ESCUELA POLITCNICA NACIONAL

FACULTAD DE INGENIERA QUMICA Y

AGROINDUSTRIA
DEPARTAMENTO DE CIENCIA DE ALIMENTOS Y
BIOTECNOLOGA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Prctica N 6

PRODUCCIN DE BIOMASA

Grupo N 4 A

Integrantes:

Contern Sisa
Farinango Rommel
Tquerres Mara Elena
Yaguachi Jemima

Fecha de realizacin: 26- 06-2015

Fecha de entrega: 30-07-2015

1. RESUMEN
El presente documento trata sobre produccin de biomasa microbiana (levaduras) con el fin de
obtener la curva de cintica de crecimiento, se trabaj con el medio en un reactor de tanque
agitado, en procesos por lotes (batch). Para el desarrollo de la prctica se prepar previamente
el sustrato tomando en cuenta que la variable a cambiar fue la temperatura, se prepar el inculo
esterilizando tubos de ensayo y erlenmyers en el autoclave, luego se inocul en el erlenmeyer,
dejando los tubos en agitacin (24h), despus se coloc el contenido de los tubos en el
erlenmeyers y se dej en agitacin (24h). Al iniciar con el arranque del fermentador, se control
el crecimiento por contaje directo al microscopio cuyas medidas se realizaron cada hora desde
las 7: 40 am hasta las 17: 40 pm. Al realizar los clculos correspondientes se obtuvo
velocidades especficas de crecimiento, tiempos medios de generacin y nmero de
generaciones. Finalmente se compar los resultados con los grupos del laboratorio, donde el
grupo de mayor produccin de biomasa fue el grupo 4A que trabaj con una variacin en la
temperatura de 5C, el cual favoreci el crecimiento de levaduras. El cambio de los parmetros
especficos de crecimiento de un microorganismo aunque fueran mnimas puede limitar el
crecimiento de los mismos.
2. FUNDAMENTO TERICO
La produccin de biomasa se basa en la cantidad de clulas disponibles para analizar, esta
depende de la concentracin celular final obtenida y del volumen de los cultivos, el crecimiento
microbiano puede decaer por nutrientes que se agotan en el sustrato, o porque este deja de ser
utilizable y a causa de la acumulacin de productos metablicos que pueden estar presentes en
grandes cantidades alcanzando niveles inhibidores. Para la obtencin del crecimiento mximo
se debe explotar las capacidades metablicas del microorganismo, principalmente en relacin a
la fuente de energa, adems de eliminar y neutralizar los productos que se acumulan en el
medio, para grandes producciones resultan medios con composicin qumica definida en donde
se pueda conseguir una utilizacin completa del sustrato. En un desarrollo fermentativo siempre
tiene un desarrollo total fijo para cada microorganismo corresponde a la utilizacin de
determinada cantidad de sustrato (Pars, 2002).
Levaduras (reino Fungi, orden Saccharomycetales) es el nombre comn de un grupo de hongos
unicelulares (eucariotas) del cual es parte la especie Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae)
que crece en forma anaerbica, aunque puede tener fases aerbicas, y produce enzimas capaces
de descomponer diversos sustratos principalmente los azcares denominada fermentacin
alcohlica (Hernndez ,2004).
Fermentacin.- es el proceso mediante el cual los microorganismos producen biomasa o
metabolitos a partir de la utilizacin de sustancias orgnicas en ausencia o presencia de oxigeno
(Hernndez ,2004).
Cintica de Crecimiento Microbiano
El crecimiento de las poblaciones de microorganismos en un sistema de cultivo sin entrada ni
salida de los componentes del sistema, est limitado por el agotamiento de los nutrientes o por
la acumulacin de productos txicos del metabolismo (Varela, Grotiuz. 2008. p. 56).
Cuando se toman muestras a intervalos regulares en diferentes tiempos de incubacin y se
realiza un recuento, la representacin grfica de los datos dar la curva de crecimiento
caracterstica que consta de cuatro fases: latencia, crecimiento, estacionaria y muerte (Tortora,
Funke y Case. 2007. p. 176).

Fase de latencia
Existe un aparente reposo en el que las clulas sintetizan las enzimas necesarias para actividades
metablicas. Cuando se hacen mediciones del nmero de clulas a diferentes tiempos dentro de
esta fase, el valor no cambia sustancialmente. Sin embargo, las clulas trabajan adaptando el
equipo enzimtico al medio de cultivo. Los microorganismos se preparan para hacer uso de los
nutrientes del medio. En general, inculos viejos alargan la fase de latencia (Benintende y
Snchez. 2003. p. 4).
Fase de crecimiento exponencial
Las clulas comienzan a dividirse y entran en un perodo de crecimiento logartmico. La
reproduccin celular alcanza una actividad mxima durante este perodo y su tiempo de
generacin llega a un mnimo constante por lo que la representacin logartmica del crecimiento
durante esta fase exponencial es una lnea recta. Las clulas presentan mayor actividad
metablica y es la preferida en la produccin industrial. En esta fase los microorganismos son
ms sensibles a las condiciones adversas (Tortora, Funke y Case. 2007. p. 177).
Fase estacionaria
La velocidad de crecimiento comenzar a disminuir hasta hacerse nula cuando alcance la ya que
los cambios en la composicin y concentracin de nutrientes entre el cultivo del inculo y el
medio fresco pueden desencadenar el control y la regulacin de la actividad enzimtica. Esta
fase se presenta por agotamiento del suministro de algn nutriente esencial o por acumulacin
de productos metablicos que sean txicos. Tambin puede ser por la disminucin de la
oxigenacin o cambios en las condiciones de pH del medio de cultivo (Benintende y Snchez.
2003. p. 4).
Fase de muerte
Finalmente, el nmero de muertes supera el nmero de nuevas clulas formadas; esta fase
contina hasta que la poblacin disminuye a una pequea fraccin de clulas ms resistentes o
hasta que todas sus integrantes mueren (Tortora, Funke y Case. 2007. p. 177).
Parmetros cinticos
Tiempo de duplicacin
Es el tiempo en que tarda una poblacin en duplicar su nmero. Este proceso no alcanza la
misma velocidad en todas las especies, por lo que es distinto en cada una, aunque hay factores
estimulantes que pueden influir (Negroni. 2009. p. 47).
Velocidad especfica de crecimiento mxima
Es la velocidad mxima de multiplicacin que puede alcanzar el microorganismo, en las
condiciones en las que est creciendo. Esta velocidad es igual a la velocidad especfica de
crecimiento cuando el microorganismo est en la fase logartmica (Tortora, Funke y Case. 2007.
p. 175).
Nmero de generaciones
Es el aumento neto de las clulas a lo largo del perodo de cultivo, se fundamenta en el hecho de
que cada generacin celular incrementa el nmero de clulas del cultivo en una. Cuando el
nmero de clulas en cada generacin se expresa como potencia de 2, el exponente indica el
nmero de generaciones que se han producido (Benintende, S., 2003).
FUNDAMENTO DE LAS VARIACIONES:
Temperatura
La mayora de microorganismos crecen a de 35C (Koneman. 2008. p.32. ) ; en levaduras y
hongos preferentemente a 30 C, (Garca, P., Fernndez, M. y Paredes, F. 2002. p. 83.) ,
entonces con esta variacin de 5C se podr determinar qu tan influyente es esta variacin.

Aireacin
Se ha aumentado aireacin de 1 a 1.5 vol. aire / vol. medio min ya que la aireacin favorece a la
respiracin y de esta manera se evita el inicio de fermentacin, ya que lo que se busca es la
produccin de biomasa (Hernndez, M. y Sastre, A. 1999. p. 442.).
Agitacin
Se ha incrementado de 300 a 350 r.p.m, debido a que en un ambiente sobresaturado de CO2,
este inhibe en las fases de desarrollo de levaduras, y puede ralentizar notablemente su vitalidad
inicial. Por ello es imprescindible una agitacin adecuada ya que facilita la eliminacin ms
rpida del CO2 (De Rosa, T. 1997.p. 159.).
pH
La medida de la concentracin de iones hidrgeno tiene un marcado efecto en la velocidad de
crecimiento y rendimiento, a esto se debe su importancia en la produccin de biomasa de
levadura de panificacin. Un cambio en el valor de pH del medio puede afectar su composicin
y la naturaleza de la superficie microbiana, la floculacin de la biomasa o su adhesin al vidrio
(Fajardo y Sarmiento. 2007. p. 45)
Composicin del sustrato
La preparacin de medios para el desarrollo de procesos de fermentacin es una etapa
fundamental para asegurar la productividad de los mismos, por lo que es de gran importancia en
la produccin de biomasa de levadura de panificacin. ste requiere ciertos nutrientes y
condiciones ambientales. Algunos elementos son bsicamente necesarios como carbono,
hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y fsforo. El carbono sirve como fuente de energa y como
material constitutivo de la masa celular. El nitrgeno se encuentra en la clula formando parte
esencial de las protenas, aminocidos y cidos nucleicos, el fsforo se encuentra en los cidos
nucleicos, en la lecitina y en diversos compuestos fosforilados que participan activamente en los
procesos de degradacin oxidativa y de intercambio energtico. Para que las fuentes de estos
elementos presentes en el sustrato sean aprovechados por la levadura se requiere que se
encuentren en forma asimilable (Fajardo y Sarmiento. 2007. p. 41).
De las fuentes de carbono y energa que se pueden emplear figuran la glucosa, sacarosa,
fructosa, galactosa, maltosa y suero hidrolizado. El nitrgeno asimilable debe administrarse en
forma de amonaco, urea o sales de amonio, aunque tambin se pueden emplear mezclas de
aminocidos. El fsforo se emplea comnmente en forma de cido fosfrico y el Mg como
sulfato de magnesio, que tambin provee S. Son tambin necesarios el Ca, Fe, Cu y Zn como
elementos menores (Jones. 2003. p. 74).
3. EQUIPOS Y MATERIALES
Equipos

Microfermentador, NEW BRUNSWICK SCIENTIFIC. T, 0 C 100 C, 0-1000 rpm.

Microscopio, OLYMPUS CH-2, 100X

Materiales

Tubos de ensayo

Erlenmeyers, 250 mL
Ansas
Embudos estriles
Termmetro
Agua destilada
Cubre objetos
Portaobjetos
Celda de Neubauer

Reactivos

Azcar
(NH4)2SO4
MgSO4.7H2O
KH2PO4
CuSO4
MnSO4
ZnSO4
NaCl
CoCl2
Antiespumante

4. DESCRIPCIN DEL TRABAJO EXPERIMENTAL

Para la realizacin de la prctica fue necesario desarrollar tres aspectos; la preparacin de
inculo, preparacin del medio de cultivo y la fermentacin, que se describen a continuacin:
Preparacin del inculo

El inculo se prepar en tubos de ensayo y luego se pas a erlenmeyers.

Los tubos de ensayo se llenaron con 10 ml de medio.
Los erlenmeyers se llenaron con 100 ml de medio.
Los tubos de ensayo y los erlenmeyers se esterilizaron en el autoclave.
Se inocul el microorganismo en el erlenmeyer.
Se dej los tubos en agitacin durante 24 horas.
Finalizadas las 24 horas, el contenido de los tubos de ensayo se virti en
los erlenmeyers (tomando las debidas medidas de asepsia).
Se dej los erlenmeyers en agitacin durante 24 horas.

Preparacin del medio de cultivo

El medio de cultivo se prepar de acuerdo a las condiciones establecidas, en el grupo control, se
mantuvo constante el pH a 4, 5 y la composicin del sustrato;

Composicin del sustrato:

Sacarosa 4%
(NH4)2SO4 5 g/L
MgSO4.7H2O 0.7 g/L
KH2PO4 1.5 g/L
NaCl 0.3 g/L
CaCl2 0.4 g/L

Extracto de carne 0.6 g/L

Co (como CoCl2) 1 ppm (5 mL de la solucin ya preparada)
Cu (como CuSO4) 3 ppm (5 mL de la solucin ya preparada)
Mn (como MnSO4) 3 ppm (5 mL de la solucin ya preparada)
Zn (como ZnSO4) 3 ppm (5 mL de la solucin ya preparada).

Para lo cual se us las siguientes cantidades:

Tabla 2.1. Composicin del sustrato
Compuesto
Sacarosa
(NH4)2SO4
MgSO4.7H2O
KH2PO4
NaCl
CaCl2
Extracto de carne
Co (como CoCl2) 1 ppm (5 mL de la solucin ya preparada)
Cu (como CuSO4) 3 ppm (5 mL de la solucin ya preparada)
Mn (como MnSO4) 3 ppm (5 mL de la solucin ya preparada)
Zn (como ZnSO4) 3 ppm (5 mL de la solucin ya preparada).

Masa / Volumen
60 g
7,5 g
1,05 g
2,25 g
0,45 g
0,6 g
0,9 g
6, 25 mL
6, 25 mL
6, 25 mL
6, 25 mL

Fermentacin
Para iniciar el proceso de fermentacin una vez preparado y esterilizado el medio de cultivo, se
procedi a la siembra del inculo a las 7 h 30 del da de prctica.
El control de crecimiento del microorganismo se realiz por contaje directo al microscopio.

Las medidas se realizaron cada hora hasta las 17 h 40. Se tomaron 11 medidas, se
realizaron diluciones 1 en 2 para los casos en los que el contaje fue > 300 ufc.

Variables
Los parmetros que se variaron fueron:

Temperatura:

35C

5. CLCULOS Y RESULTADOS
Recuento total de microorganismos
Tabla 5.1. Contaje de clulas grupo 1A
Hora

Contaje de
microorganismos

Concentracin de
microorganismos

Inculo

Promedio

( clulas /ml )

53.4

53400000

60.4

60400000

72

72000000

64.2

64200000

51

51000000

4.2

72600000

72.6

65400000

65.

47000000

47

27600000

27.6

82800000

3
4
5

6
7
8
9
10

Tabla 5.2. Contaje de clulas grupo 2A

Hora

Contaje de
Concentracin de
microorganismo microorganismos
s

Inculo

Promedio

23.2

28.2

( clulas / ml )

92800000

112800000
3

40.8

44.6

48.2

163200000
178400000

192800000

52.4
205600000

54.2
216800000

46.2
185600000

49.6

10

42.4

198400000
169600000

Tabla 5.3. Contaje de clulas grupo 3A

Hora

Inculo
1

Contaje de
Concentracin de
microorganismo microorganismos
s
Promedio

( clulas / ml )

66,2

265000000

72,8

291000000

77

3080000000

92,4

370000000

102,2

409000000

99

396000000

107

42800000

112,6

450000000

121,8

487000000

91,4

366000000

84,6

338000000

3
4
5

6
7
8
9
10
11

Tabla 5.4. Contaje de clulas grupo 4A

Hora

Contaje de
microorganismos

Concentracin de
microorganismos

Inculo

Promedio

( clulas /ml )

32.8

38200000

41

41000000

59.2

59200000

79

79000000

85.2

85200000

173

173000000

649.6

6496000000

1832

1832000000

1036.2

2070000000

10

860

1720000000

11

912

1820000000

Tabla 5.5. Resultados obtenidos de los grupos A en la obtencin de biomasa

Grupo

1A

Parmetro cintico de crecimiento

Valor

Unidades

Velocidad especfica de crecimiento

0.1494

h1

Tiempo de generacin

4.6395

Nmero de generaciones

Velocidad especfica de crecimiento

0.1154

h1

Tiempo de generacin

6.0006

2A
Nmero de generaciones

Velocidad especfica de crecimiento

Tiempo de generacin

0.1418

h1

4.88

3A
Nmero de generaciones

Velocidad especfica de crecimiento

0.7672

Tiempo de generacin

0.9035

4A
Nmero de generaciones

Curvas de crecimiento

Curva de crecimiento
100000000
80000000
60000000
40000000
20000000
0
0

10

12

Figura 5.1. Curva de crecimiento a pH 4, grupo 1A

Ln (X) vs tiempo
18.2
f(x) = 0.15x + 17.78
R = 0.99

18
Ln (X)

17.8
17.6
0

0.5

1.5

Tiempo (h)

Figura 5.2. Curva Ln(X) vs tiempo, grupo 1A

Figura 5.3. Curva de crecimiento a 28 C, grupo 2A

2.5

Fase de crecimiento

Figura 5.4. Curva Ln(X) vs t grupo 2A

Figura 5.5. Curva de crecimiento sin cambios en los parmetros, grupo 3A (grupo control)

Fase de
crecimiento

Figura 5.6. Curva Ln(X) vs t grupo 3A

Curva de crecimiento de los microorganismos a 35 C

25
20
15
Concentracion de m/o (X) 10
5
0
0

10 12

Tiempo (t)

Figura 5.7 Curva de crecimiento de microorganismos a 35 C, grupo 4A

Tiempo vs Ln(X)
22
f(x) = 0.77x + 15.53
R = 0.94

21
20
Ln(X)

Fase de
crecimiento

19
18
17
16
2

Figura 5.8. Curva Ln(X) vs t, grupo 4A

Curva de crecimiento
2500000000
Grupo 4

2000000000
1500000000
1000000000

Grupo 2

Grupo Control, 3

500000000
Grupo 1
0
0

10

12

Figura 5.9. Curva de crecimiento comparativo de todos los grupos: azul (1A), rojo (2A), Verde
(3A) y morado (4A).
6. DISCUSIN DE RESULTADOS
Al observar los parmetros cinticos de cada grupo descritos en la tabla 5.5 se puede definir que
el grupo que ha realizado un mejor medio de cultivo para el crecimiento de levaduras ha sido el
grupo 4A, esto tambin se puede ligar al momento de realizar el contaje no existi mayor error.
El factor temperatura al aumentar de la estndar pudo ocasionar que este tipo de levadura tenga
un mejor crecimiento al comparar las figuras 5.5 y 5.7 donde se observa una curva homognea
para el caso del grupo 4A a pesar de no ser el grupo control.
En las figuras 5.1, 5.3 y 5.5 se observa un patrn similar que sigue el crecimiento de la levadura
por lo que desde ese punto de vista se estimara que los parmetros como la disminucin del pH

y la temperatura actan radicalmente en el modelo de crecimiento del microorganismo

analizado. Las significativas diferencias obtenidas de las fases de crecimiento exponencial, de
los tres grupos respecto al grupo 4, se justifican debido a que existen parmetros especficos en
los que se favorece el crecimiento de ciertos microorganismos y pequeas variaciones de estos
limitan el crecimiento de los mismos (Jones. 2003. p.75).
De acuerdo con Garca, Quintero y Lpez (2004), las propiedades de fermentacin dependen del
tipo de especie de levadura que se utilice al momento de realizar la fermentacin ya que las
especies S. cerevisiae poseen temperaturas optimas de crecimiento entre los 37 y 40 C y S.
pastorianus tienen temperaturas menores a los 31 C. A partir de esta informacin y para que
sea compatible con la justificacin dada previamente se asume que la especie usada en la
prctica perteneca a la S. cerevisiae por lo que al cambiar el parmetro temperatura a 35 C
lleg al ptimo para aumentar el crecimiento de este tipo de levadura.
Los parmetros de crecimiento; velocidad especfica, tiempo de duplicacin y nmero de
generaciones, se obtuvieron con los datos expresados en las curvas ln(X) vs t , usando adems
los datos de la regresin lineal y la ecuacin de la recta, los ejemplos de clculo de estos se
detallan en el Anexo 1.2, y los resultados obtenidos se expresaron en la Tabla 5.5. , de los

h1 ; td= 4.88 h y n=1,

cuales los valores que present el grupo control fueron: m= 0.1418

y los valores del grupo 4/grupo con mayor produccin de biomasa); m= 0.7672 h

; td=

0.9035h y n=5 y se concluye que el parmetro variado, temperatura, favoreci la produccin

de biomasa, levaduras, ya que el nmero de generaciones super por cuatro al grupo control.
El crecimiento poco favorable que se obtuvo en el grupo 1, con la variacin del pH, se puede
decir que se debi a que este influye en el crecimiento de las levaduras incidiendo en la
cambios en la composicin del sustrato, la floculacin de la biomasa o su adhesin al vidrio y
por tanto se limit el crecimiento (Fajardo y Sarmiento. 2007. p. 45); y el grupo 2, que en este
caso la variacin que usaron fue de la T 28 C, se puede concluir que la temperatura no se
encontr dentro del rango favorable para el crecimiento de levaduras de 30 a 35 C (Koneman.
2008. p.32).
En la Figura 5.9 se observa las curvas de crecimiento y se identifica como la de mayor
produccin de biomas correspondiente al grupo 4 y la de menor produccin de biomasa al grupo
1. El grupo control se encontr en segundo lugar en cuanto a produccin de biomasa.
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Conclusiones
Se determin los factores de cinticos de crecimiento para cada grupo A que realiz la prctica
de produccin de biomasa y se obtuvo para el grupo control: m= 0.1418
1

n=1 y para el grupo de mayor produccin de biomasa m= 0.7672 h

; td= 4.88 h y

; td= 0.9035h y n=5.

Se observ que la variacin de la temperatura a 35 C en la produccin de biomasa del grupo

4A, fue ptima y este present mayor produccin de la misma.

Se determin que el grupo 1 fue el de menor produccin de biomasa.

Se concluy que cambios mnimos en los parmetros especficos de crecimiento de un
microorganismo limitan el crecimiento del mismo.

Recomendaciones
El contaje de microorganismos se debe realizar de tal manera que este no sea subjetivo, por lo
que una forma de hacerlo podra ser con la ayuda de una fotografa obtenida en el microscopio.
8. NOMENCLATURA
(NH4)2 SO4 : Sulfato de amonio
MgSO4.7H2O : Sulfato de magnesio heptahidratado
KH2PO4 : Fosfato de potasio monobsico
CuSO4 : Sulfato de cobre II
MnSO4 : Sulfato de manganeso
ZnSO4 : Sulfato de cinc
NaCl : Cloruro de sodio
CoCl2 : Cloruro de cobalto II
Antiespumante: Sustancia que ayuda a reducir la espuma, por accin de protenas,
gases, o materiales nitrogenados que interfieren en actividades industriales.
td: Tiempo de generacin o duplicacin, es el tiempo necesario para que cierta
concentracin de microorganismos inicial, se duplique.
m: Velocidad especfica de crecimiento.
n: Nmero de generaciones, nmero de veces que la clula se ha duplicado en un
tiempo determinado.
9. BIBLIOGRAFIA

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http://www.fca.uner.edu.ar/academicas/deptos/catedras/microbiologia/unidad_3_crecimi
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De Rosa, T. (1997). Tecnologa de los vinos blancos. (1ra. ed.). Madrid Espaa: Editorial
Mundi-Prensa.
Fajardo, E. y Sarmiento, S. (2007). Evaluacin de la melaza de caa como sustrato para la
produccin
de
Saccharomyces
cerevisiae.
Recuperado
de:
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis26.pdf (Julio, 2015).

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Limusa.
Garca, P., Fernndez, M. y Paredes, F. (2002). Microbiologa Clnica Prctica. (2da.ed.).
Cdiz, Espaa: Imprenta Repeto- Cdiz.
Hernndez, M. y Sastre, A. (1999). Tratado de Nutricin. (1ra. ed.). Madrid, Espaa: Ediociones
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http://www.science.oas.org/Simbio/mbio_ind/cap8_mi.pdf (Julio,2015).

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Negroni, M. (2009). Microbiologa estomatolgica: fundamentos y gua prctica. (2da.ed.).
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Pars R., Farrs A. (2002) Bioqumica de los Microrganismos. Barcelona- Espaa. Editorial
Revert.
Tortora, G., Funke, B. y Case, C. (2007). Introduccin a la Microbiologa. (9na.ed.). Buenos
Aires, Argentina: Editorial Mdica Panamericana.
Varela, G y Grotiuz, G. (2008). Temas de Bacteriologa y Virologa Mdica. Recuperado de:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/FisiologiayMetabolismoBacteriano.pdf
(Julio,
2015).

10. ANEXOS

ANEXO I
EJEMPLO DE CLCULO PARA LA PRODUCCIN DE BIOMASA
Tabla A1. Datos experimentales del contaje de microorganismos del grupo 4A
Temperatura
C

Hora

Contaje de
microorganismos

Dilucin

Inculo Promedio

Concentracin de
microorganismos

( clulas /ml )
7

35

32.8

3.82 10

35

41

4.1 107

35

59.2

5.92 107

35

79

7.9 107

35

85.2

8.52 10

35

173

1.73 108

35

649.6

6.49 108

35

1832

1.83 10

35

1036.2

1 en 2

2.07 109

35

10

860

1 en 2

1.72 109

35

11

912

1 en 2

1.82 10

Concentracin de microorganismos sin dilucin.

[ m/o ] =

promedio del contaje

volumen de lacelda

Volumen de la celda: 0.001

[ m/o ] =

32.8 clulas
=3.82 107 ( clulas /ml )
3
1 cm
0.001 mm3 3
3
10 mm

Concentracin de microorganismos con dilucin.

[ m/o ] =

[ m/o ] =

mm3

promedio delcontaje
volumen de lacelda factor de dilucin
1036.2 clulas
9
=2.07 10 ( clulas / ml )
3
1 cm
3
0.001 mm 3
0.5
3
10 mm

Curva de crecimiento de los microorganismos.

Tabla A2. Tiempo, concentracin y clasificacin por fases de los datos experimentales
Tiempo
(h)

Concentracin de m/o
(clulas/ml)

Etapa de
crecimiento

3.82 107

Fase de adaptacin

4.1 10

Fase de adaptacin

17.529

5.92 107

Fase de adaptacin

17.896

7.9 107

18.184

8.52 10

1.73 10

6.49 108

1.83 10

2.07 109

1.72 109

Fase de
crecimiento
Fase de
crecimiento
Fase de
crecimiento
Fase de
crecimiento
Fase de
crecimiento
Fase de
crecimiento
Fase estacionaria

ln de la concentracin
de m/o

18.26
18.968
20.29
21.327
21.45

1.82 109

10

Fase estacionaria

Curva de crecimiento de los microorganismos a 35 C

25
20
15
Concentracion de m/o (X) 10
5
0
0

10 12

Teimpo (t)

Figura A1. Curva de crecimiento de microorganismos a 35 C

Tiempo vs Ln(X)
22
f(x) = 0.77x + 15.53
R = 0.94

21
20
Ln(X)

19
18
17
16
2

Figura A2. Curva Ln(X) vs t, grupo 4A

4

Parmetros cinticos.

Velocidad especifica de crecimiento

ln ( X ) =U m t+ ln ( X 0 )
y=mx +b

(U m)

A partir de los datos de la Tabla

m=0.7672
b=15.528
r=0.94

U m=m=0.7672/h
2

Tiempo medio de generacin

t =

ln (2)
Um

t =

ln (2)
=0.9035 h
0.7672 /h

Nmero de generaciones.

x
)
x0
n=
ln ( 2)
ln (

2.07 109
ln
7.9 107
n=
=4.71 5
ln ( 2)