TEMA 9: TCNICAS DE TRANSFORMACIN MEDIANTE VIRUS

1. TRANSFORMACIN MEDIANTE VIRUS

o
o
o

Una de las propiedades ms destacadas de los virus es la de integrar sus genes

virales dentro del material gentico de la clula infectada.
Utilizan as la maquinaria celular de la planta para reproducir las partculas
virales.
El avance en el conocimiento de la biologa de los virus ha permitido el diseo de
vectores que puedan transportar genes de inters hasta la planta y expresarlos
en la misma
Los vectores virales hasta hoy da son usados como herramientas para
conseguir altos niveles de expresin de genes extraos en plantas, ya sea en
tejidos maduros, tejidos diferenciados, etc y se han usado con distintas
aplicaciones:
i. Dichos genes, incluidos en el genoma viral, pueden servir para el
estudio de fenotipos de plantas mutantes.
ii. Tambin para la produccin de protenas y pptidos extraos en
plantas, siendo una alternativa barata a los sistemas de produccin
por fermentacin (molecular pharming)
Muchas investigaciones se han centrado en el desarrollo de virus RNA y DNA
como vectores para la expresin de genes en plantas

Los virus fitopatgenos son unos vectores atractivos por varios motivos:

Son capaces de introducir un gen extrao en clulas intactas.

Dependiendo de la virulencia del virus, se puede conseguir una
transformacin relativamente poco invasiva o no.
Relativamente, pueden producirse grandes cantidades de partculas virales en
clulas nfectadas, por lo que en principio es posible una produccin alta de
protena heterloga.
Algunas infecciones son sistmicas, extendindose a otras clulas y tejidos.
Con una aplicacin puntual del virus transgnico se puede conseguir la infeccin
de buena parte de la planta.
Una vez que se ha conseguido infectar una clula, la informacin gentica del
virus se disemina por todas las clulas, dada la estrecha conexin entre las
clulas de una planta
Pero hasta ahora no se ha descubierto ninguno que sea prctico de utilizar.
Entre las causas de que se utilicen poco para la transformacin estn:
Su elevada especificidad

La naturaleza patognica de los virus

El reducido tamao de su genoma
La mayora de los virus patgenos de vegetales tienen ARN como cido
nucleico
El DNA vrico no se transmite de modo sexual a la progenie de las
plantas infectadas. Esto se debe a que no se integra en el genoma de la
clula y por tanto slo tiene sentido utilizarlos para estudios de
expresin gnica transitoria

Tipos de virus infectivos

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Las partculas de virus estn compuestos por un genoma de cido nucleico que
puede ser ADN o ARN, rodeado por una cpsida de naturaleza proteica tambin
llamada nucleocpsida.
Presenta un enorme rango de morfologas desde forma de vara hasta partculas
isomtricas y algunos presentan membranas que envuelven la nucleocpsida.
El genoma de los virus codifica para protenas de la cpsida, protenas
relacionadas con la replicacin, con el movimiento del virus incluso protenas que
facilitan su extensin o capacidad infectiva. Algunos tienen pequeos
segmentos de RNA asociados llamados RNA satlite.

2. TRANSFORMACIN MEDIANTE VIRUS (II)

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Los genomas de virus fitopatgenos se han clonado en plsmidos bacterianos

tanto si son de DNA como si son de RNA, tras la previa y consiguiente
conversin a cDNA.
Uno de los plsmidos usados para clonar virus es el plsmido Ti de
Agrobacterium tumefaciens.
Dentro de estos plsmidos, los genomas del virus pueden manipularse e integrar
la secuencia del gen que se quiere expresar en el genoma de la clula vegetal
husped.
Las plantas husped entonces son infectadas artificialmente.
El genoma alterado del virus se replica y, al mismo tiempo, se expresan los
genes de la planta, entre los que se encuentra el gen ajeno manipulado inserto
en el genoma.
Dependiendo de la construccin que se realice, la protena heterloga
sintetizada
puede quedar unida a alguna protena viral.
o incorporarse a la clula vegetal a infectar.

Virus mosaico de la coliflor

El ms potente de los utilizados es el virus del mosaico de la coliflor (CaMV) un virus

con DNA de doble cadena.
La partcula del virus es un icosaedro con un dimetro de 52 nm. Contiene una molcula
circular de ADN bicatenario de unas 8 kb, interrumpida por discontinuidades
localizadas en lugares especficos resultantes de su replicacin por transcripcin
inversa.
Despus de entrar en el husped, el ADN viral es reparado, formando un molcula
altamente enrollada que se une a las histonas. Este ADN se traduce en una molcula
ARN 35S de longitud completa, terminalmente redundante, y en ARN 19S subgenmico.

El promotor del CaMV ARN 35S, bien conocido por su uso en ingeniera gentica en
plantas, es muy potente.
El ARN 35S es particularmente complejo, conteniendo una secuencia lider de 600
nucletidos con seis a ocho ORFs cortos.
Este 35S va seguido por siete ORFs perfectamente organizados que codifican las
protenas virales.

ORF I Movimiento de protenas ORF II Factor de transmisin en insectos ORF III ORF
IV Protena de la cpside ORF V Proteasa, transcriptasa inversa y RNaseH ORF VI
Activador translational / Protena del cuerpo de inclusin ORF VII Desconocido
(dispensable)

Como principales desventajas tiene.

Un genoma muy pequeo (8 Kb) muy empaquetado en la cpside, por lo que
no es posible introducirle mucho ADN extra ya que no se puede eliminar
parte de su genoma (slo se han encontrado dos genes no esenciales).
Su replicacin es compleja y tiene una etapa intermedia a travs de ARN
No obstante, contiene un promotor muy potente, el CaMV 35S RNA que se
utiliza para transformacin de plantas, especialmente de dicotiledneas.

Virus del mosaico del tacabo

o

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Otro virus interesante para usar como vector en la transformacin de plantas es el

virus del mosaico del tabaco, TMV, un virus RNA con un promotor igualmente muy
potente.
Este ha sido intensamente estudiado y su genoma codifica 5 ORFs de las que al menos
3 son protenas no estructurales.
Sin embargo produce bajos niveles de infectividad en las plantas en los distintos
tejidos. Slo infecta al tabaco y otras Solanaceas.
Produce decoloracin de las hojas en forma de mosaico (de ah su nombre)

Su cpsida tiene 2130 molculas de protenas y una molcula de ARN genmico de 6 Kb

La protena de la cpsida tiene estructura helicoidal alrededor del ARN. Los
monmeros de protena contienen 158 aminocidos unidos en cuatro alfa-hlices

o
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o

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o

Win Brooothaers et al hicieron modificaciones en el proceso de infeccin del TMV. Los

autores introdujeron un sistema infiltrando plantas adultas enteras con una suspensin
diluda de Agrobacterium.
Se utiliz para ello una tcnica llamada agroinfiltracin. Para ello se inserta TMV en el
T-DNA de Agrobacterium, y se usa a bajas concentraciones de inculo para producir la
infeccin inicial.

El T-DNA en este caso adems de llevar el ADN extrao llevara las protenas del
virus necesarias para su replicacin.
Una vez dentro de la clula, el virus induce a la clula a la transcripcin de su RNA y a
la formacin de protenas recombinantes en el citoplasma.
El resultado: un vector viral mejorado y optimizado con capacidad de movimiento y
replicacin clula a clula. Aumenta la eficacia y la simplicidad del proceso de
inoculacin.

Conseguimos una inoculacin eficiente de todas las partes areas de la planta, usando
para ello Agrobacterium.
Este proceso proporciona la base para una nueva forma de obtencin de protenas
recombinantes a escala industrial.
Se facilitan dos cosas:
una mejor entrada del gen problema en la planta
y
una
mayor
capacidad
de
replicacin
del
gen
por medio del virus

El virus X de la patata
o

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o

El virus X de la patata (PVX) es un virus RNA de cadena simple con una secuencia de
poli A en el extremo 3que tambin ha sido usado con xito como vector para la
expresin de genes forneos en plantas.
Para ello es totalmente necesaria la presencia de la protena de la cpsida en la
construccin realizada, que hace posible el movimiento del virus clula a clula.
Adems se suele duplicar la presencia del promotor de manera que as la expresin es
mayor
Este virus presenta cinco largas ORFs, similares a las del virus TMV

Los vectores virales se han generado a partir de diversos virus.

o Cada vector tiene sus propias ventajas y desventajas particulares dependiendo de su
biologa. Los ms conocidos y utilizados hasta la fecha son el TMV o el virus de la
patata X (PVX).
o De hecho, los vectores derivados del TMV se estn utilizando actualmente para
expresar cantidades comercialmente relevantes de protenas de uso farmacutico
o

o
o

Estos sistemas de transfeccion virales permiten la superproduccin de protenas y de

metabolitos en cantidades que podran ser mortales o deletreas para la planta.
Por ejemplo, una sobreexpresin del gen que codifica para la fitoeno sintasa en
N. benthamiana condujo a un aumento diez veces mayor del phytoeno en las
plantas.
De forma parecida, la sobreexpresin de capsorubina sintasa, enzima que
existe en una especie de pimiento, condujo a la produccin de capsanthina en N.
benthamiana, un carotenoide que no se encuentra normalmente en dicha especie.
Esta capacidad de expresar fcilmente genes no-endgenos abre una amplia gama de
posibilidades
Debido a su velocidad y flexibilidad de expresin de las protenas, los vectores virales
son herramientas ideales para generar in vitro millares de mutantes o de genes
quimricos, expresarlos y, finalmente, seleccionar mutantes de plantas con rasgos de
inters.
Las bibliotecas de genes pueden reproducirse en virus fitopatgenos e individualmente
ser expresados sistemicamente a travs de las plantas en un plazo de tiempo corto.
Usando esta estrategia, se podran crear actividades enzimticas mejoradas en
plantas, tales como celulasas termoestables o ligninasas para facilitar la produccin de
papel
Los virus fitopatgenos han hecho muchas contribuciones significativas en la Biologa
durante los ltimos aos:
han provisto a los investigadores de plantas de promotores funcionales muy
potentes,

Son activos sistemas transitorios de expresin gnica

y, lo ms reciente e interesante, con inserciones crticas de tales virus en el
genoma de las plantas, se ha podido producir el silenciamiento
postranscripcional de genes o la sobreexpresin de los mismos
Estos vectores vricos tienen la capacidad de actuar sobre genes de la
planta para inducir su expresin o suprimirla
o Mientras que el mecanismo de sobreexpresin del gen se conoce
conceptualmente, sin embargo, los mecanismos para la induccin
del silenciamiento son menos entendidos.

3. INFECCIN DEL VIRUS EN LA PLANTA

La mayora de los virus son transmitidos a la planta por medio de vectores como
insectos, nematodos y hongos o a travs de las semillas y el polen de las flores.
El proceso de infeccin consiste en la entrada del virus completo en la planta a
travs de orificios que el vector realiza en la misma para que penetre el virus.
o En algunos ejemplares de virus RNA se ha demostrado que al entrar en la
planta hospedadora eliminan la cpsida en un proceso conocido como
desemblaje contraslacional, en el cual, el RNA es rodeado por los ribosomas,
para evitar ser digerido por las nucleasas de la planta.
o

Los genes de la planta codifican para el cido nucleico del virus, que se
replica y produce las protenas de patogenicidad. Posteriormente, este
genoma se empaqueta en forma de complejos de ribonucleoprotenas, que
infectan a la planta.

Traslacin y replicacin en virus RNA de cadena positiva

Los genomas de virus RNA de plantas son generalmente muy compactos,

con genes separados por regiones intergnicas muy cortas,
o sobrelapados unos a otros formando un genoma muy pequeo con
secuencias redundantes.
Dicha naturaleza compacta de su genoma, con un mnimo nmero de
polipptidos para los que codifica, significa que los virus necesitan de la
maquinaria de la planta para su replicacin y movimiento.
La mayora de estos virus posee una cadena simple y positiva de RNA
La replicacin de los virus se produce en el citoplasma de la planta en donde
forman inclusiones, llamadas viroplasmas ancladas a la membrana
citoplasmtica hacia dentro.
Existe un problema fundamental en virus al usar la maquinaria eucariota de las
plantas.
Slo el primer cistrn 5 en un mensaje policistrnico que constituye el
genoma viral, ser trasladado, y el resto del mensaje, despus del primer
codn stop no se leer por parte de la maquinaria de la planta.
Por este motivo los virus infectivos de plantas han desarrollado una serie
de estrategias para asegurarse de que todos sus genes se trasladan en la
replicacin.
Dicha estrategia consiste en que el primer cistrn trasladado es la
replicasa del virus.
Dicha replicasa ser la responsable de la formacin del los crculos
subgenmicos de cadenas RNA posteriores.
Cada uno de esos RNA subgenmicos tienen su propia secuencia promotora
y terminadora para trasladar las protenas funcionales del virus.
Tales como son protenas del movimiento y de la cpsida.

Traslacin y replicacin en virus RNA de cadena positiva. Genomas segmentados

Una segunda aproximacin a la replicacin y translacin de los virus RNA es que

tienen un genoma segmentado.
Miembros de la familia Bromoviridae, como el virus del mosaico de la calabaza,
tienen 3 tipos de RNA genmico, empaquetados en cpsidas individuales
compuestas por la misma subunidad proteica. En total codifican para 4 protenas:
RNA 1. Codifica para la metiltransferasa y para la helicasa.
RNA2. Codifica para un dominio RdRp expresado en poca abundancia pero
imprescindible para promover la replicacin y la supervivencia del virus.
Parece tener un papel en el silenciamiento post transcripcional del virus.
RNA3. Codifica para las protenas de la cpsida.

La tercera estrategia de los virus infectivos de plantas consiste en producir una

sola poliprotena a partir del RNA vrico que se traduce en la formacin de
diferentes polipptidos. Se preoduce en los gneros Potyviridae y Tymovirus
Estos polipptidos se anclan unos a otros inducidos por proteinasas codificadas por
el virus.
Dichas enzimas proteinasas estn situadas entre los dominios de la helicasa y
metiltransferasa del virus, de manera que se expresa obligatoriamente durante la
replicacin.

Virus RNA de cadena negativa

Existen virus con cadenas RNA en antisentido (Bunyaviridae) que necesitan

fabricar las cadenas complementarias para codificar determinadas protenas.
Afecta por ejemplo, al tomate.
Sus genomas consisten esencialmente en tres partes o bloques:
El Bloque I codifica la nucleocpsida y fosfoproteinas
El Bloque II el desarrollo de las proteinas de membrana y proteinas del
movimiento del virus
El Bloque III codifica para la replicasa
La replicacin inicial de los virus se produce cuando se detecta 10 a 20 copias del
virus con protena del dominio viral RdRp.

Virus RNA de doble cadena

Se agrupan en dos familias con dominios RdRp:

Reoviridae, con genomas de un tamao 26-28 Kb y 10-12 segmentos de su
genoma. Utilizan un mecanismo conservativo de su replicacin que consiste
en que la doble cadena de RNA se desenrolla de forma transitoria slo en la
parte final donde se produce el crecimiento de la nueva cadena RNA
complementaria
Partiviridae con genomas ms pequeos, de 3-4 Kb divididos en 2-3
segmentos con replicacin de tipo semi-conservativa, que consiste en que la
doble cadena se divide en forma de horquilla para la sntesis de las
complementarias

Son los llamados Geminivirus en su mayora. Recientemente se han descubierto

otra familia de los Nanoviridae.
Los Geminivirus poseen una o dos pequeas cadenas de DNA simple (2,6-3 Kb)
emparejadas en dos partculas hermanas o gemelas.Su replicacin se da en el
nucleo de plantas infectadas y el primer paso consiste en la conversin de la

10

cadena DNA en doble usando enzimas de la planta las cuales no se conocen muy
bien (ni cules ni cmo).
A continuacin actuara la replicasa viral, necesaria para la fase de enrollamiento
circular que da lugar a la produccin de nuevas formas de virus de dsDNA y ssDNA.
Este proceso se inicia entre las 3 y 8 base de un locus invariante que existe en
todos los Geminivirus (TAATATTAC).
Los Geminivirus nunca se replican en meristemos, sino siempre en clulas
diferenciadas de la planta. Esto ocurre a travs de una interaccin entre una
protena viral Rep con otra protena de la planta llamada RBR.

Virus DNA de cadena doble

Se replican a travs de la transcriptasa reversa Sus genomas (una 8Kb) estn

formados por una cadena a (necesaria para la transcripcin inicial) con una sola
discontinuidad en una regin de 1-2 nucletidos.
La cadena opuesta
posee 2-3 discontinuidades en las que las dos cadenas se
solapan entre s.
En la clula hospedadora el virus se mueve hasta el ncleo donde se abre la
estructura de doble cadena y el DNA forma un minocromosoma superenrollado.
A partir del mismo se producen dos transcritos de RNA:
El 19S RNA, que se mueve hasta el citoplasma y se transforma en una
proteina transactivadora de 58 KDa
35S RNA Este transcrito es procesado de manera que conduce a la
formacin de 6 conocidas protenas encrgadas de xodificar para
estructuras imprescindibles para el virus

11

4. LA SUPRESIN DE GENES EN PLANTAS USANDO LOS VECTORES VIRALES

Aunque los vectores virales fueron diseados originariamente para servir como
herramientas de sobreexpresin de genes, tambin tiene la capacidad de suprimir la
expresin de los mismos en plantas activando una secuencia especfica para la
degradacin del RNA conocida como silenciamiento posttranscripcional (PTGS).
Se fabrican transgenes construidos bajo el control de promotores constitutivos
fuertes.
Como consecuencia, algunas plantas transgnicas generadas de esta manera, pero no
todas, exhibieron un fenotipo inusual en el cual, misteriosamente, la expresin tanto
del transgn como la del gen homlogo endgeno se silenci, es decir, se suprimi.
Este fenmeno inesperado fue llamado cosupresin o silenciamiento gnico (SGT).

Silenciamiento gnico

El trmino silenciamiento gnico se utiliza habitualmente para describir el

apagado de un determinado gen, y es un mecanismo general que ocurre durante la
replicacin de la expresin gnica. A travs de este mecanismo, la maquinaria
celular impide la expresin de un gen que debera estar encendido en
circunstancias normales.
La expresin gnica se puede regular tanto a nivel transcripcin como posttranscripcional.
El silenciamiento gnico es el resultado de la modificacin de las histonas. Esta
modificacin crea un ambiente de heterocromatina alrededor de un cierto gen, que
impide el acceso de la maquinaria transcripcional.
El Silenciamiento Gnico Post Transcripcional (en ingls, Post Transcriptional
Gene Silencing o PTGS), en cambio, en un mecanismo que implica la degradacin de
un determinado ARN mensajero.

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La destruccin de este ARNm impide su normal traduccin y

consecuentemente no se sintetiza la protena correspondiente.
Tanto el silenciamiento transcripcional como el post-transcripcional son
mecanismos que regulan la expresin de genes endgenos, pero adems son
empleados por las plantas para protegerse de transposones y virus.
o Es por eso que se cree que el silenciamiento gnico forma parte de un
sistema de defensa ancestral que resguarda a algunos organismos de la
invasin de AN infeccionsos.
o

El PTGS es un mecanismo descrito en plantas y mediante el cual la maquinaria

celular desencadena la degradacin de un ARNm. Se dice que esta degradacin es
especfica de secuencia ya que slo sern degradadas las molculas de ARNm que
contengan una secuencia particular, y no otros. Este fenmeno tambin se conoce
como ARN de interferencia o ARNi.
El mecanismo se describi por primera vez en petunias transgnicas, en las que se
pretenda mejorar el color de las flores. Para eso se introdujeron copias
adicionales de un gen que codifica para una enzima clave para la produccin de
pigmentos en los ptalos.

Silenciamiento post transcripcional

Algunos aos ms tarde un grupo de virlogos vegetales observ un fenmeno

similar. El objetivo de su trabajo era mejorar la resistencia de las plantas al
ataque de ciertos virus.
o En ese tiempo ya se saba que las plantas que fabricaban protenas virales
eran ms resistentes a la infeccin.
Sin embargo, en este caso los virlogos observaron que las plantas que contenan
slo un pequeo segmento del ARN viral, y que no codificaban para ninguna protena,
eran igualmente resistentes.
Concluyeron que el ARN viral producido a partir de transgenes tambin poda
proteger a la planta de nuevas infecciones virales, evitando la multiplicacin y
propagacin del virus en cuestin.
Luego realizaron el experimento inverso: insertaron secuencias cortas de genes de
la planta en el genoma del virus.
Infectaron plantas con el virus modificado y observaron que la expresin de ese
gen de la planta era suprimida. Este fenmeno se llam Silenciamiento Genmico
inducido por Virus.
A pesar de que el fenmeno de silenciamiento gnico fue descrito por primera vez
hace ms de 15 aos, an no se conoce con precisin su mecanismo molecular. Sin
embargo, se ha avanzado mucho en estudios que lo describen parcialmente.

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Utilizando anlisis bioqumicos y genticos se ha podido establecer un modelo que

describe cmo se produce el PTGS. En este modelo, el silenciamiento puede
dividirse en una etapa de inciacin y en otra etapa efectora y de mantenimiento.
La etapa de iniciacin comienza con la presencia de un ARN de doble cadena. Este
dsRNA puede ser un intermediario de replicacin de un virus, puede haber sido
inducido artificialmente o puede provenir de un transgen.
Este dsARN es reconocido y digerido por la enzima Dicer, que posee dominios de
ARNasa tipo III (enzima que degrada molculas de RNA), para formar molculas
de ARN prequeos.
En la etapa efectora, el siRNA se une a un complejo con actividad de nucleasa para
formar el compejo RISC (Complejo de Silenciamiento Inducido por ARN). La
actividad helicasa de RISC separa las dos hebras del siRNA, y slo una de ellas
permanece unida al compejo. Una vez que RISC est activado, tiene como blanco la
degradacin de los ARNm homlogos a dichos siRNA.

Mecanismos de accin del silenciamiento postranscripcional

Las plantas tienen una manera de detectar el RNA extrao que han acumulado a lo
largo de un tiempo. Despus de la deteccin, la planta desencadena una respuesta
activa que lleva a su degradacin.
Se ha propuesto que la especificidad de PTGS es debido a la actividad de la RNApolimerasa
o En plantas, este enzima podra utilizar fragmentos cortos de RNAs
especfico como plantillas para la produccin de las molculas
complementarias.
o Estos RNAS podan difundir a travs del citoplasma, reconocer a su
secuencia complementaria y silenciarla.
o Entre los genes ahora sabidos para estar implicado en PTGS estn el gen
RNasaD.
o Recientemente, se ha demostrado que los RNAs de doble cadena (dsRNAs)
son inductores potentes de PTGS.

Papeles biolgicos de PTGS: PTGS y los virus

PTGS se identific por primera vez en plantas transgnicas. Es una barrera natural
desarrollada por las plantas para combatir la transgnesis en naturaleza.
Por tanto, PTGS es una estrategia de defensa de la planta frente a virus pudiendo
tener muy probablemente papeles biolgicos adicionales.
En la ruta que se desarrolla en el ncleo y que se denomina silenciamiento gnico
transcripcional (TGS, de las siglas en ingls Transcriptional Gene Silencing), los
pequeos fragmentos de ARN que se producen guan selectivamente la mutilacin
del ADN y de las histonas, promoviendo la remodelacin de la cromatina.

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Las plantas detectan RNAs virales y, como mecanismo de defensa, inician una
respuesta para degradarlos selectivamente. Varias lneas de evidencia lo sugieren:
o Algunos virus expresan genes supresores del PTGS.
o Mediante respuestas muy similares al PTGS, las plantas se recuperan de
una infeccin viral en muchas ocasiones.
o Mutantes de arabidopsis en donde est interferido el PTGS en la planta,
son hipersusceptibles a la infeccion con algunos virus
o El RNA de doble cadena es un potente inductor de PTGS la mayor parte de
los virus de plantas son virus RNA que se replican con un intermediario de
RNA de doble cadena
La habilidad de la seal PTGS de viajar en la planta a cortas (clula a clula) y
largas distancias (hoja a hoja), es un importante sistema de proteccin para evitar
el avance del virus en clulas no infectadas

Las conclusiones y el futuro prospecta

o
o
o

Dado que PTGS parece ser una estrategia comn en las plantas para el control de virus,
los virus tienen estrategias para contrarrestar esta defensa.
La estrategia que un virus utiliza combatir la respuesta de PTGS afectar a su utilidad
como vector para transformacin de plantas.
Algunas de las estrategias del virus incluyen:
Evitar la deteccin evitando la activacin de PTGS
Proteger secuencias de reconocimiento en el virus que desencadenen la seal
PTGS en plantas
Expresar genes que interfieren en los estados intermedios de sealizacin de
PTGS, para evitar que se produzca ese mecanismo protector en cadena

5. USO DE RNAs SATLITES.

o

o
o

Se ha observado que algunas secuencias cortas de RNA pueden mejorar los

sntomas de la enfermedad causadas por virus de RNA.
Son secuencias de pequeo tamao que se replican y encapsulan
normalmente,
que no tienen homologa con el genoma principal
y que no se requieren para la propagacin ni replicacin del virus.
Son los denominados RNAs satlites.
Su replicacin y transmisin dependen de factores codificados por el genoma
vrico. Pueden conferir algn tipo de ventaja selectiva porque no se pierden ni
durante la proliferacin ni por seccin natural. La estrategia de proteccin
gentica consiste en introducir copias en DNA del vector RNA satlite.
Parecen ser capaces de inhibir la aparicin de sntomas.

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En uno de los experimentos que demuestran lo anteriormente dicho

transformaron plantas de tabaco con RNA satlite de CMV (virus del mosaico
del pepino) bajo el control del promotor 35S rRNA del CaMV, usando el sistema
de Agrobacterium.
Tanto las plantas transgnicas como las de control desarrollaron lesiones
clorticas en las hojas en las que se produjo la infeccin.
Sin embargo, las plantas control desarrollaron sntomas de mosaico en
todas las hojas invadidas sistmicamente,
mientras que las transgnicas muestran los sntomas en las 2 o 3 hojas
invadidas pero no sistemicamente. En las posteriores no se producen
sntomas.

6. GEMINIVIRUS (No lo ha explicado)

o
o

o
o

Desde que los virus DNA fueron caracterizados en plantas ha habido un inters
cada vez mayor en su potencial como vectores.
Los Geminivirus son particularmente candidatos atractivos porque,
colectivamente, infectan una amplia gama de plantas, incluyendo las
monocotiledneas y dicotiledneas.
Sus genomas tiene un tamao de 2.7-3.0 Kb. Son virus de DNA circular,
pequeos y de cadena simple.
Los miembros pueden ser divididos en dos subgrupos en base de la organizacin
del genoma.
Los vires africanos del mosaico de la mandioca (ACMV)
y el virus de oro del mosaico del tomate (TGMV) tienen genomas
bipartidos (DNAs A y B) y es tpico de la mayora de dicotiledneas
infectadas.

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