ.(1982).BrineShrimp:
Aconvenientgeneralbioassaysforactiveplantconstituents.PlantaMedica.45:3134.

RussellW,BurchR.(1959).ThePrinciplesofHumaneExperimentalTechnique.Methuen,
Lndres.

TallaridaR.(2000).Drugsynergismanddoseeffectdataanalysis.Chapman&Hall/CRC.
EUA.

Van der Valk J, Dewhurst D, Hughes I, Atkinson J, Balcombe J, Braun H, Gabrielson K,


GruberF,MilesJ,NabJ,NardiJ,VanWilgenburgH,ZinkoUyZurloJ.(1998).Alternatives
totheuseofanimalsinhighereducation.ATLA27:3952

VinardellP.(2003).Alternativasalusodeanimalesdeexperimentacinenlasprcticas
defisiologa.BoletndelaSociedadEspaoladeCienciasFisiolgicas.6(1).

FarmacologaI.GuindePrcticas.

2. Determinacin de la ventana de actividad biolgica y la


dosisefectiva50conunsistemasimulado.

Nmerodesesionessugeridas:1sesin(ejecucinyanlisis).
TemasrelacionadoconelcursodeteoradeFarmacologaI:Farmacometra,curvadosisrespuestacuantal.

I.INTRODUCCIN

Dentrodelascienciasbiolgicas,entreellaslaFarmacologa,losanimalesmuchasvecestienen
unpapelcentralenlasclasesprcticasenellaboratorio.Cientosdemillonesdeanimalesson
usadosparaexperimentososacrificadosparasudiseccincadaaoentodoelmundo.

La visin actual del uso de animales es una educacin completamente humana, donde los
objetivosdelaenseanzasonalcanzadosusandomtodosalternativos,ydondelacompasin,
respectoalavida,yelpensamientocrticosonvaloradosydesarrollados.Esunavisindonde
los alumnos tienen libertad de conciencia y la relacin negativa con los animales ha sido
transformada al pensamiento positivo en lugar del uso daino de animales (Jukes y Chiuia
2006).

Ungrannmerodecompuestosyfrmacoscuentanconladeterminacinexperimentaldelos
valoresdedosisefectiva50(DE50),dosistxica50(DT50)ydosisletal50(DL50).Elclculodeeste
parmetro se puede predecir mediante ecuaciones que explican el fenmeno farmacolgico
(Tallarida,2000).Porloqueutilizandolosvaloresdescritosenlaliteraturaesposiblesimularla
adicin de diferentes dosis o concentraciones de diferentes frmacos en un sistema en
computadora, donde el alumno podr construir curvas dosisrespuesta y por lo tanto
determinarlaDE50,sinelusodeanimalesdelaboratorio.

FarmacologaI.GuindePrcticas.

II.OBJETIVOS

Losobjetivosdeestaprcticason:

1. Comprenderlaimportanciadeladeterminacinlaventanadeactividadbiolgicadelos
frmacos.
2. Aprenderelusodeunsistemasimuladoencomputadora.
3. CalcularlaDE50deunaseriedefrmacospormediodelaecuacindeHill,conlosdatos
obtenidosenelsistemasimulado.

III.MATERIAL

a)

Software

SeutilizarelsoftwareSimCDRver.1.0desarrolladoexprofesoparalaprcticaporelM.
enC.JosLuisBalderasdelaFacultaddeQumicadelaUNAM.
Elsoftwarepuedeserdescargadodelsiguientevnculo:

http://www.paginasprodigy.com/luisbald

El softwaredeber ser instalado en una PC o compatible con Microsoft Windows 98


posterior.

IV.PROCEDIMIENTO

a) ManejodelsoftwareSimCDRver.1.0

Para el uso adecuado del software se dividir su manejo por procedimiento con

referenciaalesquemasiguiente:

10

FarmacologaI.GuindePrcticas.

Informacinbsicadel
frmacoautilizar

Seleccindel
frmacoautilizar
Seleccindel
nmerodedosisque
seevaluarn
Seleccindelas
unidadesdedosis
queseutilizarn

Casillasdecaptura
dedatosdondese
colocarnlasdosisa
evaluar

Botnparaelclculo
delosdatos

Botndeborradode
todoslosdatos

Casillasdedatosde
lasimulacin

1) Iniciodelprogramayejecucindeunnuevoexperimentosimulado.

a) Parainiciarelprogramasedebeoprimirelsiguienteicono:

b) EnlacasilladeFrmacoseseleccionaelfrmacoqueseutilizarenlasimulacin.En
laventanaInformacindelfrmaco,aparecernunabrevedescripcindelmismoas
comosuactividadfarmacolgicamsimportante.
c) Seseleccionanelnmerodedosisautilizarascomolasunidadesqueseutilizarn,
enlascasillasNm.dedosisyUnidades,respectivamente.
d) SellenanlascasillasqueaparecenenlaventanaDosisaprobaryseoprimeelbotn
Calcularel%deefecto.Sialgunadelascasillasanterioresestnenblanco,aparecer
unmensajedeerror.

11

FarmacologaI.GuindePrcticas.

e) EnlaventanaResultadosaparecernlasadosisqueseadministraronsimuladamente
ylosporcentajesderespuestaquedarandichasadministraciones.
f) Para iniciar un nuevo experimento simulado, se deber oprimir el botn Borrar
datos,osiseprefiere,cambiarlosdatosenlascasillascorrespondientes.

V.ANLISISDERESULTADOS

1.

Conlosdatosobtenidosenlosexperimentossimulados:

a) Construirlascurvasdosisrespuestadelosfrmacosutilizados.
b) Calcular la DE50 para la actividad principal de los frmacos utilizados mediante la
EcuacindeHill.

II.BIBLIOGRAFA

TallaridaR.(2000).DrugSynergismandDoseeffectDataAnalysis.Chapman&Hall/CRC.
EUA.

JukesN,ChiuiaM.(2003).FromGuineaPigtoComputerMouse.2Edicin.InterNICHE.
Lndres.

12

FarmacologaI.GuindePrcticas.

3. Determinacin de la Concentracin Letal 50 (CL50) del


dicromatodepotasioenArtemiasalina.

Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
TemarelacionadoconelcursodeteoradeFarmacologaI:Farmacometra,curvadosisrespuestacuantal.

I.INTRODUCCIN

Unbioensayopuedeserdefinidocomocualquierpruebaqueinvolucraorganismosvivos,asu
vez se puede sealar como cualquier mtodo por medio del cual alguna propiedad de una
sustanciaomaterial,esmedidaentrminosdelarespuestabiolgicaqueproduce.Larelacin
entrelarespuestabiolgicayladosisolaconcentracindeunasustanciaactivaserelacionaen
lallamadacurvadosisrespuesta.Estarelacinpuededarsedeformagraduadaolarespuesta
puedeserdetipotodoonada,tambinconocidacomocuantal.

Enestaprcticaserealizarunexperimentoenelcualseanalizarelsegundotipoderelacin
curva dosis respuesta, es decir se analizar la curva dosisrespuesta cuantal, que debido a la
formaenlaqueserealizarpropiamentesedebereferircomolacurvaconcentracinrespuesta
cuantal. Se utilizar como sistema biolgico el crustceo Artemia salina en su forma adulta y
comolarvaonauplio,ycomosustanciadepruebaaldicromatodepotasio.

II.OBJETIVOS

Losobjetivosdeestaprcticason:

1. Manejarunsistemabiolgicoalternoalosmamferosyroedoresparaladeterminacin
deunacurvaconcentracinrespuestacuantal.
2. ComprenderelsignificadoylautilidaddelaCL50.
3. RealizarelclculodelaCL50medianteelanlisisProbit

13

FarmacologaI.GuindePrcticas.

III.MATERIAL

1. UtilizandoArtemiasalinaAdulta.

a)

Materialbiolgico

De100a200ejemplaresadultosdeArtemiasalina.

b)

Materiales,cristalerayequipo

Unvasodeprecipitadode500mL

Unapipetagraduadade2mL

Unapipetavolumtricade10mL

24frascosvialesmarcadosparaunvolumende5mL

Unalmparadeescritorio.

1PipetaPasteurconbulbo

Aereadorconmanguerayfiltro

c)

Reactivos

100mLdedisolucindedicromatodepotasio,K2Cr2O7(50mg/mL).

Disolver5gdedicromatodepotasioen50mLdeaguadestilada,unavezdisuelto
aforaraunvolumende100mLconaguadestilada.

2. UtilizandonaupliosdeArtemiasalina.

a)

Materialbiolgico

HuevecillosliofilizadosdeArtemiasalina.

a)

Materiales,cristalerayequipo

Peceradevidriocapacidad2L

Pecerade500mL

14

FarmacologaI.GuindePrcticas.

24frascosvialesmarcadosparaunvolumende2mL

Pipetasdevidrio

Jeringasde1mL

Focosumergiblede5W

Termmetroparapecera

MatrazErlenmeyerde1L

Vasosdeprecipitadosde100,500mL

5PipetasPasteurconbulbo

Aereadorconmanguerayfiltro

b)

Reactivos

100mLdedisolucindedicromatodepotasio,K2Cr2O7(50mg/mL).
Disolver5gdedicromatodepotasioen50mLdeaguadestilada,unavezdisueltoaforar
aunvolumende100mLconaguadestilada.
100mLdedisolucindedicromatodepotasio,K2Cr2O7(25mg/mL).
Disolver2gdedicromatodepotasioen50mLdeaguadestilada,unavezdisueltoaforar
aunvolumende100mLconaguadestilada.
500mLdeaguademarartificial.
Disolver16gdesalmarina(oensudefectoclorurodesodio,NaCl)en500mLdeaguay
colocardosgotasdeanticloro.Dejarreposarpor10minutosyfiltrarsiesnecesario.
Anticloro(tiosulfatodesodio,Na2S2O3,al1%).

IV.PROCEDIMIENTO

1. UtilizandolaArtemiasalinaAdulta.

a) PreparacindelaArtemiaSalina
1) ManteneralaArtemiasalinaenelvasodeprecipitadoconaeracinconstante.

15

FarmacologaI.GuindePrcticas.

2) Portriplicadorotularlosfrascosvialesconlassiguientesconcentraciones:0,4,6,8,12,
16y20mg/mLycoloqueunamarcaaunvolumende5mL.
3) Colocar10artemiasencadavialconayudadelapipetaPasteurcomosemuestraenla
figura siguiente. Utilice la luz de una lmpara como fondo para facilitar el conteo. La
cantidad total de agua que resulta de la adicin de las artemias debe ser de
aproximadamente1mL,siesnecesarioretireelexcedente.

Pipeta
Pasteur

1horadeexposicin
bajoluzblanca

Artemiasalina

Volumenfinalde
losviales:5mL

2
3

Control46810121620

CONCENTRACIONES(mg/mL)

16

FarmacologaI.GuindePrcticas.

b) Adicindeldicromatodepotasio
1) Adicionar las siguientes cantidades de dicromato de potasio indicadas en la siguiente
cuadro:

Concentracin
(mg/mL)

Volumendeladisolucinde
dicromatodepotasio(mL)

0(Control)

0.4

0.6

0.8

10

1.0

12

1.2

16

1.6

20

2.0

2) Inmediatamente despus de la adicin de la solucin de dicromato de potasio se


adicionalacantidadnecesariadelasolucindeaguademarparallevaraunvolumen
finalde5mL.
3) Dejarduranteunahoraenexposicinbajoluzblanca.

c) Lecturaderesultados
1) Al trmino del periodo de exposicin se contarn las artemias que sobrevivieron de la
siguientemanera:
a. Las artemias que presentan movimiento, aunque sea este mnimo, se
consideranvivas.
b. Lasartemiasquepermaneceninmviles,seconsideranmuertas.

17

FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.

2. UtilizandonaaupliosdeArrtemiasalin
na.

ncubacindeeloshueveccillosdelaA
ArtemiaSalin
na
a) In
1. Seearmaeldisspositivodeincubacincomosemu
uestraenlassiguientefigura.

Pecceracondispositivosdeincubacin(1),aerracin(2)eilum
minacin(3).

2. Seecolocan30
00mLdeagu
uademararrtificialenlapeceradeincubacin.
3. Co
olocar una cantidad
c
dee agua corrieente en la pecera
p
mayor, aproxim
madamente a
a una
teemperatura de 2628C y dejar quee alcance el equilibrio con
c el agua de la pecera de
in
ncubacin.
4. Co
onectarlosd
dispositivosdeaeracinyluz.
5. Ad
dicionar los huevecilloss en la peceera de incubacin con una esptu
ula limpia y seca
(aaproximadam
mente10ggdehuevecillos),colocarenlazonaobscuradelapecerade500
m
mL.Dejarincu
ubardurantee48h.

b) Prreparacind
delosvialessyrealizaci
ndelexperrimento.
Apartirdeestemomento
oseseguirn
nlospasosa
a),b)yc)delexperimentollevadoacabo
co
onartemiasadultas,colo
ocandoenlu
ugardeestaasalosnaup
pliosyutilizandoladisolu
ucin
dee25mg/mLdedicromattodepotasio.

18

FarmacologaI.GuindePrcticas.

V.ANLISISDERESULTADOS

1. Setabulanlosdatosobtenidosenelsiguientecuadro:

REPETICIONESDELEXPERIMENTO
CONCENTRACIN
(mg/mL)

ni

ri

ni

DATOSFINALES

ri

ni

ri

ni

ri

pi

yi

CONTROL
4
6
8
10
12
16
20
ni=nmerodeartemiasutilizadasporconcentracinporcadarepeticin

ni=nmerodeartemiastotalesutilizadasporconcentracin

ri=nmerodeartemiasmuertasporconcentracinporcadarepeticin

ri=nmerodeartemiastotalesmuertasporconcentracin

pi=probabilidadporconcentracin(pi=ri/ni)

yi=unidadprobitcalculadaportablasapartirdepi

2. Conlosresultadosobtenidos:
Realicelacurvaconcentracinrespuestacuantalparaeldicromatodepotasio.
CalculelaCL50ysuslmitesdeconfianzadeldicromatodepotasiopormediodelanlisis
Probit.UtilicelatabladeconversindeprobabilidadaunidadesProbitdelApndiceI.

3. Conlagrficarealizadaylosvalorescalculadosanalice:
Losdatosencontradosconrespectoalosdatosinformadosenlaliteratura.
Lasventajasydesventajasdelosbioensayosconrespectoalosensayosconorganismos
superiores.

19

FarmacologaI.GuindePrcticas.

VI.BIBLIOGRAFA

Infante S y Caldern L. (1994). Manual de anlisis probit. Colegio de Posgraduados.


Mxico.
McLaughlin J. (1991). Crow gall tumors on potato disc and Brine Shrimp lethality; two
simple bioassay for higher plant screening and fractionation. Methods in Plant
Biochemistry.Volume6.Assayforbioactivity.AcademicPressLimited,EUA:130.
TallaridaR.(2000).DrugSynergismandDoseeffectDataAnalysis.Chapman&Hall/CRC.
NewYork.

20

FarmacologaI.GuindePrcticas.

4. Determinacin de parmetros farmacocinticos en un


modelodevidrio.

Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacocintica, clculo de parmetros
farmacocinticos

I.INTRODUCCIN

Lafarmacocinticaeslaramadelafarmacologaqueestudiaelcursotemporaldelosfrmacos
atravsdelorganismo.Comprendelosprocesosdeabsorcin,distribucinyeliminacindelos
frmacos.Laeliminacinalavezcomprendelosprocesosdeexcrecinybiotransformacin.

La curva de concentracin en funcin del tiempo se utiliza para determinar los parmetros
farmacocinticos.Laformadelacurvaconcentracintiempoylosparmetrosquesecalculana
partirdeella,dependedelavadeadministracinydelfluidobiolgicoenelqueselleveacabo
el muestreo y anlisis del frmaco. Despus de una administracin intravenosa es posible
determinar los parmetros farmacocinticos: constante de eliminacin (k), volumen aparente
dedistribucin(Vd),concentracinplasmticaaltiempocero(Cp),depuracintotal(ClT),rea
bajolacurva(ABC)yeltiempodevidamedia(t).Paracuandoelfrmacoseadministraporuna
va que requiere de un proceso de absorcin, es decir, el paso del sitio de aplicacin a la
circulacingeneral,sepuedencalcularlosparmetrosfarmacocinticos:constantedeabsorcin
(Ka), concentracin plasmtica mxima (Cpmax), (tiempo al que se alcanza la concentracin
plasmticamxima(tmax),ademsdek,tyABC.

Enestaprctica,medianteelusodeunmodelodevidrioesposiblehacerunasimulacindela
administracin de frmaco por va intravenosa o por una va que requiere de un proceso de
absorcin. Tambin es posible simular la toma de muestras en sangre y en orina y con ello
realizarlosclculosdelosparmetrosfarmacocinticoscorrespondientesadichassimulaciones.

21

FarmacologaI.GuindePrcticas.

II.OBJETIVOS

Losobjetivosdeestaprcticason:

1. Utilizar un modelo de vidrio para simular la administracin intravascular y una va


extravascular.
2. Calcular los parmetros farmacocinticos para la administracin intravascular y
extravascular.
3. Que el alumno comprenda la influencia de la va de administracin sobre el
comportamientocinticodelfrmaco

III.MATERIAL

a) Materiales,cristalerayequipo
Dosvasosdeprecipitadode500mLconbrazorecto
Pipetagraduadade5mL
Perilla
Dosvasosdeprecipitadode500mL
Unvasodeprecipitadode100mL
6matrazvolumtricode10mL
Unmatrazvolumtricode25mL
Unapipetavolumtricade1mL
Dosplacasdeagitacin
Dossoportesuniversal
Dospinzasconnuez
Unembudodeseparacinde1L
Unanilloparasoporteuniversal
DosmatracesErlenmeyerde250mL

22

FarmacologaI.GuindePrcticas.

Uncronometro
24Tubosdeensayo
4litrosdeaguacorriente
Dosbarrasmagnticasdeagitacin
2agitadoresmagnticos
Balanzaanaltica
Espectrofotmetro

b) Reactivos

DisolucindeRojoCongo(4mg/mL)
Disolver100mgdelcoloranteRojoCongoen15mLdeaguayaforaraunvolumende25
mLconaguadestilada.

IV.PROCEDIMIENTO

1. Vaintravascular

a) Colocarelmaterialdeacuerdoalsiguienteesquema:

A
C

23

FarmacologaI.GuindePrcticas.

b) Colocar agua corriente en el embudo de separacin, mantener el mismo volumen


durantetodoelexperimento.
c) MantenerlaagitacinconstanteenelvasodeprecipitadoA.
d) Medirlavelocidaddeflujodelgoteoyllevarlaaunflujoconstantede20mL/min.
e) AdicionaraguacorrientealvasodeprecipitadoA,llevndoloaunvolumenmuycercano
paraqueseinicieelgoteo.
f) Adicionar5mLdeladisolucindelcolorantealvasodeprecipitadoA.Elmomentoen
queiniciaelgoteodelvasosetomacomoreferenciaparalatomademuestras.
g) Cuandoiniciaelgoteo,inmediatamentesetomaunamuestrade2mLdelvasoA.
h) Sedejacorrerelexperimentoysetomanmuestrasde2mLdelvasoAdeacuerdoalos
tiemposindicadosenelsiguientecuadro.

TIEMPO
(min)

VAINTRAVASCULAR
VASOA
ABSORBANCIA

CONCENTRACIN
(mg/mL)

CONTROL
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
60
75
90
120

24

FarmacologaI.GuindePrcticas.

2. Vaextravascular

a)

Colocarelmaterialdeacuerdoalsiguienteesquema:

A
B

b) Colocar agua corriente en el embudo de separacin, mantener el mismo volumen


duranteelexperimento.
c) Mantenerlaagitacinconstanteenlosvasosdeprecipitado.
d) Medirlavelocidaddeflujodelgoteoyllevarlaaunflujoconstantede20mL/min.
e) Adicionar agua corriente a los vasos de precipitado, llevndolos a un volumen muy
cercanoparaqueinicieelgoteo.
f) Adicionar5mLdelasolucindelcolorantealvasodeprecipitadoA.Lahoraenqueinicia
elgoteodelvasoAalBsetomacomoreferenciaparalatomademuestras.
g) Cuandoiniciaelgoteosetomaunamuestrade2mLdelvasoAydelB.
h) Sedejacorrerelexperimentoysetomanmuestrasde2mLdelvasoAyBdeacuerdoal
cuadrosiguiente.

25

FarmacologaI.GuindePrcticas.
VAEXTRAVASCULAR
VASOA

TIEMPO
(min)

ABSORBANCIA

VASOB

CONCENTRACIN
ABSORBANCIA
(mg/mL)

CONCENTRACIN
(mg/mL)

CONTROL
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
60
75
90
120

3.

Determinacindelasconcentracionesdelcolorante

a) Realizar una curva estndar del pesando 1 mg del colorante, disolverlo en agua
destilada,aforara10mLycontinuarconseindicaenelesquemasiguiente:

5 mL

5 mL

5mL

5mL

5 mL

50g/mL

Disol.Stock
100g/mL

25g/mL

12.5g/mL

6.25g/mL

3.125g/mL

Cadamatrazdebe aforarsea10mL

26

FarmacologaI.GuindePrcticas.

b) Leer las absorbancias de la curva estndar y de las muestras obtenidas en los


experimentosenelespectrofotmetroaunalongituddeondade490nm.

CURVAESTNDARDEROJOCONGO
TUBO

CONCENTRACIN
(g/mL)

BLANCO

3.125

6.25

12.5

25

50

100

ABSORBANCIA

c) Determinarlaconcentracindelasmuestrasinterpolandoelvalordelaslecturasenla
curvaestndar.

V.ANLISISDERESULTADOS

1. Elaborarunagrficaporcadavadeadministracin,considerandoellogaritmonatural
delaconcentracin[g/mL]contratiempo[min].
2. Calcularlosparmetrosfarmacocinticost,Vd,k,ka,ClT,Cmax,tmax,ABCyF;segnlava
deadministracinsimulada.
3. Analizar la importancia de los modelos farmacocinticos in vitro y de los parmetros
farmacocinticoscalculados

27

FarmacologaI.GuindePrcticas.

VI.BIBLIOGRAFA

GumtowR,ProudfootJyTaladaA(1989).Aninvitropharmacokineticsystemforusein
the undergraduate pharmaceutics laboratory: a one and twocompartment
pharmacokinetic Bench Model; the glassman patient. Revista Mexicana de Ciencias
Farmacuticas,20(3):2530.
RowlandMyTozerT(1995).Clinicalpharmacokinetics3rd.Ed.LeaandFebiger.EUA.
ShargelL,WuPongSyYuA(2004).AppliedbiopharmaceuticsandPharmacokinetics.5th
Edition.McGrawHillMedical,EUA.

28

FarmacologaI.GuindePrcticas.

5. Determinacin experimental de la dosis efectiva 50 (DE50)


sedanteenratones.

Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
Tema relacionado con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacometra y Farmacodinamia, tipo de accin
farmacolgica

I.INTRODUCCIN

La farmacodinamia es la rama de la farmacologa que estudia el mecanismo de accin de los


frmacos.Losfrmacospuedenejercersuaccinporlaaccinsobreunreceptor,alterandoel
efectodeunagonistaendgeno,mediantelainhibicindeprocesosdetransporte,modificando
la actividad enzimtica o por otros mecanismos. Entre los receptores que tiene una
participacin muy importante en la depresin del SNC se encuentra el receptor GABA, los
receptoresaserotonina,losreceptoresadopamina,losreceptorescolinrgicos,losreceptores
ahistamina,entreotros.

Enestaprcticaseutilizarunmodelosencillobasadoenelcomportamientodelosroedoresde
explorar un ambiente extrao. El nmero de levantamientos sobre sus extremidades traseras
estrelacionadoconunestadodealerta.Ladisminucindelnmerodelevantamientosporel
efecto de un frmaco est relacionado con un efecto tranquilizante y en varios trabajos de
investigacin se ha utilizado para medir el efecto sedante de frmacos depresores del SNC
(Olivaetal.,2004;Ugaldeetal.,2005;GonzlezTrujanoetal.,2006).

EnestaprcticasecontempladeterminarlaDE50sedantedepentobarbitalsdicoydeletanol
utilizandoelmodelodeCilindrodeExploracinenratones.

29

FarmacologaI.GuindePrcticas.

II.OBJETIVO

Losobjetivosdeestaprcticason:

1. DeterminarlaDE50paraelefectosedantedelpentobarbitalyetanolenratnutilizando
elmodelodelCilindrodeExploracin.
2. Aplicarlametodologaparaelclculodedosis,administracindefrmacos,observacin
ymanejodedatosdeunexperimentofarmacolgicoenroedores.

III.MATERIAL

a) Materialbiolgico

RatonesICRCD1machosde2530gdepeso

b) Materiales,cristalerayequipo
Cilindro de exploracin(cilindro devidrio de 11 cm de dimetro interno por 30 cm de
altura).
Jeringasde1mLconagujadelnmero27
Balanzaparapesaranimales
Marcadordetintaindeleble
Papel
Cronmetro
Contadormanual
Matrazvolumtricode10mL
6frascosvialesde10mL

c) Frmacosyreactivos
Anestesal(pentobarbitalsdico6.3g/100mL,usoveterinario).Pfizer.

30

FarmacologaI.GuindePrcticas.

DisolucindePentobarbitalsdico3mg/mL.
Transfiera0.47mLdeAnestesalaunmatrazvolumtricode10mLyllveloalaforocon
disolucinsalina.

Etanolabsoluto.

Disolucinsalinafisiolgica(0.9%).

IV.PROCEDIMIENTO

A. EFECTOSEDANTEDEPENTOBARBITAL

a) Pesadoymarcajedeanimales
Cada grupo de trabajo recibir 6 ratones. Marque a sus animales con el marcador de
tintaindelebleenlabasedelacola,pselosyregistreelpesodecadaanimal.

b) Preparacindelasdisolucionesdepentobarbitalsdico
Rotule6frascosvialesconlassiguientesleyendas0,2.5,5,10,15y30mg/kg.Agreguela
cantidadindicadaenelcuadrosiguientedeladisolucindepentobarbitalde3mg/mLy
dedisolucinsalinaal0.9%(p/v):

VOLUMENESAAGREGAR(mL)

FRASCOVIAL

DOSIS
(mg/kg)

CONTROL

2.5

0.25

2.75

0.25

0.5

0.5

0.5

10

15

1.5

1.5

1.5

30

PENTOBARBITAL
(mg/kg)

DISOLUCION
SALINA

CONCENTRACIN
(mg/mL)

c) Administracindelfrmaco
Asigne aleatoriamente las dosis que recibir cada ratn. Administre por va
intraperitoneal 0.1 mL de la disolucin correspondiente del frmaco o de la disolucin
salinaporcada10gdepesodelanimalyregistreeltiempoalqueloadministr.
31

FarmacologaI.GuindePrcticas.

d) Desarrollodelexperimento

11 cm d.i.

30 cm

Cilindroutilizadoenlapruebadeexploracin.

1) Cerciresedequeelcilindrodevidrioestsecoylimpio.
2) Coloqueelcilindrosobreuntrozodepapelmayoraldimetrodelcilindro(puedenser
hojasrecicladas).
3) 30minutosdespusdehaberadministradoelfrmacoolasolucinsalinaintroduzca
alanimalenelcilindrodeexploracin.
4) Pongaafuncionarelcronmetroyregistreelnmerodelevantamientosquerealiza
el animal en un perodo de 5 minutos. Slo una persona deber cuantificar esta
conductaparaqueseananalizadosbajoelmismocriterio.
5) Limpiehmedoconsolucinhidroalcohlicaelinteriordelcilindroycambieelpapel.
6) Contineconelmismoprocedimientoparalos5animalesrestantes.Noolvidelimpiar
elcilindroentrecadaprueba.
7) Elanimalquerecibilasolucinsalinasetomacomocontrol.
Tiempo(h:min)
Ratn

Peso(g)

Dosis(mg/kg)

Admn.

Inicio

Final

30

35

36

41

12

42

47

18

48

53

24

54

59

30

01:00

01:05

32

Nm.de
levantamientos

FarmacologaI.GuindePrcticas.

B. EFECTOSEDANTEDEETANOL

a) Preparacindelassolucionesdeetanolabsoluto
Rotule 6 matraces aforados de 10 mL con las siguientes leyendas 0, 500, 1000, 2000,
2500 y 3000 mg/kg. Agregue la cantidad indicada en el cuadro siguiente de etanol
absolutoyaforeconsolucinsalinaal0.9%(p/v):

VOLUMENESAAGREGAR(mL)

FRASCOVIAL

DOSIS
(mg/kg)

ETANOLABSOLUTO

DISOLUCION
SALINA

CONCENTRACIN
(mg/mL)

CONTROL

10

500

0.63

9.37

50

1000

1.26

8.74

100

2000

2.52

7.48

200

2500

3.16

6.84

250

3000

3.8

6.2

300

b) Administracindelfrmaco
Asigne aleatoriamente las dosis que recibir cada animal. Administre por va
intraperitoneal0.1mLdelasolucincorrespondientedelfrmacoodelasolucinsalina
porcada10gdepesoyregistreeltiempoalqueloadministr.

c) Desarrollodelexperimento
1) Cerciresedequeelcilindrodevidrioestsecoylimpio.
2) Coloqueelcilindrosobreuntrozodepapelmayoraldimetrodelcilindro(puedenser
hojasrecicladas).
3) 5minutosdespusdehaberadministradoelfrmacoolasolucinsalinaintroduzcaal
ratnenelcilindrodeexploracin.
4) Registre el nmero de levantamientos que realiza el animal en un perodo de 5
minutos.Slounapersonadebercuantificarestaconductaparaqueseananalizados
bajoelmismocriterio.
5) Limpiehmedoconsolucinhidroalcohlicaelinteriordelcilindroycambieelpapel.

33

FarmacologaI.GuindePrcticas.

6) Contineconelmismoprocedimientoparalos5ratonesrestantes.Noolvidelimpiar
elcilindroentrecadaprueba.
7) Elanimalquerecibiladisolucinsalinasetomacomocontrol.

Tiempo(h:min)
Ratn

Peso(g)

Dosis(mg/kg)

Admn.

Inicio

Final

10

11

16

12

17

22

18

23

28

24

29

34

30

35

40

Nm.de
levantamientos

V.ANLISISDERESULTADOS

a) ClculodelaDE50
1) Calcule el porcentaje de efecto por cada dosis, considerando que el nmero de
levantamientospromediodelosratonescontrolesigualal0%deefecto.
2) Determineelmodeloquesiguenlosdatosobtenidos.
3) CalculelaDE50paraelefectosedantedeacuerdoalmodelodeterminado.

b) Clculodelapotenciarelativa
1) Calcule la potencia relativa del efecto sedante entre etanol y pentobarbital. Con la
relacin:

34

FarmacologaI.GuindePrcticas.

VII.BIBLIOGRAFA

GonzlezTrujano M, Martnez A, Reyes A, Reyes B y Navarrete A. (2006). Palmitote


isolatedfromAnnonadiversifoliainducesananxiolyticlikeeffectinmice.PlantaMedica.
72(8):703707
Oliva I, GonzlezTrujano M, Arrieta J, EncisoRodrguez R y Navarrete A. (2004).
Neuropharmacological profile of hydroalcoholic extract of Valerina edulis ssp. procera
rootsinmice.PhytotherapyResearch.18(4):290296.
TallaridaR.(2000).DrugSynergismandDoseeffectDataAnalysis.Chapman&Hall/CRC.
NewYork.
Ugalde M, Reza V, GonzlezTrujano M, Avula B, Khan I y Navarrete A. (2005).
Isobolographic analysis of the sedative interaction between six central nervous system
depressant drugs and Valeriana edulis hydroalcoholic extract in mice. Journal of
PharmacyandPharmacology.57:631639.

35

FarmacologaI.GuindePrcticas.

6. Influencia de la va de administracin sobre la respuesta


farmacolgica.

Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacocintica, vas de administracin de
frmacos.

I.INTRODUCCIN

La respuesta farmacolgica se puede ver modificada en funcin de la va por la cual se


administrael frmaco.La modificacin puedeconsistir enun simple retraso en la acciny en
otroscasospuedecambiaroanulartotalmenteelefectodelfrmaco.Algunosfrmacospueden
sufrir transformaciones en el sitio de aplicacin, dando origen a nuevas molculas que no
necesariamente van a presentar el mismo efecto farmacolgico o van a seguir la misma
farmacocintica. En otros casos, debido a las propiedades fisicoqumicas del frmaco, no es
posible administrarlo por una va determinada, por ejemplo un frmaco no soluble en
soluciones acuosas no es posible administrarlo por va intravenosa. Los frmacos irritantes
tambin limitan su aplicacin por alguna va determinada, as que la eleccin de la va de
administracin ms adecuada para un frmaco es importante para lograr que se consiga el
efectodeseadoaunavelocidadyaunaintensidadadecuada.

Enestaprcticaseevaluarlaformaenlacuallavadeadministracinmodificalarespuestade
unfrmacobiencaracterizadocomoeselpentobarbital,paraelcualsemedirnelperodode
latenciayladuracindelefectocuandoseadministrapordistintasvas.

36

FarmacologaI.GuindePrcticas.

II.OBJETIVOS

Losobjetivosdeestaprcticason:

1. Determinar la influencia de la va de administracin en la accin farmacolgica del


pentobarbital.
2. Comprender el significado del perodo de latencia de la accin farmacolgica del
pentobarbital.

III.MATERIAL

a) Materialbiolgico
4ratasWistarmachosde200250gdepeso

b) Materiales,cristalerayequipo
Jeringasde1y3mL
Cnulaparaadministracinesofgica
Balanzaparapesaranimales
Cronmetro

c) Frmacosyreactivos
Anestesal(pentobarbitalsdico6.3g/100mL,usoveterinario).Pfizer.
DisolucindePentobarbitalsdico40mg/mL.
Transfiera6.35mLdeAnestesalaunmatrazvolumtricode10mLyllveloalaforocon
disolucinsalina.

Disolucinsalinafisiolgica(0.9%).

37

FarmacologaI.GuindePrcticas.

IV.PROCEDIMIENTO

1) Pesadoymarcajedeanimales
Cadagrupodetrabajorecibir4ratas.Marqueasusanimalesconelmarcadordetinta
indeleble,pselosyregistreelpesodecadaanimal.

2) Desarrollodelexperimento
a) Asignealeatoriamenteeltratamientoquerecibircadaanimal:vaoral,intraperitoneal,
subcutneaointramuscularyanteloenelcuadrodeabajo.Administre0.1mLporcada
100gdepesodelasolucindelfrmacoporlavadeadministracinquelecorresponde
acadaanimalyregistreeltiempoalqueloadministrenelcuadrodeabajo.
b) Registre el tiempo en el cual el animal pierde el reflejo de enderezamiento, que se
caracteriza por el hecho que al ponerlo sobre su dorso no presenta resistencia para
intentarvolverasuposicinnatural.
c) La duracin del efecto corresponde al lapso de tiempo entre la prdida del reflejo de
enderezamientoyeltiempoenelcualelanimalvuelveasuposicinnatural.
d) Cubra al animal con un lienzo de franela para reducir la hipotermia producida por el
frmaco.
e) Registresusdatosenelcuadrosiguiente.

RATA
NM.

PESO(g)

VADE
ADMINISTRACIN

VOLUMENA
ADMINISTRAR
(mL)

TIEMPODE
ADMINISTRACIN
INICIO(min)
(min)

EFECTO
TRMINO
(min)

DURACIN
(min)

1
2
3
4

38

FarmacologaI.GuindePrcticas.

V.ANLISISDERESULTADOS

a) Construyaunagrficaparaelperododelatenciayotroparaladuracindelefectoen
funcindelavadeadministracin.
b) Realiceelanlisisestadsticocorrespondienteparaindicarsihayonoinfluenciadelava
deadministracinenelefectodelpentobarbital.

VI.BIBLIOGRAFA

Rowland M y Tozer T. (1995). Clinical pharmacokinetics. 3rd Edition. Lea and Febiger,
EUA.
ShargelL,WuPongSyYuA.(2004).AppliedbiopharmaceuticsandPharmacokinetics.5th
Edition.McGrawHillMedical,EUA.

39

FarmacologaI.GuindePrcticas.

7.Excrecinrenaldecidoacetilsaliclicoenvoluntarios.

Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
TemarelacionadoconelcursodeteoradeFarmacologaI:Farmacocintica,excrecindefrmacos

I.INTRODUCCIN

La eliminacin de frmacos comprende dos procesos la excrecin y la biotransformacin. La


excrecinrenaleslaprincipalvadeeliminacinparaunagrancantidaddefrmacos.Cuando
existeunadisminucinenlaeliminacindefrmacosporestavapuedetenercomplicaciones
importantes,yaquesedebemodificarelesquemadedosificacinyladosisdelfrmaco.

En esta prctica se determinar la eliminacin de un frmaco muy comn el cido


acetilsaliclico,cuantificandoenlaorinalacantidaddesalicilatostotalesexcretadosdespusde
laadministracindedostabletasde500mgdeestefrmacoenvoluntariossanos.

II.OBJETIVOS

Losobjetivosdeestaprcticason:

1. Comprenderlaimportanciadelaexcrecinrenalcomounodelosprocesosprincipales
delaeliminacindefrmacos.
2. Determinarlaeliminacinporexcrecindelcidoacetilsaliclicoenvoluntariossanos,as
comolosfactoresqueinfluyenenlamisma.

40

FarmacologaI.GuindePrcticas.

III.MATERIAL

a) Sujetosdeestudio
Criteriosdeinclusin:Voluntariosadultosjvenessanos,de18a20aosdeedad,de5565
kgdepeso,preferentementedelgneromasculino.
Criteriosdeexclusin:Noentrarnenelgrupopersonasconproblemasgastrointestinales
(lcera gastroduodenal, gastritis), historia de alergias, problemas en su funcin renal o
intoleranciaasalicilatos,mujeresconproblemasdehemorragiasmenstruales,nisujetos
quehayantomadosalicilatosenlasltimas24horas.Cualquieradeestascontingencias
debeserinformadaalprofesor.

b) Materiales,cristalerayequipo

UnmatrazErlenmeyerde100mL

5matracesErlenmeyerde50mL

Unagradilla

10tubosdeensayode10mL

Unapipetagraduadade5mL

Unapipetagraduadade1mL

Unapipetagraduadade10mL

Unaprobetade500mL

Dosvasosdeprecipitadode50mL

Dosvasosdeprecipitadode250mL

Unvasodeprecipitadode500mL

Unmatrazvolumtricode25mL

Seismatracesvolumtricosde10mL

Placadecalentamiento

Cronmetro

Espectrofotmetro

Potencimetro

41

FarmacologaI.GuindePrcticas.

d) Frmacosyreactivos

Aguapotable

Tabletasdecidoacetilsaliclicode500mg

Salicilatodesodio

ReactivodeTrinderparasalicilatos
Sedisuelven10gdecloruromercricoen200mLdeaguadestiladacaliente.Cuandola
disolucin es completa, se enfra y se aaden 30 mL de cido clorhdrico 1 N.
Posteriormentesedisuelven10gdenitratofrricoenladisolucinyseaforaa250mL
conaguadestilada.

Amoniacoacuoso(hidrxidodeamonio)

Disolucindecidoclorhdrico0.1N

IV.PROCEDIMIENTO

a) Preparacinytomademuestras
Rotular 5 matraces Erlenmeyer (donde se colocarn la muestras de orina) y 5 tubos de
ensayoconlostiempos0,40,60,80y100minutos.Anotarenelcuadroadjuntolahoraen
lacualserealizarncadaunadelastareas.

Obtencindelamuestrasserealizardeacuerdoconelcuadrosiguiente.

42

FarmacologaI.GuindePrcticas.

Tiempo
(min)

Hora

Desecharlaprimeraorina.
Tomar750mLdeaguapotable.

Colectarlaorina(mnimo100mL).Estaserlaorinabasal.
Medirsuvolumenyanotarlo.
Tomar dos tabletas de cido acetilsaliclico de 500 mg en un
volumendeaguaigualalorinado.

a) Poner 30 mL de esta muestra en un vaso de precipitados.


AjustarelpHa70.5conAmoniacoacuosoy/oHClal0.1N.
b) De esta muestra pasar 0.5 mL al tubo de ensayo
correspondientealoscerominutos.

Colectarlaorina,medirsuvolumenyanotarlo.

Repetir procedimiento anterior (incisos a y b) utilizando el tubo


etiquetadocon40minutos.

Colectarlaorina,medirsuvolumenyanotarlo.

Repetir procedimiento anterior (incisos a y b) utilizando el tubo


rotuladocon60minutos.

Colectarlaorina,medirsuvolumenyanotarlo.

Repetir procedimiento anterior (incisos a y b) utilizando el tubo


rotuladocon80minutos.

Colectarlaorina,medirsuvolumenyanotarlo.

Repetir procedimiento anterior (incisos a y b) utilizando el tubo


rotulado100minutos.

40

60

80

100

Actividadarealizar

43

FarmacologaI.GuindePrcticas.

b) Anlisisdesalicilatoenorina
Paracadamuestradeorinasecuantificalacantidaddesalicilatosexcretadosdeacuerdoal
siguienteprocedimiento.

1) Calentaraebullicinlostubosdeensayoconlasmuestrasdurante10minutos.
2) Enfriarlostubosconaguafra
3) Aadiraltubo2.5mLdereactivoparasalicilatos.Lareaccindauncolorcuantificable
porespectrofotometraa525nm.
4) Realizar una curva estndar pesando 10 mg de salicilato de sodio, disolverlo en agua
destilada, aforar a 10 mL y continuar con se indica en el cuadro siguiente siguiente,
utilizandomatracesvolumtricosde10mL:

VOLUMEN(mL)DEDISOLUCIN
TUBONM. STOCKDESALICILATODESODIO
(1mg/mL)

CONCENTRACIN
(g/mL)

0.25

25

0.5

50

100

200

300

ABSORBANCIA

5) Lamuestraatiempoceroserutilizadacomoblanco.
6) Interpolarlosvaloresdeabsorbanciadelasmuestrasenlacurvaestndarparaobtener
laconcentracindesalicilatosenlamuestra.
7) Losresultadosobtenidosseanotarnenelsiguientecuadro.

44

FarmacologaI.GuindePrcticas.

MUESTRA

TIEMPO(min)

BLANCO

40

60

80

100

pH

VOLUMEN(mL)

ABSORBANCIA

CONCENTRACIN
(g/mL)

CANTIDADEXCRETADA
DESALICILATOS(g)

CANTIDADEXCRETADA
ACUMULADADE
SALICILATOS(g)

V.ANLISISDERESULTADOS

1) Construyaunagrficadecantidadexcretadaacumuladadesalicilatoscontraeltiempoy
calculelaconstantedeexcrecin.
2) Calculeelporcentajedefrmacoexcretadopororinaen100minutosycomprelaconla
deotrosvoluntarios.

VI.BIBLIOGRAFA

Rowland M y Tozer T. (1995). Clinical pharmacokinetics. 3rd Edition. Lea and Febiger.
EUA.
Shargel L, WuPong S, y Yu A. (2004). Applied biopharmaceutics and pharmacokinetics.
5thEdition.McGrawHillMedical,EUA.

45

FarmacologaI.GuindePrcticas.

8. Demostracin del efecto sinergista y antagonista en un


sistemasimulado.

Nmerodesesionessugeridas:1sesin(ejecucinyanlisis)
Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacodinamia, agonistas y antagonistas;
Farmacometra,relacindosisrespuestagradual.

I.INTRODUCCIN

Lasleccionesprcticassonunaparteimportantedelaenseanzadelafarmacologaendiversas
reas como la medicina, enfermera y farmacia. Los experimentos in vivo e in vitro han sido
ampliamente utilizados en las lecciones prcticas para ayudar a los estudiantes a adquirir
habilidadesenlosexperimentosfarmacolgicos,reforzandosuconocimientoaprendidoconlas
clasestericasylibros.

Aunque los experimentos tradicionales en animales vivos son invaluables, tienen desventajas:
alto consumo de tiempo, dinero y sacrificio de animales; slo pueden probarse un nmero
limitado de frmacos en un periodo de tiempo y requieren frecuentemente de un trabajo
constanteeintenso.

Una variedad de software ha sido desarrollado para la enseanza de la farmacologa en


pregradoyposgrado.Evidenciapreviahamostradoqueestatcnicainnovadoradeenseanza
juntoconlosmtodosdeenseanzatradicionales,facilitaalestudianteelaprendizajeymejora
sudesempeoenfarmacologa

En esta sesin se utilizar un sistema de simulacin para construir curvas concentracin


respuestadeagonistas,talycomoserealizaranenunmodeloderganootejidoaislado.

46

FarmacologaI.GuindePrcticas.

II.OBJETIVO

Losobjetivosdeestaprcticason:

1. Demostrar el efecto concentracin dependiente de la Histamina y Carbacol en un


sistemasimulado.
2. Determinar el tipo de interaccin farmacolgica de la Atropina, Mepiramina y
TubocurarinasobrelaactividaddelaHistaminayCarbacolenunsistemasimulado.

III.MATERIAL

a) Software

Se utilizar el software Organ Bath Simulation 2006 ver. 1.2 desarrollado por la
UniversidaddeStrathclyde,Escocia.
Elsoftwarepuedeserdescargadodelsiguientevnculo:

http://spider.science.strath.ac.uk/sipbs/media/2/OBSim%20V1.2%20Setup.exe

El softwaredeber ser instalado en una PC o compatible con Microsoft Windows 98


posterior.

IV.PROCEDIMIENTO

A)ManejodelsoftwareOrganBathSimulation2006ver.1.2

Para el uso adecuado del software se dividir su manejo por procedimiento con
referenciaalesquemasiguiente:

47

FarmacologaI.GuindePrcticas.
Botnparaempezarun
nuevoexperimento

readeregistrodelos
datos

Cursordemedicindela
fuerzadecontraccin

Seleccindel
tejidoautilizar
Seleccindel
agonistaautilizar
Seleccindelaconcentracin
delagonista
Seleccindelvolumena
administrardeagonista
Seleccindel
antagonistaautilizar
Seleccindelaconcentracin
delantagonista
Seleccindelvolumena
administrardeantagonista
Seleccindelsitiodondese
administrarelantagonista
Botndelavadodel
tejido/cmara

Botnparainiciarel
experimento

Botnparafinalizarel
experimento

1. Iniciodelprogramaycomienzodeunnuevoexperimento.
Parainiciarelprogramasedebeoprimirelsiguienteicono:

Paracomenzarunnuevoexperimento:
a) Seleccione en Tissue type, el tejido Guinea Pig Ileum. Este tejido es el que ser
colocadodentrodelacmaraderganoaislado.
b) OprimaelbotnNewExperiment.
c) OprimeelbotnRecord,paracomenzarlalecturadentrodelreaderegistro.
d) Seleccioneyapliquefrmacosdelalistadeagonistasoantagonistascomoseindicaa
continuacin

48

FarmacologaI.GuindePrcticas.

2. Adicindeagonistasalacmaraderganoaislado.
a) EnelapartadoAgonist,seleccioneelagonistaqueseutilizar.
b) Seleccionelaconcentracinmolarqueseutilizar.
c) Introduzcaenelvolumenautilizar:0.10mL
d) OprimaelbotnAddtoOrganBath,paraagregarelagonistaalacmara.Registre
por 12 segundos (un cuadro en la lnea de tiempo) que equivale a 3 minutos en la
simulacin.
e) Para curvas acumulativas, agregue la siguiente concentracin de agonista. Para
curvasporlotesonoacumulativas,oprimaelbotn,FlushReservoir toBath,para
lavareltejidocondisolucinKrebs.

3. Adicindeantagonistasalacmaraderganoaislado.
a) EnelapartadoAntagonist,seleccioneelantagonistaqueseutilizar.
b) Seleccionelaconcentracinmolarqueseutilizar.
c) Introduzcaenelvolumenautilizar:0.10mL
d) En la lista desplegableque se encuentra a la derecha delbotn Add to, seleccione
OrganBath,yoprimaelbotnAddtoparaagregarelantagonistaalacmara.

4. Medicindelarespuestadeltejido.
Paramedirlaamplituddelospicosdelascontraccionesdeltejido:
a) OprimaelbotnStop,paraterminarelexperimento.
b) Usando la barra de desplazamiento horizontal del rea de registro, seleccione la
seccinquecontienelascontraccionesdeltejidoquesernmedidas.
c) Arrastreelcursordemedicinalpuntodelagrficaderegistroquesermedido.La
fuerzadecontraccin(engramos)sermostradadebajodelcursor.
d) Sesugieretomaralmenos5lecturascercanasdentrodelamesetaoreademedida
yobtenerelpromediodelaslecturasparaunmejorresultado.

49

FarmacologaI.GuindePrcticas.

B)Experimentosarealizarenelsoftwaredesimulacin.

Experimento1.

Curvasconcentracinrespuestadeagonistas.

a) Seleccionecomotejidoalleondecobayoeinicieunnuevoexperimento.
b) SeleccioneaHistamina(Histamine)comoelagonistaautilizaraunaconcentracinde
1x108Myunvolumende0.10mL.
c) OprimaelbotnRecordparainiciarelexperimento.
d) Sedejaestabilizarlamuestrapor3minutos(12segundosrealesouncuadrodelreade
registro)yseoprimeelbotnAddtoOrganBath.
e) Cuando la contraccin del msculo se estabilice (se registre una meseta) o hayan
transcurrido 3 minutos de la simulacin (si es que no hay contraccin), se agrega la
concentracinde1x107Myassucesivamentehastaagregarlaconcentracinde1x100
M.
f) Alterminarlacurva,seoprimeelbotnStop,seguardaelregistro.Ysecalculalafuerza
decontraccinporcadaconcentracinagregada.
g) Serealizaelmismoexperimento,ahoraconCarbacol(Carbachol).

Experimento2.

Efecto de un antagonista en la curva concentracin respuesta de


agonistas.

a) Seleccionecomotejidoalleondecobayoeinicieunnuevoexperimento.
b) SeleccioneaHistaminacomoelagonistaautilizaraunaconcentracinde1x108Myun
volumende0.10mL.
c) Seleccione a Mepiramina (Mepyramine) como el antagonista a utilizar a una
concentracinde1x106Myunvolumende0.10mL.
d) OprimaelbotnRecordparainiciarelexperimento.

50

FarmacologaI.GuindePrcticas.

e) Sedejaestabilizarlamuestrapor3minutos(12segundosrealesouncuadrodelreade
registro) y se agrega el antagonista a Organ Bath oprimiendo el botn Add to del
apartadoAntagonist.Sedejaincubarpor3minutosdesimulacin.
f) Despusdeterminadalaincubacin.Seconstruyelacurvaconcentracinrespuestade
laHistaminacomosedescribeenelexperimento1.
g) Se realiza el mismo experimento, ahora con Carbacol como agonista y Atropina
(Atropine)comoantagonista.
h) Adicionalmente realice el mismo experimento utilizando dos concentraciones ms del
antagonista con el objeto de tener el efecto del antagonista a tres diferentes
concentraciones,enlaaccindelagonista.

Nota: Se puede experimentar con combinaciones de agonistas y antagonistas con los que
cuentaelsoftwareparademostrarlaselectividaddeestosltimos.

Experimento3.

Efectorelajantedeantagonistas.

a) Seleccionecomotejidoalleondecobayoeinicieunnuevoexperimento.
b) SeleccioneaHistaminacomoelagonistaautilizaraunaconcentracinde1x101Myun
volumende0.10mL.
c) OprimaelbotnRecordparainiciarelexperimento.
d) Sedejaestabilizarlamuestrapor3minutos(12segundosrealesouncuadrodelreade
registro)yseoprimeelbotnAddtoOrganBath.
e) Cuando la contraccin del msculo se estabilice (se registre una meseta) o hayan
transcurrido3minutosdelasimulacin(siesquenohaycontraccin),seconstruyeuna
curva concentracin respuesta con concentraciones crecientes de Mepiramina (de
1x108Ma1x100M).Tomeencuentaqueahoralafuerzadecontraccindisminuiren
lugardeaumentar.

51

FarmacologaI.GuindePrcticas.

f) Alterminarlacurva,seoprimeelbotnStop,seguardaelregistro.Ysecalculalafuerza
decontraccinporcadaconcentracinagregada.
g) Serealizaelmismoexperimento,ahoraconCarbacolaunaconcentracinde1x103My
comoantagonistaAtropina.

Nota importante: Al igual que en los experimentos in vitro, la concentracin real en la


cmaraderganoaisladoes100menordebidoaladilucin1:100queserealizaalagregar
0.01mLdemuestraen10mLdedisolucinquecontienelacmara.

V.ANLISISDERESULTADOS

1. Conlosdatosobtenidosdelexperimento1:
a) ConstruirlascurvasconcentracinrespuestadeHistaminaydeCarbacol.
b) Determinarelmodeloalqueseajustanlosdatos.
c) CalcularlaCE50paralaHistaminayelCarbacoldeacuerdoconmodelodeterminadoen
elincisoanterior.

2. Conlosdatosdelexperimento2.
a) ConstruirlascurvasconcentracinrespuestadeHistaminaydeCarbacolconcadauno
delosantagonistasutilizados.
b) CalcularlaCE50paralascombinacionesdeHistaminaydeCarbacolconlosantagonistas
utilizadosdeacuerdoconmodelodeterminadoenexperimentoanterior.
c) Calcular cuntas veces se disminuy el efecto del Carbacol y de la Histamina por la
presenciadesusantagonistas.
d) Con las tres curvas concentracinrespuesta de los antagonistas a diferente
concentracin,calculelapotenciaopA2delantagonista.

52

FarmacologaI.GuindePrcticas.

3. Conlosdatosdelexperimento3.
a) ConstruirlascurvasconcentracinrespuestadeHistaminaydeCarbacolconcadauno
delosantagonistasutilizados.
b) Determinarelmodeloalqueseajustanlosdatos.
c) CalcularlaCI50(ConcentracinInhibitoriamedia)paralascombinacionesdeHistaminay
de Carbacol con los antagonistas utilizados de acuerdo con modelo determinado en el
incisoanterior.

VI.BIBLIOGRAFA

SamuelssonG.(1991).Assaysforpharmacologicalactivity:Nonspecificassays.Methods
inPlantBiochemistry.Volume6.Assayforbioactivity.AcademicPressLimited,EUA,261
280.

Schwinghammer T y Kroboth P. (1988). Basic concepts in pharmacodynamic modeling.


JournalofClinicalPharmacology.28:388394.

TallaridaR.(2000).Drugsinergismanddoseeffectdataanalysis.Chapman&Hall/CRC,
EUA.

53

FarmacologaI.GuindePrcticas.

9. Demostracin del efecto sinergista y antagonista en un


sistemaderganoaislado.

Nmerodesesionessugeridas:2sesiones(ejecucinyanlisis)
Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacodinamia, agonistas y antagonistas;
Farmacometra,relacindosisrespuestagradual.

I.INTRODUCCIN

Las preparaciones de tejidos u rganos aislados son comnmente usadas para estudiar los
efectosdeunfrmacosobreuntipoespecficodereceptores.Estaspreparacionessontambin
utilizadas para bioensayos de frmacos, caracterizacin de receptores especficos o sus
subtipos, para determinar la curva concentracin respuesta de un agonista y, para estudiar
antagonismoentreunfrmacoyunnuevofrmacodescubierto.

El leon de cobayo ha sido una preparacin in vitro muy utilizada para estudiar cambios
mediadosporreceptores,paraidentificarnuevosreceptores,yparadeterminarlavariacinen
especies producidas por frmacos anticolinrgicos. Varios receptores, incluyendo los de
histamina, los GABArgicos y adrenorreceptores se pueden estudiar en este tipo de
preparaciones.

La preparacin de leon de rata puede ser usada para ensear los conceptos bsicos del
bioensayo y para demostrar la actividad espasmoltica de frmacos colinrgicos y
anticolinrgicos.Lasventajasdeestapreparacinsonsubajocosto,fcilimplementacinysu
facilidaddemanejo.

En esta prctica se utilizar la preparacin de leon de rata para determinar el efecto del
CarbacolyAtropinasobrelosreceptorescolinrgicospresentesenlapreparacin.

54

FarmacologaI.GuindePrcticas.

II.OBJETIVOS

Losobjetivosdeestaprcticason:

1. Demostrarelefectoconcentracindependientedelcarbacolenleonderata.
2. Determinar el tipo de interaccin farmacolgica de la atropina sobre la actividad del
carbacolenleonderata.

III.MATERIAL

c) Materialbiolgico

UnarataWistarhembrade200250gdepeso,conayunode12hylibreaccesoalagua

d) Materiales,cristalerayequipo
Vasodeprecipitadode1L
Pipetasgraduadasde1mL
6matracesaforadosde10mL
Estuchedediseccin

Placadeagitacin

Balanzaanaltica

PolgrafoBiopacSystemacopladoaunacomputadoraconelsoftwareAcqKnowledge
versin3.7

e) Reactivos
DisolucinKrebsHenseleit(KHS).
ComposicinenmM:NaCl118,KCl4.7,MgSO4.7H2O1.2,CaCl22.5,KH2PO41.2,NaHCO3
25,glucosa(C6H12O6)11.

55

FarmacologaI.GuindePrcticas.

Cantidadesdelassalesparapreparar1000mLdedisolucinKrebsHenseleit(KHS)
Dglucosa

C6H12O6

1.998g

Sulfatodemagnesioheptahidratado

MgSO4y7H2O

0.2956g

Dihidrogenofosfatodepotasio

KH2PO4

0.1632g

Clorurodepotasio

KCl

0.351g

Clorurodesodio

NaCl

6.903g

Hidrgenocarbonatodesodio

NaHCO3

2.1g

EDTAdisdicodihidratado

C10H14O8N2Na2y2H2O

0.0117g

Clorurodecalciodihidratado

CaCl2y2H2O

0.3677g

Se disuelven todas las sales, una por una, en aproximadamente 500 mL de agua
destilada. Disolviendo al ltimo el cloruro de calcio. Una vez disueltas las sales y sin
signosdeprecipitacinsellevaaunvolumende1000mLconaguadestilada.

La disolucin KHS deber tener un pH de 7.4 a 37C y se mantendr con burbujeo


constante de gas carbgeno (95% O2 y 5% CO2). Si presenta precipitacin deber
prepararsenuevamente.

DisolucionesdeCarbacol(1x104,3x105,1x105,3x106y1x106M).
PreparacindeladisolucinStock(1x103M).
Disolver1.825mgdecarbacolenaguadestiladayaforara10mL.

Preparacindelasdisoluciones.
Una vez preparada la disolucin stock deber seguirse la serie de diluciones como se
muestraenelsiguienteesquema,utilizandomatracesaforadosde10mL:

56

FarmacologaI.GuindePrcticas.
1mL

1mL

1mL

1x104 M

1x105 M

1x106 M

1mL

0.3mL

Cadamatraz
debeaforarse a
10mL

Disol.Stock
1x103 M
3x105 M

3x106 M

DisolucindeSulfatodeAtropina(1x106M).
Se pesan 1.692 mg de sulfato de atropina, se disuelven agua destilada y se afora aun
volumende10mL(disolucinStock).Acontinuacinsesigueelesquemadediluciones
comoseindica:

2 mL

1mL

2 mL

5x105 M

1x105 M

1x106 M

Cadamatrazdebe aforarsea10mL
Disol.Stock
2.5x104 M

IV.PROCEDIMIENTO

a)ManejodelPolgrafoBiopacSystem
Para el manejo adecuado del Polgrafo Biopac System por medio del software
AcqKnowledge,vaseelApndiceIIIdeestagua.

57

FarmacologaI.GuindePrcticas.

b)Diseccindelleonderata
1) SacrificarlarataenlacmaradeCO2opordislocacincervical.
2) Abrirelabdomenyrealizarladiseccindelleon.Lalocalizacindelleonsemuestraen
elsiguienteesquema.

2.Duodeno
1.Estmago
3.Yeyuno

5.Ciego

4.leon

6.Colon

3) Disecarunalongitudaproximadade1012cmdeleon,lavarlocondisolucinKHShasta
quelaluzintestinalquedelibremateriaorgnica.
4) Cortar segmentos de aproximadamente 1 cm de largo y colocarlos en disolucin KHS,
conburbujeocontinuodegascarbgeno.

c)Montajedepreparacin.
1) Cada preparacin se suspender en una cmara para rgano aislado con ganchos de
alambre de nicromel, que se incrustan en el tejido. Uno de los extremos se fija a la
cmara y el otro al transductor de fuerza conectado al Polgrafo Biopac System, de
acuerdoalassiguientesfiguras:

58

FarmacologaI.GuindePrcticas.

2) Cada cmara deber contener 10 mL de solucin KHS con burbujeo constante de gas
carbgenoaunatemperaturade371C.
3) Eltejidosesometeaunatensininicialde1gdejndoloestabilizarpor20minutos,con
unlavadointermedioalos10minutos.
4) Realizar2estimulacionescon100Ldecarbacol(1x104M)aintervalosde20minutos,
con un lavado intermedio a los 10 minutos Despus de cada estimulacin se lava el
tejidoconsolucinKHSdosvecesparaeliminaralCarbacol.
Nota:Laconcentracinrealenlacmaraderganoaisladoes100vecesmenordebidoa
ladilucin(1:100).
5) Elcronogramadelospasos2a4eselsiguiente:

Tiempocorrido(min)

Actividad

50

Inicio
(OprimirelbotnStart)
LavadoconKHS
Estimulacin1y
LavadoconKHS
LavadoconKHS
Estimulacin2y
LavadoconKHS
LavadoconKHS

60

LavadoconKHS

70

Iniciodelasevaluaciones

0
10
20
30
40

59

FarmacologaI.GuindePrcticas.

d)CurvaacumulativaconcentracinrespuestadelCarbacol.
1) Estandoestableeltejido,seregistraunalneabasaldurante5minutosyseadicionan0.1
mL de Carbacol 1x106 M (disolucin 1). Las siguientes disoluciones se agregarn
sucesivamente en el momento en que la disolucin anterior alcance una meseta de
contraccin.

Disolucin

ConcentracindeCarbacol

1x106M

3x106M

1x105M

3x105M

1x104M

2) DespusdeevaluarselavaeltejidopordosvecescondisolucinKHSdejandoreposar
porperiodosde10minutosentrecadauno.

d)EfectodelaAtropinaenlaaccindelCarbacol
1) Estandoestableeltejido,seregistraunalneabasaldurante5minutosyseadicionan0.1
mLdeAtropina1x106M.
2) SedejaincubareltejidoconlaAtropinadurante5minutosyposteriormenteserealizala
curvaacumulativaconcentracinrespuestacomoseindicenelincisoe).

V.ANLISISDERESULTADOS

1. ParaanalizarlosdatosesnecesariodescargarelsoftwareAcqKnowledge3.9Demoenla
siguientedireccinelectrnica:

http://www.biopac.com/Demos.asp?did=4&PCDemoResearch=Y

60

FarmacologaI.GuindePrcticas.

Esnecesarioregistraseparadescargarlo,ydebeinstalarsecomoindicanlasinstrucciones
delsitioweb.

Conayudadelsoftwareydesuprofesordeberllenarelcuadrodedatosanexa.

TABLADEDATOSDELEXPERIMENTO
EXPERIMENTO1.CARBACOL
CONCENTRACIN
(M)CARBACOL

NM.

LOG[CONC(M)]

MUESTRA/CANAL
1

Basal
1
2
3
4
5
6
6

EXPERIMENTO2.CARBACOL+ATROPINA(1X10 M)
CONCENTRACIN
(M)CARBACOL

NM.

LOG[CONC(M)]

MUESTRA/CANAL
1

Basal
1
2
3
4
5
6

2. Conlosdatosobtenidos:

a) ConstruirlascurvasconcentracinrespuestadeCarbacolydeCarbacol+Atropina.
b) Determinarelmodeloalqueseajustanlosdatos.

61

FarmacologaI.GuindePrcticas.

c) Calcular las CE50 para el Carbacol y para Carbacol+Atropina, de acuerdo con modelo
determinadoenelincisoanterior.
d) Calcular cuntas veces se disminuy el efecto del carbacol por la presencia de la
Atropina.
e) DeterminareltipodeinteraccindelaAtropinasobrelaaccindelCarbacol.

VI.BIBLIOGRAFA

SamuelssonG.(1991).Assaysforpharmacologicalactivity:Nonspecificassays.Methods
inPlantBiochemistry.Volume6.Assayforbioactivity.AcademicPressLimited,EUA,261
280.

Schwinghammer T y Kroboth P. (1988). Basic concepts in pharmacodynamic modeling.


JournalofClinicalPharmacology.28:388394.

TallaridaR.(2000).Drugsinergismanddoseeffectdataanalysis.Chapman&Hall/CRC,
EUA.

62

FarmacologaI.GuindePrcticas.

APNDICEI.Tabladeconversindeproporcinaunidades
Probit.

TABLADECONVERSINDEPROPORCIN(pi)AUNIDADESPROBIT(yi)

pi

0.00

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.00

2.673

2.945

3.119

3.249

3.355

3.445 3.524 3.595 3.659

0.10

3.718 3.773

3.825

3.874

3.920

3.964

4.006 4.046 4.085 4.122

0.20

4.156 4.194

4.228

4.261

4.294

4.326

4.357 4.388 4.417 4.447

0.30

4.476 4.505

4.532

4.561

4.588

4.615

4.642 4.669 4.695 4.721

0.40

4.747 4.773

4.798

4.824

4.849

4.874

4.900 4.925 4.950 4.975

0.50

5.000 5.025

5.050

5.075

5.100

5.125

5.151 5.176 5.202 5.227

0.60

5.253 5.279

5.305

5.331

5.358

5.385

5.412 5.439 5.467 5.495

0.70

5.524 5.553

5.582

5.612

5.643

5.674

5.706 5.739 5.771 5.806

0.80

5.841 5.878

5.915

5.954

5.994

6.036

6.080 6.126 6.175 6.227

0.90

6.282 6.341

6.405

6.476

6.555

6.645

6.751 6.881 7.054 7.327

pi

0.000 0.001

0.002

0.003

0.004

0.005

0.006 0.007 0.008 0.009

0.97

6.88

6.896

6.911

6.927

6.944

6.960

6.978 6.996 7.014 7.034

0.98

7.054 7.075

7.097

7.121

7.145

7.171

7.198 7.227 7.258 7.291

0.99

7.327 7.366

7.409

7.458

7.513

7.576

7.652 7.748 7.879 8.091

63

0.07

0.08

0.09

FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.

APND
DICEII.TTcnicassdeman
nejoeid
dentificaacindeanimale
es
delabor
d
ratorio((ratayraatn).

I.MANEJJODELRAT
N.

Losraton
nes,ascomolamayoraadelosanim
malesdelab
boratorio,puedenserleevantadosp
porsu
cola, la base
b
de la cola es sujeetada entre los dedos pulgar e nd
dice y el raatn entonces es
levantado
o en posici
n vertical. Esta tcnicca resulta muy
m til parra manejar y
y trasladar a los
ratonesd
distanciasco
ortas.Sedeb
betenercuidadodeno sujetarlopo
orlapunta delacolayaaque
podraesscalarlamism
maymorderlamano(fiigura1y2).

Figura1.Form
macorrectademaanejarunratn. Figuraa2.Formaincorreectademanejarun
nratn.

Para la inmovilizaci
n del ratn
n con el objetivo de ad
dministrarlee un frmaco o sustanccia se
procederrdelasiguientemanera:

Se toma al ratn co
omo se expliic anteriormente, y el peso del cuerpo del ratn es apo
oyado
sobrelarrejadelacaja(figura3),setomaah
horalacolad
delratnpo
ormediodelldedomeiquey
conlosdedosndiceypulgarsettomadelap
pieldelanuca(figura4 y5).Sevolteayselevantala
mano dee manera que
q
el vien
ntre del rattn quede expuesto (figura
(
6 y 7). Una buena
b
inmovilizacinevitaq
queelratnsevolteeosemuevaalmomentod
delaadminiistracin.

64

FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.

Figura3. Figura4. Figura5.

F
Figura6.
Figura7.

Unavez inmovilizado
o elratnseepuedepro
ocederala administracindelfrm
macoosustaancia,
ocuidadodesujetarlofirrmemente.
teniendo

II.MANEJODELARA
ATA.

La rata debe
d
manejaarse por la base de la cola
c
y evitarr levantarla de esta maanera por mucho
m
tiempod
debidoalos movimiento
osquerealizza(figura8).Eltraslado
oserealizardeestamaanera
endistan
nciasmuyco
ortasynosedebersujeetarporlapu
untadelaco
ola.

Figura8.Formaco
orrectademanejaaraunarata.

Para la inmovilizaci
n de la ratta de laboraatorio existeen muchas tcnicas. A continuaci
n se
explicarnlasmsuttilizadas.

65

FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.

Tcnica1
1.

Sesujetaalaratapo
orlabasedeelacolacon
nlamanodeerechaycon
nlamanoizq
quierdasecoloca
el cuello de la rata entre los dedos medio e ndice.. La rata en
ntonces es sujetada po
or las
extremidadesanterio
oresyelabdomensin hacerpresi
nsobreel cuello(figurra9,10y11
1).Se
levanta la mano y laa cola es su
ujetada con la mano izzquierda parra dejar exp
puesto el vientre
(figura 12 y 13). Se levanta la mano y la cola es sujeetada con la mano derecha para dejar
expuesto
oelvientre.

Figura9. Figura10. Figura11.

Figura12
2. Figura13.

Tcnica2
2.

orlabasedeelacolacon
nlamanodeerechaycon
nlamanoizq
quierdasecoloca
Sesujetaalaratapo
el cuello de la rata entre
e
los deedos pulgar e ndice (figgura 14 y 15
5) de manera que los dedos
d
a la altura de
d las extrem
midades antteriores. Con
n el movimiento naturaal de la man
no, se
queden a
cierrasttademanerraquelasexxtremidadessanteriores delarataquedencruzaadas,selevaantay
sesujetalacolaconlamanoderrechaparadejarexpuesttoelvientree(figuras16
6,17y18).

66

FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.

Figu
ura14. Figura15. Figura16.

Figura17
7. Figura18.

III.MARC
CAJEDELRA
ATNYLARA
ATA.

LatcnicaarecomendadaparaelmarcajederatonesyratasenelLab
boratoriodeeFarmacologgase
realiza en
n la cola de
el animal po
or medio dee un marcad
dor indeleble, siguiendo
o la clave que se
muestra enlasfiguraas19a24.EEstatcnica serecomiendacuandoseutilizan pocosanimaalesy
enexperimentosmuycortosenduracin.

Figura1
19.Marcajeenlaccolaconmarcadorr.Figura20.Ratnmarcadoconelnmero1.Figuraa21.Ratnmarcad
doconelnmero 2.

67

FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.

Figura22.Ratnmarcadoconelnmero3
3.Figura23.Ratnmarcadoconelnmero4.Figuraa24.Ratnmarcad
doconelnmero5

nmarcadoconelnmero6.
Figura25.Ratn

OGRAFA
IV.BIBLIO

Sh
hortDyWoodnottD(ed
ditores).(1963).TheA.TT.A.manualo
oflaboratorryanimalpra
actice
an
ndtechniquees.CharlesC
C.ThomasPublisher,EU
UA:4757.

68

FarmacologaI.GuindePrcticas.

APNDICEIII.InstructivoparaelusodelpolgrafoBiopac
SystemMP100.

I.MATERIALESYREACTIVOS.

PolgrafoBiopacSystemMP100ACE

Gascarbgeno(oxigeno95%dixidodecarbono5%).

DisolucinKrebsHenseleit(KHS)

DisolucinKrebsHenseleit(KHS)
Dglucosa

C6H12O6

1.998g

Sulfatodemagnesioheptahidratado

MgSO4y7H2O

0.2956g

Dihidrogenofosfatodepotasio

KH2PO4

0.1632g

Clorurodepotasio

KCl

0.351g

Clorurodesodio

NaCl

6.903g

Hidrgenocarbonatodesodio

NaHCO3

2.1g

EDTAdisdicodihidratado

C10H14O8N2Na2y2H2O

0.0117g

Clorurodecalciodihidratado

CaCl2y2H2O

0.3677g

Preparacin: Se disuelven todas las sales en aproximadamente 500 mL de agua


destilada.DisolviendoenltimotrminoalClorurodecalcio.Unavezdisueltaslassales
ysinsignosdeprecipitacinsellevaaunvolumende1000mLconaguadestilada.

DisolucindeAcetilcolina3x105M

DisolucindeNorepinefrina1x106M

DisolucindeCarbacol1x104M

69

FarmacologaaI.GuindeP
Prcticas.

II.PROCEEDIMIENTO.

A.Calibracin
ndelpolgraafo.

quetodoslo
oscanalesesstnfirmementeconecttadosyajusttados.
1..Severificaq

2..Seenciendelacomputadorayelpolgrafoopriimiendoelb
botnenlap
posicinON..

3..Severifica queelnivelldeaguadeelbaorecirrculadorcub
bralaresisteenciaylabo
omba.
Seeenciendeyydejaestab
bilizarlatem
mperaturaen
n371C.Esstebaopro
oporcionaellflujo
deeaguaquem
mantienelatemperaturadeladisolucinKHSadichatemperatura.

4..Enlapantalladelacom
mputadoraseseleccionaaelicono

70

FarmacologaI.GuindePrcticas.

para iniciar el programa AcqKnowledge, el cual registra los datos provenientes del
Polgrafo.

5.Alcomenzarelprogramaseabrelaventanaqueseilustraenseguida.

6. Para comenzar la configuracin del polgrafo se selecciona en el men la opcin

MP100,yposteriormentelaopcinSetupChannelsquenosabrirunaventanaemergente.

71

FarmacologaI.GuindePrcticas.

7. En la ventana emergente Input Channels, se activan los canales que se utilizarn


seleccionandolascasillasAcquire,PlotyValuesconparacadacanalAn.

8.Paralacalibracindecadacanalseseleccionaprimeroelcanal
botn

yseoprimeel

conelcualaparecerlasiguienteventanaemergente.

9.EnlascasillasScalevaluesecolocan0(cero)y2(dos)yenUnitssecolocag(gramos)
comosemuestraacontinuacin.

72

FarmacologaI.GuindePrcticas.

10.ConelvalorScalevalue=0,seoprimeelbotn

yelprogramaautomticamente

calcularaelvalorInputvoltscorrespondientea0g(cero).ConelvalorScalevalue=2,se
colocaunapesade2gramossobreeltransductoryseoprimeelbotn

,elprograma

entonces, automticamente calcular el valor Input volts correspondiente a 2 g (dos


gramos).AlterminarseoprimeelbotnOK.

Esteprocedimientoserepiteconcadacanalqueseutilizar.

11. Continuando con la calibracin, se selecciona en el men la opcin MP100, y

posteriormentelaopcinSetupAcquisition.

12.AlseleccionarlaopcinSetupAcquisitionseabrirlasiguientepantallaemergente.

73

FarmacologaI.GuindePrcticas.

13.EnlapantallaemergenteSetupAcquisition,seseleccionarlasopcionesRecordand
SaveoncetoDiskacquisition.PosteriormenteseseleccionarAcquisitionSampleRate
en 0.5 1.0 samples /second, y en Total lengh se seleccionar el mximo en horas,
comosemuestraacontinuacin.

14.ElPolgrafoyaestcalibradoysepuedeseguirconelmontajedeltejido.

B.Montajedeltejido.

1.AntesdemontareltejidoseseleccionaenelsoftwareAcqKnowledgeseseleccionaen
elmenlaopcinMP100,yposteriormentelaopcinShowInputValues.

74

FarmacologaI.GuindePrcticas.

2.Alseleccionarnosabrirunaventanaemergentequenosmuestralosvaloresquese

registranenelPolgrafo.

En la ventana emergente se oprime el botn n y despus el botn Options. En esta


ltima ventana se seleccionan Channel numbers, Units y Values, y el tamao de letra
adecuadoparasuvisualizacin(serecomiendade1418puntos).Alterminarseoprime
elbotnOK.

75

FarmacologaI.GuindePrcticas.

3.Serealizaladiseccindeltejidoautilizardeacuerdoaloreportadoenlaliteratura.En
casodeleonotrqueadecobayooaortaderataeltejidosecortarenanillosparasu
montaje.

4.ParaaortaytraqueeltejidoessujetadopormediodeganchosdealambreNicromel
comosemuestraenlafigura.

Hilo
Anillos de
Nicromel
Tejido

Paraleoneltejidoesmontadodeacuerdoalasiguientefigura,insertandoeltejidoen
losganchos:

Hilo
Anillos de
Nicromel

Tejido

5.Losganchosjuntoconeltejidosoncolocadosdentrodelacmaraderganoaislado
previamente llena con KHS y con burbujeo constante de gas carbgeno, como se
muestraacontinuacin.

76

FarmacologaI.GuindePrcticas.

Transductor

Medio KHS
Gas carbgeno

Cmara

6. Se le da una tensin a cada tejido de cada cmara, por medio del tensor del
transductordeacuerdoconelsiguientecuadro.

Tejido

Tensin

Aortaderata

4.0gramos

Traqueadecobayo

1.5gramos

leonderata

1.0gramos

7.SeoprimeelbotnStartparacomenzarelregistrodelexperimento.

77

FarmacologaI.GuindePrcticas.

8.AloprimirelbotnStart,comenzarelregistrocomosemuestraacontinuacin.

9. Para personalizar las opciones de visualizacin se recomienda consultar el siguiente


cuadro.

BOTN

NOMBREDELBOTN

EFECTO

ScopeMode

(muestratodoslos
canalesjuntos)

ChartMode

(muestracadacanal
porseparado)

78

FarmacologaI.GuindePrcticas.

Show/HideJournal

(Muestra/ocultala
ventanade
anotacionesenlaparte
inferior)

Show/HideMarkers

(Muestra/ocultala
barrademarcadores
deevento.Para
agregarunmarcadorse
oprimelateclaF9)

Show/HideGrid

(Muestra/ocultala
rejilla)

SetScreenVerticalAxis

Oprimir
(Cambialavisualizacin
sobreeleje
delejeY.Se
Y
recomiendaunScale
Setting=1g)

SetScreenHorizontal
Axis
Oprimir

sobreeleje (Cambialavisualizacin
X
delejeX.Se
recomiendaunScale=
15minutes)

79

FarmacologaI.GuindePrcticas.

C.Estimulacindeltejidoparaelexperimento.

1. Una vez montados los tejidos se proceder a su estimulacin de acuerdo con el


siguientecuadro.

Tejido

Sustanciapara
estimulacin

Concentracin

Aortaderata

Norepinefrina

1x106M

Traquedecobayo

Acetilcolina

3x105M

leonderata

Carbacol

1X104M

2.Elcronogramadeestimulacinylavadodelostejidosserealizarcomosigue.

Tiempocorrido
(min)
0

Inicio(OprimirelbotnStart)

15

LavadoconKHS

30

Estimulacin1yLavadoconKHS

40

LavadoconKHS

50

Estimulacin2yLavadoconKHS

60

LavadoconKHS

70

LavadoconKHS

80

Iniciodelasevaluaciones

Actividad

3.Enelminuto80,sepuedeiniciarlaevaluacindelassustanciasdeacuerdoalo
reportadoenlaliteraturayalosobjetivosestablecidos.

80

FarmacologaI.GuindePrcticas.

III.BIBLIOGRAFA

Estrada S, et al. (1999). Nitric oxide/cGMP mediates the spasmolytic action of 3,4'
dihydroxy5,5'imethoxybibenzylfromScaphyglottislivida.PlantaMedica.65(2):109
114.
HsiehG,etal.(2003).YC1potentiatesthenitricoxide/cyclicGMPpathwayincorpus
cavernosumandfacilitatespenileerectioninrats.EuropeanJournalofPharmacology.
458:83189.
SnchezMendozaM,etal.(2007).Mechanismsofrelaxantactionofacrudehexane
extract of Gnaphalium liebmannii in guinea pig tracheal smooth muscle. Journal of
Ethnopharmacology.111:142147.

81

Вам также может понравиться