UNIVERSIDAD DE CRDOBA

Facultad Ciencias De La Salud

Programa Bacteriologa

Universidad de
Crdoba,
comprometida
con el desarrollo
regional

NIT 891080031-3

CURSO: HEMATOLOGA II
Cdigo: 504153
Horas semanales: 5
Componente: Terico Prctico
Ubicacin: VI semestre
Requisitos: 504144
Docente: Yesica Gndara Herrera
GUA N 3
PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES: PRUEBAS CRUZADAS DE
COMPATIBILIDAD (PC), RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES (RAI) Y
AUTOCONTROL (AC)
INTRODUCCIN
Las pruebas pretransfusionales son los procedimientos realizados por los servicios
de transfusin o los bancos de sangre, previos a la transfusin, con el fin de
asegurar la seleccin adecuada de la unidad de sangre o los componentes a
transfundirse. Tienen como propsito evitar que los componentes seleccionados
para la teraputica causen dao en el receptor y cuya sobrevida postransfusional
este dentro de los lmites aceptables. Si esas pruebas se realizan correctamente,
son tiles para confirmar la compatibilidad ABO entre el componente y el receptor
y tienen la posibilidad detectar la mayor parte de los anticuerpos irregulares o
inesperados, clnicamente significativos.
Las pruebas pretransfusionales incluyen:
Verificacin de la hemoclasificacin (determinacin del ABO/Rh) del donante y
receptor.
Prueba cruzadas de compatibilidad.
Rastreo para anticuerpos irregulares en el receptor.
Autocontrol.
NECESIDAD
Adquirir los conocimientos necesarios para certificar y validar la transfusin de
componentes sanguneos, mediante la correcta realizacin de las pruebas pretransfusionales.
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OBJETO DE ESTUDIO
Compatibilidad sangunea Donante/Receptor.
OBJETIVOS
Instructivos
Reconocer la importancia de las pruebas de compatibilidad para garantizar al
mximo la seguridad transfusional.
Interpretar y correlacionar los resultados de las pruebas de compatibilidad.
Proponer soluciones ante resultados incompatibles de las pruebas
pretransfusionales, con el fin de resolver oportunamente la necesidad de
transfusin sangunea.
COMPETENCIAS A ADQUIRIR POR PARTE DE LOS ESTUDIANTES
Interpreta la presencia de aglutinacin/hemlisis en las diferentes fases de las
pruebas cruzadas.
Correlaciona resultados positivos de autocontroles con la clnica del paciente.
Correlaciona resultados positivos en el rastreo de anticuerpos irregulares con
la clnica del paciente.
Certifica la transfusin de componentes sanguneos acorde a la interpretacin
de los resultados compatibles de las pruebas pretransfusionales.
Identifica las limitaciones de las pruebas pretransfusionales en medicina
transfusional.
METODOLOGA
Socializacin de la gua y el prelaboratorio.
Realizacin de pruebas cruzadas, rastreo de anticuerpos irregulares y
autocontrol a muestras de sangre total.
Realizacin e interpretacin del reporte de resultados obtenidos.
Solucin del cuestionario post-laboratorio al finalizar la prctica.
MATERIALES DE LABORATORIO
Papel kraft
Tubos EDTA.
Torniquete
Algodn
Alcohol

Agujas vacutainer
Camisa para agujas vacutainer
Serofuge
Puntas amarillas
Puntas azules

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Pipetas automticas
Tubos de vidrio

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Tapones para tubos de ensayo

Pipetas pasteur
Suero de Coombs
LISS potenciador

Hemoclasificadores: anti-A, anti-B,

anti-D
Bao de mara.
Solucin salina fisiolgica (0.85%)
Lamina
de
vidrio
hemoclasificadora
Palillos

PROCEDIMIENTO
1. DETERMINACIN ABO/Rh
Las unidades de sangre certificadas destinadas para la realizacin de pruebas
pretransfusionales, previamente han sido hemoclasificadas ABO/Rh mediante la
prueba globular y srica, razn por la cual en las pruebas pretransfusionales es
suficiente realizar un rechequeo o verificacin del grupo ABO/Rh del donante,
mediante la determinacin ya sea globular o srica. Por razones de practicidad y
oportunidad este rechequeo de grupo sanguineo en las unidades de sangre podr
ser efectuado mediante la determinacin en lmina de la prueba directa. (Gua No.
6. Hemoclasificacin sistema ABO/RH)
La determinacin del grupo ABO/Rh de los receptores deber ser realizada
mediante la prueba directa y la prueba inversa(Gua No. 6. Hemoclasificacin
sistema ABO/RH)
2. PRUEBAS CRUZADAS DE COMPATIBILIDAD
Fundamento
La prueba cruzada debe demostrar que el suero del receptor y las clulas del
donante son compatibles y por lo tanto estn libres de anticuerpos hemolizantes,
aglutinantes o que recubran el eritrocito. Debe usarse en el procedimiento 3 fases:
a) Fase salina: temperatura ambiente. Deteccin de anticuerpos fros completos.
b) Fase potenciadora: 37C usando potenciadores de las reacciones antgenoanticuerpo (LISS, albumina, entre otros). Deteccin de anticuerpos calientes.
c) Fase de Coombs: empleo de antiglobulina humana o suero de coombs
poliespecfico. Deteccin de anticuerpos calientes dependientes de
antiglobulina.

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Las pruebas cruzadas incluyen la prueba mayor (M), que detecta anticuerpos regional
del
receptor contra antgenos presentes en el glbulo rojo del donante y la prueba
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menor
(m), que detecta anticuerpos del donante contra antgenos del receptor.

Esta ltima no se realiza de rutina, ya que todas las unidades captadas en los
bancos de sangre, son tamizadas para anticuerpos irregulares.
Se realiza pruebas cruzadas para la transfusin de sangre total, glbulos rojos y
granulocitos. Para plasma, plaquetas y crioprecipitados no se realiza prueba
cruzada pero si deben ser ABO/Rh idnticos o compatibles.
Tcnica
Obtener muestra de suero y clulas del receptor y donante.
Lavar las clulas del receptor y del piloto de la unidad de sangre a transfundir.
Suspender al 5%.
Marcar 3 tubos as: M (mayor), m (menor) y Auto (autocontrol).
Al tubo M agregar: 50uL de suspensin 5% de clulas del donante y 100 uL de
suero del receptor.
Al tubo m agregar: 50 uL de suspensin 5% de clulas del receptor y 100 uL de
plasma del donante.
Al tubo Auto agregar: 50uL de suspensin 5% de clulas del receptor y 100 uL
de suero del receptor.
Mezclar y centrifugar en serofuge 30 segundos. Leer y registrar resultados. No
debe aglutinar y se procede al siguiente paso. Si hay aglutinacin deber
volver a realizar clasificacin ABO/Rh de donante y receptor.
Agregar una gota de potenciador (LISS)
Incubar 15 minutos a 37C. centrifugar, leer y registrar resultados.
Lavar cuatro veces con solucin salina a 0.85%. decantar sobrenadante en el
ltimo lavado.
Agregar una gota de suero de coombs, centrifugar 30 segundos, leer y registrar
la presencia o ausencia de aglutinacin o hemolisis.
Los resultados negativos deben ser comprobados con las clulas control de
coombs.
En caso de observarse aglutinacin en las pruebas cruzadas, se debe reclasificar
nuevamente donante y receptor, si no hay variacin, la aglutinacin puede deberse
a otro tipo de incompatibilidad y el receptor deber ser estudiado en un banco de
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sangre competente para realizar las pruebas especializadas y encontrar unidades
de sangre compatibles para el receptor.
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Observaciones. Las pruebas de compatibilidad deben ser realizadas con

muestras de sangre tomadas como mximo 72 horas antes de la transfusin y

debern ser procesadas lo antes posible. Si el paciente se est transfundiendo

durante varios das, se obtendrn muestras frescas cada da para las pruebas de
compatibilidad.
Solo sangre sin anticoagulante debe usarse para las pruebas cruzadas. Muestras
colectadas con anticoagulantes NO sirven para realizar pruebas de compatibilidad,
porque la mayora de los anticoagulantes actan fijando el calcio y este es
necesario para la actuacin de las protenas del sistema de complemento.
Las muestras hemolizadas no debern ser usadas, porque pueden enmascarar
una reaccin de hemlisis que un anticuerpo presente en el receptor pueda
producir.
Las muestras usadas del receptor, as como los pilotos de las unidades, deben
guardarse perfectamente identificados por el trmino de una semana, con el fin de
poder constatar en cualquier momento un posible error.
3. DETECCIN, TAMIZAJE O RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES
(RAI)
En el banco de sangre se realiza de rutina la deteccin de anticuerpos irregulares
o inesperados a todas las unidades de sangre. Este procedimiento permite obviar
la prueba de compatibilidad menor en las pruebas cruzadas. El rastreo de
anticuerpos irregulares permite detectar anticuerpos diferentes a los del grupo
ABO y aunque su frecuencia es baja, puede producirse en individuos expuestos a
estos antgenos como madres multparas y pacientes politransfundidos.
Se efecta colocando a reaccionar suero con clulas detectoras de anticuerpos o
eritrocitos reactivos conseguidas comercialmente, las cuales traen adjunto la
informacin de su perfil antignico y el procedimiento tcnico. Estas clulas son
grupo O Rh D positivo y para garantizar la mayor deteccin de anticuerpos, la
prueba incluye diversas condiciones de reaccin como centrifugacin inmediata,
incubacin a temperatura ambiente y a 37C, y fase de coombs. Cabe anotar que
las reacciones a temperatura ambiente no revisten importancia ya que este tipo de
anticuerpos carecen de significancia clnica.
Tcnica
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Marcar 3 tubos as: I, II y Auto (autocontrol).
Al tubo I agregar: 50uL de clulas detectoras de anticuerpos I y 100 uL de
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suero del receptor.
Al tubo II agregar: 50uL de clulas detectoras de anticuerpos II y 100 uL de
suero del receptor.

Al tubo Auto agregar: 50uL de suspensin 5% de clulas del receptor y 100 uL

de suero del receptor.
Mezclar y centrifugar en serofuge 30 segundos. Leer y registrar resultados.
Agregar una gota de potenciador (LISS)
Incubar 15 minutos a 37C. centrifugar, leer y registrar resultados.
Lavar cuatro veces con solucin salina a 0.85%. decantar sobrenadante en el
ltimo lavado.
Agregar una gota de suero de coombs, centrifugar 30 segundos, leer y registrar
la presencia o ausencia de aglutinacin o hemolisis.
Los resultados negativos deben ser comprobados con las clulas control de
coombs.

Interpretacin De Resultados de RAI

La presencia de aglutinacin ya sea en el tubo I y/o II y autocontrol negativo,
indica la deteccin de un anticuerpo irregular en la muestra de suero estudiada.
Algunos pacientes multitransfundidos desarrollan anticuerpos tipo IgG como anti
D, anti Kell, anti Duffy, lo cual dificulta nuevas transfusiones debido a que no es
fcil encontrar sangre compatibles para ellos, por lo tanto se recomienda identificar
el anticuerpo detectado, con el fin de conseguir unidades que carezcan del
correspondiente antgeno,
En caso de presentarse un autocontrol positivo, se puede pensar en la presencia
de autoanticuerpos o alguna anormalidad srica, las cuales debern ser
correlacionadas con la historia clnica del paciente.
CUADRO 1. Resumen tcnica pruebas cruzadas Mayor/Menor y Rastreo de
Anticuerpos Irregulares (RAI)

SUERO RECEPTOR
GR 5% RECEPTOR
PLASMA DONANTE
GR 5% BOLSA DE SANGRE

M (uL)
100

m (uL)
50
100

I (uL)
100

II (uL)
100

Auto (uL)
100
50

50

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CELULAS I
CELULAS II

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PRE LABORATORIO
Antes de presentarse a la prctica el estudiante deber leer detenidamente la gua
de laboratorio y preparar el siguiente prelaboratorio:
1. Cules son las limitaciones de la prueba cruzada?
2. Por qu no es necesario realizar prueba cruzada menor cuando las unidades
de sangre han sido tamizadas para rastreo de anticuerpos irregulares?
3. Identifique posibles causas de error que originen resultados falsos compatibles
y/o incompatibles en las pruebas cruzadas.
4. Cmo se realiza e interpreta la identificacin de anticuerpos irregulares, una
vez el RAI resulta positivo?
BIBLIOGRAFA
McKENZIE, Shirlyn. Hematologa clnica. 2 ed. Mxico: Editorial El Manual
Moderno, 2000.
VIVES, J.L. y AGUILAR, J.L. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa
3 ED. Barcelona, 2006.
Manual de Normas tcnicas, administrativas y de procedimientos en bancos de
Sangre Resolucin 0901 de 1996.
Manual tcnico AABB (American Association of Blood Bank) para Bancos de
sangre.
Manual de Bancos de sangre. Alba Luz Luque de Bowen. Rodriguez quito
editores. 1 ed. 1982.

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