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FORMATO DE GUAS DE LABORATORIO

CODIGO:
FO-M-DC-05-01

VERSION:
2

FECHA:
2011-02-01

PAGINA:

UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS
PROGRAMA DE QUMICA
GUAS DE LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA I
PRCTICA 5. TCNICAS CROMATOGRFICAS
INTRODUCCIN
La cromatografa es una tcnica que permite separar los componentes de una mezcla. Esta separacin se
logra utilizando un sistema bifsico: fase estacionaria donde se retienen los compuestos a separar y fase
mvil que desplaza de forma diferencial los compuestos a travs de la fase estacionara.
Dependiendo de la naturaleza de las fases, se pueden distinguir distintos tipos de cromatografa:
- Cromatografa slido-lquido: la fase estacionaria es un slido y la mvil un lquido.
- Cromatografa lquido-lquido: ambas fases son lquidos y en la estacionaria el lquido se ancla a un
soporte slido.
-Cromatografa lquido-gas: la fase estacionaria es un lquido no voltil sobre soporte slido y la fase mvil
un gas.
-Cromatografa slido-gas: la fase estacionaria es un slido y la mvil un gas.
La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaria y la fase mvil atraviesa el sistema desplazando
los componentes de la mezcla a distintas velocidades que dependen de la afinidad de los mismos por cada
una de las fases. Se denomina elucin a la migracin de los componentes de la mezcla a lo largo de la fase
estacionaria impulsados por la fase mvil.
Concepto de Rf. Distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin / distancia que recorre el
disolvente hasta el frente del eluyente. El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la
muestra (tipo de adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturacin, etc.). Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma
placa.
En el caso de la CROMATOGRAFA EN CAPA DELAGADA O FINA se utiliza una placa recubierta con fase
estacionaria manteniendo un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por
capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta produciendo manchas de los
componentes
OBJETIVOS
Reconocer las tcnica de cromatografa en capa delgada (CCD) y Cromatografa en Columna (CC), como
tcnicas de separacin e identificacin, sus caractersticas y los factores que en ella intervienen.
CONSULTA PREVIA

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1. Clasifique los tipos de cromatografa en funcin de:


a) En funcin de la interaccin que se establece entre los componentes de la mezcla y las fases
mvil y estacionaria
B) En funcin del tipo de soporte empleado para la fase estacionaria.
2. Qu es una fase mvil y una fase estacionaria.
3. Defina el concepto de polaridad. Clasifique los solventes ms empleados segn la polaridad.
MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES
1 Cromatofolio de silica gel
3 Capilares
3 Cmaras de elucin
3 Pipeta de 5 ml
Pinzas
Columna o bureta
Soporte Universal
2 Pinzas para soporte U con nuez
4 Erlenmeyer de 50 ml
1 Beacker de 50 ml
Embudo de vidrio
Probeta de 100 ml
Placas de tincin
Pipeteador
Plancha de calentamiento
Lmpara UV
Cmara de yodo

REACTIVOS
Acetato de etilo (10 ml/grupo)
Hexano (10 ml/grupo)
Metanol o etanol (200ml/grupo)
Ortotoluidina (50 mg)
Acetofenona (50 mg)
Slica (5 g/grupo)
Algodn
Violeta de cristal (2 mg/grupo)
Naranja de metilo (2 mg/grupo)
Trietilamina (5 ml/grupo)

METODOLOGA
1. Cromatografa en capa delgada (CCD), polaridad de las sustancias.
Es un experimento comparativo en el que se desea saber cul sustancia es ms polar y cul menos polar.
Se dispone de tres disoluciones, previamente preparadas, orto-toluidina (T), acetofenona (A) y una mezcla de
ambos (M). Se introduce un tubo capilar en la disolucin B, tomando una pequea cantidad de la misma y por
su extremo se coloca en una placa de cromatografa, con gel de slice como adsorbente, una mancha a unos
7 mm del borde izquierdo de la placa y a 1 cm del borde inferior. A la misma altura y a unos 7 mm del borde
derecho se coloca con otro capilar una mancha de la solucin T y en la parte central de la placa una mancha
de la solucin M de nuevo con un capilar diferente (Cuidado, no confundir los capilares de cada disolucin!)

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Se dejan secar y se introducen en el interior de una cubeta de cromatografa conteniendo 5 ml de (1: acetato
de etilo, 2: hexano y 3: mezcla de acetato de etilo hexano en proporcin 2:8), de modo que el disolvente no
toque la zona en la que se encuentran las manchas.
Se tapa la cubeta y cuando el disolvente ha ascendido a 1 cm del borde superior se saca la placa y se marca
el nivel del disolvente en un extremo de la misma. Se deja secar y se revela la placa en una lmpara de luz
ultravioleta, localizando la posicin de cada mancha. Se miden las distancias recorridas por el frente del
disolvente y para cada mancha, y se calcula el valor de Rf.

2. Separacin por cromatografa en columna de una mezcla de violeta cristal y naranja de metilo

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Se sujeta la columna, en posicin vertical, a un soporte utilizando dos pinzas: una cerca de la llave y otra en la
parte superior y se introduce un pequeo copo de algodn en su extremo inferior. Se coloca un erlenmeyer
debajo de la columna y un embudo en la parte superior (Figura 1).
En un vaso de precipitados se prepara una suspensin con 5g de gel de slice (adsorbente) y aprox. 50mL de
etanol (eluyente).
Se aade un poco de etanol a la columna y luego se vierte la suspensin previamente preparada en su
interior. Se abre la llave, se golpean suavemente las paredes de la columna mientras dura la sedimentacin
del adsorbente para que este se compacte adecuadamente procurando que no se formen burbujas y evitando
que se seque la gel de slice.
El etanol que se va recogiendo de la columna se incorpora al vaso donde se prepar la suspensin
adsorbente-eluyente para as recuperar la gel de slice que hubiera podido quedar y se transvasa todo de
nuevo a la columna.

Figura 1. Esquema de montaje de una Cromatografa en Columna


Se deja que el eluyente baje hasta una altura sobre el adsorbente de 1-2 mm, se cierra la llave de la columna
se quita el embudo y con una pipeta se aade cuidadosamente 1 mL de una solucin preparada de violeta
cristal y naranja de metilo. Se abre la llave de la columna para que esta disolucin quede inmersa en la gel de
slice y se vuelve a cerrar cuando la disolucin de colorantes alcanza una altura de 1 mm sobre el adsorbente.
Se aaden con una pipeta 5mL de etanol con mucho cuidado y muy lentamente para no distorsionar el
frente de la columna. A continuacin, se abre la llave y se contina aadiendo etanol para desarrollar la
columna hasta que se recoja el primer colorante. Despus se utiliza una mezcla de disolventes:
etanol/trietilamina en proporcin 9:1 como eluyente para el segundo colorante ( Figura 2)

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Figura 21.- Esquema de separacin de dos componentes por Cromatografa en Columna


RECOMENDACIONES
1) Para aplicar las soluciones a las cromatoplacas utilice capilares, que previamente deber ser estirados en la
flama del mechero con el fin de que tengan el dimetro adecuado.
2) Precaucin, nunca mire directamente la luz ultravioleta, sta puede causar daos severos al ojo. Una vez
revelada la placa, marque ligeramente con un lpiz el contorno de las manchas para mejor ubicacin de las
mismas.
3) Para mayor claridad de los resultados, incluya en su informe los dibujos de las cromatoplacas de todos los
experimentos de esta prctica. Hgala del mismo tamao de las placas.
CUESTIONARIO
a) En el experimento 1, Cul de las dos sustancias, la ms polar o la menos polar, recorre mayor distancia
en la placa a partir del punto de aplicacin? Por qu?
b) En ese mismo experimento, calcular los valores Rf y contestar cul de las dos sustancias tiene Rf mayor
y cul menor?
c) Qu significa que una sustancia tenga: Rf < 0.5? Rf = 0.5? Rf > 0.5?
d) Por qu la CCD es un criterio parcial y no total de identificacin?

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e) Cul ser el resultado de los siguientes errores en cromatografa en capa fina? - Aplicacin de solucin
muy concentrada. - Utilizar eluyente de alta polaridad. - Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de
cromatografa.
f) Qu es la adsorcin cromatogrfica? Qu diferencia existe entre adsorcin y absorcin?
g) Cmo escogera el disolvente ms adecuada para utilizarlo como eleyunte?
h) Enumere los eluyentes y soportes para cromatografa en columna.
i) Qu factores que influyen en una separacin por cromatografa en columna.
j) A la vista de los resultados obtenidos en la CCF de la p-toluidina y de la acetofenona, indicar
detalladamente cmo se podra separar una mezcla de estos dos compuestos por cromatografa en columna
utilizando gel de slice como adsorbente.

BIBLIOGRAFA
W. CLARK STILL, MICHAEL KAHN, ABHIJIT MITRA. Rapid chromatographic technique for preparative
separations with moderate resolution. J. Org. Chem., 1978, 43 (14), pp 29232925.
HAMMOND C. Experimental Organic Techniques. Freeman & Co. USA, 1999
AULT A. Techniques and Experiments for Organic Chemistry. University Science Books. USA 1998 Pag.113121
ROBERTS R.M. Modern Experimental Organic Chemistry. 3rd. Ed. Holt. Rinehart Winston, N.Y., 1979.
CLEMENT B. Organic Chemistry Laboratory Manual. Texas A&M University, USA,2002 Pag. 143-146
AULT A. Techniques and Experiments for Organic Chemistry. University Science Books. USA 1998 Pag.113121