Qumica Biolgica Patolgica

ENZIMOPATIAS
ERITROCITARIAS
I-Deficiencia G6PD
II- Def. Piruvato Quinasa

Tema:3 (Bolilla3)

Dra. Silvia Varas

qbpatologica.unsl@gmail.com

Programa QBP
TEMA 3: Alteraciones en el metabolismo
de hemoglobina: Hemoglobinas
estructurales y Talasemias,
Consecuencias clnicas y metablicas,
diagnsticobioqumico y molecular.
Mecanismo molecular del defecto
gentico.
Enzimopatas eritrocitarias: deficiencia de
piruvatoquinasa y glucosa 6-fosfato
deshidrogenasa.

Deficiencia de
Glucosa 6 P-deshidrogenasa

Historia
Habas (Vicia faba)

1- Teora Txica
Pitgoras (582-507 a. C.)

Historia
2- teora alrgica asociado al
consumo de las habas, en un
principio no se haba asociado a una
enfermedad heredable.
3-Una tercera etapa fue el
reconocimiento de una anemia
hemoltica causado por drogas.

Historia
La primaquina es una droga usada
para el tratamiento de la malaria.
Se acuo el termino de primaquina
sensible a los eritrocitos de los
individuos con esta deficiencia

Gen G-6PD
El estadio final del descubrimiento por
Carson y col. (1956) quien demostraron
que el defecto metablico primario en
sujetos susceptibles a la primaquina esta
asociada a una baja actividad de la G6PD
en los eritrocitos.
Hacia 1958, Gross et al., por un lado y
Szeinberg et al. por otro, determinaron
que la deficiencia enzimtica tena una
base hereditaria y sugirieron que estaba
ligada al sexo.

G6PD
En los eritrocitos se encuentra en sus formas dimrica y tetramrica y
las dos formas estan en un equilibrio dependiente de pH, con iguales
proporciones a pH neutro
La actividad cataltica slo se inicia cuando se establece una asociacin en
estado de equilibrio entre las formas dimrica y tetramrica. Tal
asociacin requiere de la presencia de NADP.
La disminucin del pH provoca un cambio hacia la forma tetramrica

Figura N2: Un dmero de glucosa-6-fosfato deshidrogenada humano. Subunidades A y B son de color rojo y azul. Las molculas estructurales de NADP+ se
dibujan en un modelo y es de color azul oscuro.

Ruta de las Pentosas Fosfato

de Oxidacin

OxiHb (6HS)

Anin Superoxido

NADH
NAD+

MetaHb (6HS) +

Formacin Cuerpos Heinz

-

O2

Superxido
dismutasa

Hb sin hem
Hemicromo 1 (Reversible)

glutatin peroxidasa
GSSG: glutathione disulfide
(oxidized glutathione)

Hemicromo 2 R(Irreversible)

glutatin reductasa

Cadenas
precipitadas

Precipita (4 HS)
I

Cuerpos de Heinz (unido MP)

Reacciones en los eritrocitos en las que se

produce y es destoxificado de H2O2

H2O2
GSH

Catalasa

Glutation
peroxidasa
GSSG

H2O

LISIS

Mecanismo Molecular de
Lisis
La posible secuencia de eventos seria:
Los hemicromos se unen a banda 3, catalizan la
oxidacin de Banda 3.
Entrecruzamiento oxidativo de Banda 3.
Inmediata asociacin con Syk (Spleen tyrosine
kinase), fosforilacin de treoninas de Banda 3.
La fosforilacin marca la disminucin de afinidad
con la anquirina y liberacin del citoesqueleto
(espectrina/actina).
Aumenta la movilidad lateral en la bicapa
(clustering) de Banda 3.
Formacin de agregados de Banda 3.
Progresiva vesiculacin.
Perdida de la membrana plasmtica y LISIS celular

Deficiencia de G6PD
G6PD deficiencia es un defecto gentico
hereditario ligado-X.
El defecto es causado por mutaciones en el
gen G6PD, que resulta en variantes de
protena con diferentes niveles de actividad
enzimtica,
Esto esta asociado a una amplia rango de
fenotipos clnicos y bioqumicos.
La prevalencia global es estimada en 4,9%,
con alrededor de 330 millones de personas
afectados en todo el mundo.
Tomado de: Pantaleo A, Ferru E, Carta F, Mannu F, Simula LF, et al.
(2011) Irreversible AE1 Tyrosine Phosphorylation Leads to Membrane
Vesiculation in G6PD Deficient Red Cells. PLoS ONE 6(1): e15847

Deficiencia de G6PD: Variantes

De acuerdo con su nivel de actividad, las
variantes de la enzima, se agruparon en
cinco clases, que son:
Clase 1: Deficiencia severa de la enzima con
anemia hemoltica crnica no esferoctica
(CNSHA).
Clase 2: Deficiencia enzimtica severa (1- 10%
actividad residual) asociado con anemia
hemoltica aguda.
Clase 3: Deficiencia enzimtica moderada
(10%- 60%, actividad residual).
Clase 4: Actividad Normal (60%-150%).
Clase 5: Actividad enzimtica por encima de lo
normal (>150%).

1-Anemia Hemoltica inducida por drogas

Manifestaciones Clnicas:

Son asintomtico hasta la administracin

de un frmaco.

1-Anemia Hemolitica inducida por

drogas
2-Anemia Hemolitica inducida por
infeccin
3-Favismo
4-

Bilirrubina Neonatal

1-Anemia Hemoltica inducida por drogas

Cuando ingieren drogas o qumicos que
desencadenan la hemlisis masiva
intravascular
El paciente desarrolla fiebre, orina de color
negro(Hemoglobinuria), ictericia y anemia
La necrosis tubular aguda puede complicar el
episodio hemoltico severo
En algunos pacientes, la coagulacin
intravascular diseminada (CID), puede ser una
complicacin

1-Anemia Hemoltica inducida por infeccin

Virus Hepatitis A y B, citomegalovirus,
pneumonia, y fiebre tifoidea son causas
comunes
Una teora es que la generacin de H2O2
por los PMN neutrfilos puede provocar una
disminucin en la cantidad de glutatin
reducido
el estrs oxidativo, por lo que disminuye la
capacidad protectora de la clula.
La necrosis tubular aguda puede complicar el
episodio hemoltico severo
En algunos pacientes, la coagulacin
intravascular diseminada (CID), puede ser una
complicacin

1 y 2-Anemia Hemoltica:
CONSECUENCIAS
Fatiga
Dolor de Espalda
Anemia
Ictericia
Bilirrubina No Conjugada y
Lactato Deshidrogenasa,
Y Reticulocitosis son los marcadores
del desorden.

4-

Bilirrubina Neonatal

3-Favismo
Consumo de habas frescas
Las sustancias txicas asociadas son Divicina,
isouramil, y convicina.
Manifiesta 24 hs luego de la ingesta
Hemoglobinuria es mas severa que la
causada por las crisis hemolticas producidas
por drogas o infeccin (con Bilirrubina baja).
Anemia es generalmente aguda y severa,
genera falla renal aguda debido a isquemia o
a la precipitacin de hemoglobina

Bilirrubina Neonatal
Bilirrubina Libre/ Bilirrubina Total. 100 = 80%

Cerca de 1/3 de los neonatos varones

nacidos con ictericia neonatal tienen
deficiencia de G6PD
La ictericia neonatal puede ser subclnica
o llevar al kernicterus, que consiste en
dao cerebral y de los nervios auditivos
por niveles elevados de bilirrubinemia
neonatal no conjugada, y puede llevar a
discapacidad intelectual, parlisis
cerebral, sordera y muerte.

4-

Bilirrubina Neonatal

Hacer estudios para Def. G6PD: A los neonatos (14d) que desarrollan hiperbilirrubinemia
(bilirrubina No Conjugada o Libre (indirecta)
concentraciones mayores que 8,8mg/dl [150M/L])
Bilirrubina Indirecta >95%de la Total dentro de
las primera 24 h de vida, o en aquellos con
antecedentes familiares de hermanos con ictericia

Control Normal

CARACTERSTICAS DE
LABORATORIO
Anemia y reticulocitosis
Cuerpos de Heinz
La presencia de clulas crenadas o
equinocitos

Deficiencia de G6PD

El Test de cuerpos de Heinz para la sensibilidad de la primaquina

(Deficiencia de G6PD).
Las clulas (derecha) son de un donante sensible (G6PD-deficiencia), las

Una tincin histoqumica indirecta de los eritrocitos de un paciente

heterocigoto para la deficiencia de G6PD que sufra de malaria adquirida de
forma natural. Las clulas ms pigmentadas son aquellos que
contienen actividad normales G6PD. Ellos contienen el mayor porcentaje
de parsitos de la malaria, como se muestra por las flechas

El diagnstico definitivo
Medir la actividad enzimtica de G6PD
en eritrocitos, por mtodos
cuantitativos con anlisis espectrofotomtrico de la tasa de produccin
de NADPH a partir de NADP+ a 340nm

Deficiencia de Piruvato
quinasa

Deficiencia de PQ
PK deficiencia (OMIM 266200) es la
causa hereditaria ms comn de anemia
hemoltica no esferoctica (HNSHA)
La enfermedad se hereda de
forma autosmica recesiva
Muestra una distribucin en todo el mundo.
La prevalencia estimada es de 51 casos por
milln (es decir, 1:20.000) en la poblacin
blanca.

Piruvato Quinasa
Deficiencia
La mutacin 1529G A es la mas
comn en USA y en centro y norte de
Europa;
La mutacin 1456C T es la que
prevalece en el sudeste de Europa;
Y la mutacin 1468C T es la mas
comn en Asia.

Caractersticas Clnicas
Anemia hemoltica crnica variando en severidad
desde asintomtica y totalmente compensada a casos
con requerimientos de trasfusiones a lo largo de la
vida.
Grados variables de ictericia suave a moderada
esplenomegalia
Elevadas concentraciones de 2,3-DPG
Otros efectos clnicos incluyen retraso del crecimiento,
kernicterus, hidropesa fetal, ulceras crnicas en las
piernas, pancreatitis aguda secundaria a enfermedad
del tracto biliar, sobrecarga de hierro, absceso
esplnico, compresin del cordn espinal por tejido
hematopoytico extramedular y flebitis migratoria con
trombosis arterial esta son raras complicaciones.

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Hallazgos Hematolgicos

Los bajos niveles de hemoglobina pueden ser tolerados debido a

una disminucin de la afinidad del oxigeno inducido por elevadas
concentraciones de 2,3-DPG, caracterstica de deficiencia de PK

Equinocitos
En pacientes con esplenectoma se pueden
observar siderocitos, clulas target, y
cuerpos de Howell-Jolly
La formacin de cuerpos de Heinz incubados
puede estar incrementada.
Al ser una anemia hemoltica, se observa una
disminucin en la concentracin de
haptoglobina e hiperbilirrubinemia indirecta e
incremento en la
excrecin de
urobilingeno fecal.
Tincin de clulas con Azul dePrusia

Diagnstico

Equinocitos (clula crenada)

Disminucin de la actividad de PK en
los eritrocitos.
Los pacientes homocigotas para PK
deficiencia la actividad es de un 525% de la observada en un
eritrocito normal y
de un 40-60 % en portadores
heterocigotos.

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Bioqumica y Biologa Molecular:

Isoenzimas Naturales
Las isoenzimas relacionadas a un
tejido son generalmente
homotetrmeros de subunidades de
50 a 60 kDa, productos de genes
localizados sobre el cromosoma 1 y
15.

PK-M2: determinado en el locus 15q22, puede ser considerado

la isoenzima natural prototipo, es la forma presente en varios
tejidos durante la vida fetal temprana. Pero PK-M2 persiste
como la forma principal en leucocitos, plaquetas, pulmn, rin,
bazo, tejido adiposo y como un componente menor en hgado.
PK-M1: es un producto del mismo locus gentico obtenido por splicing
alternativo y es la forma predominante en msculo estriado maduro y
cerebro. Es la nica isoenzima que no esta sometida a modulacin por
sustrato o cofactor.

PK-L: es la isoenzima natural predominante en hepatocitos esta

codificada por un gen en el cromosoma 1q21. Es un homotetrmero de
subunidades L, cada uno constituido por 543 aminocidos.
PK-R: es la tercera isoenzima natural, es nica en los eritrocitos
maduros. Esta bajo control del mismo locus de PK-L, pero es un
producto de transcripcin distinto con un extremo 5 distinto, producto
de un promotor especifico de tejido

Terapia:
El tratamiento ser sintomtico:
Transfusiones de eritrocitos cuando
los niveles de Hemoglobina han
descendido demasiado.
Esplecnotoma en nios con severa
anemia, con ello incrementa 1-3 g/dl
los niveles d hemoglobina
reduciendo los requerimientos de
trasfusiones

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Bibliografa general:
Alguna pregunta?

LEHNINGER ALBERT L., COX MICHAEL M., NELSON DAVID L.

Principios de Bioqumica. Editorial OMEGA
4 Edicin. 2006.
Diapositivas en Power Point (formato ppt) (Manual para docentes)
LEHNINGER ALBERT L., COX MICHAEL M., NELSON DAVID L.
Principios de Bioqumica
Web: http://bcs.whfreeman.com/lehninger/
The Journal of Biological Chemistry: Classic Articles
Web: www.jbc.org
VOET DONALD, VOET JUDITH G.
Bioqumica
Editorial MDICA PANAMERICANA.
3 Edicin, en Espaol. 2006
WATSON, BAKER, BELL, GANN, LEVINE, LOSICK
Biologa Molecular del Gen
Editorial MDICA PANAMERICANA. 5 Edicin, en Espaol. 2006

STRYER LUBERT, BERG JEREMY M., TYMOCZKO JOHN L.

Bioqumica
Editorial REVERTE. Edicin 5 Edicin, en Espaol. 2003

MATHEWS CHRISTOPHER K., AHERN KEVIN G., VAN HOLDE K. E.

Bioqumica Editorial PEARSON EDUCACION. 3 Edicin en Espaol. 2003

Diapositivas (formato ppt), Problemas (Manual para docentes) y Casos Clnicos de

Aplicacin
VOET DONALD, VOET JUDITH G. and PRATT CHARLOTTE W.
Fundamentals of Biochemistry
Second Edition.
Copyright 2006 by John Wiley & Sons, Inc
Web: www. medicapanamericana.com/voet/

Bibliografa especifica:
Charles R. Scriver, Arthur L. Beaudet, William
S. Sly and David Valle: THE METABOLIC AND
MOLECULAR BASES OF INHERITED DISEASE.
Volume I,II and III. Seventh Edition.Mc
Graw-Hill Editors
Trabajos publicados en revistas de la
especialidad.
BLOG:

http://qbpatologica.wordpress.com/

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