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DIFUSIN EN PLACAS DE AGAR.
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1. OBJETIVO
Confirmar las cepas de referencia primarias que van a ser preparadas para Control de Calidad de
susceptibilidad a antimicrobianos, por mtodo de difusin.
2. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
2.1. MATERIALES

Asa para siembra.

Mechero.
Trulas de algodn.
Etiquetas.
Estndar Mac Farland 0,5.
Pie de metro.
Pinzas.

2.2. REACTIVOS
Cepa ATCC para estudio susceptibilidad
Tubos con 5 mL de Suero fisiolgico al 0,9%.
Sensidiscos respectivos para cada cepa.
Placas de agar Meller Hinton.

Elaborado por

Revisado por

Aprobado por

TM. Mara Soledad Prat.

Profesional Seccin Bacteriologa

TM Pedro Alarcn
Encargado Calidad
Seccin Bacteriologa

TM Aurora Maldonado
Jefe
Seccin Bacteriologa.

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2.3. EQUIPOS

Estufa de cultivo a 35C.

Refrigerador 2-8C.
Congelador -20C.
Agitador de tubos Vortex.
Turbidmetro.
Lmpara con fondo oscuro

3. DESARROLLO
3.1.Debe regirse por la metodologa indicada por CLSI para el grupo bacteriano
correspondiente.
3.1.1. Cultivo bacteriano puro con incubacin de 18 a 24 horas de la cepa ATCC.
3.1.2. Recoger 3-4 colonias con trula o asa, en tubo estril con solucin salina 0,9 %.
3.1.3. Estandarizar 0,5 Mac Farland. No esperar ms de 10 minutos.
3.1.4. Las placas de Meller Hinton que se usaran para la siembra deben estar secas, para lo cual
se recomienda colocar en la estufa previa la siembra.
3.1.5. Sembrar las placas de agar Meller Hinton en tres direcciones.
3.1.6. Dejar secar a temperatura ambiente alrededor 10 minutos.
3.1.7. Aplicar los sensidiscos seleccionados para el grupo bacteriano. Los sensidiscos deben
conservarse a menos 20C y dejar a temperatura ambiente, una media hora antes de
realizar la prueba.
3.1.8. Esperar alrededor de 10 minutos, invertir las placas e incubar por 18 24 horas a 35C.
3.1.9. Leer mm de halo de inhibicin con regla, un pie de metro con una lmpara con luz
reflejada y fondo oscuro en algunos casos luz transmitida.
3.1.10. Registrar los resultados.
3.1.11. Interpretar rango aceptabilidad para cada uno de los antimicrobianos probados con la cepa
ATCC en tabla especfica CLSI.
3.1.12. Revisar trazabilidad del material de referencia de acuerdo a lo indicado en el certificado y
ficha tcnica de cada una de las cepas.
3.2.Respetar tiempos de incubacin, temperatura y atmsfera de incubacin para cada
grupo bacteriano de acuerdo a CLSI.
3.3.En caso de resultado no concordante con lo indicado en el certificado o ficha tcnica
avisar al encargado del proyecto para reponer la cepa.

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3.4.Resultados No conformidad deben registrarse y determinar causas del error.

3.5.Determinar y registrar medidas correctivas y preventivas.
4. REGISTROS
Identificacin
del registro

Almacenamiento

Proteccin

Recuperacin

Tiempo retencin y
disposicin

Certificado original de Seccin

material de Referencia de Bacteriologa
cada cepa

Encargado Seccin 5 aos y se destruye.

Acceso
Bacteriologa.
restringido,
slo personal
autorizado

Formulario de estudio de la Seccin

cepa.
Bacteriologa

Acceso
Encargado Seccin 5 aos y se destruye.
restringido,
Bacteriologa
slo personal
autorizado
Encargado Seccin 5 aos y se destruye.
Acceso
Bacteriologa
restringido,
slo personal
autorizado
Encargado Seccin 5 aos y se destruye.
Acceso
Bacteriologa
restringido,
slo personal
autorizado

Registro de mantencin de Seccin

cepas
Bacteriologa

Registro mantencin
sensidiscos

de Seccin
Bacteriologa

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ANEXO N 1

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ANEXO N 2