El docente proporcionara

una caja petri con

crecimiento de la
levadura (Saccharomyces
cerevisiae).

Preparar el medio de cultivo

YP (extracto de 10 g / L de
levadura, 10 g / L de peptona,
20 g / L de agar) en el cual se
realizara la resiembra de la
levadura. tambin se
complementaron con 6 g / L
de cido tartrico, 30 mg / ml
de eritromicina o 30 mg / ml
de cloranfenicol para el
aislamiento de la cepa.
Se esterilizara el medio de
cultivo (si es necesario las
cajas petri) en la autoclave,
terminado la esterilizacin
dejar que su temperatura
disminuya y verterlas en las

Ya gelificado el agar se
realizara el aislamiento del
microorganismo (tcnica de
aislamiento por extensin de
varilla).

Una vez realizado el

aislamiento se incubaran a
una temperatura con un
rango de 22-29 C,
trascurrido 48 horas se
verificara si hay crecimiento.

METODOLOGIA:

Se ocuparla tcnica de aislamiento por

extensin con varilla porque es la ms
recomendada para bacterias, mohos y
levaduras.

Colocamos el inoculo sobre el medio

del cultivo, posteriormente se toma
una varilla de vidrio o de acero
inoxidable de que tenga la longitud
de dimetro de la placa de Petri.
Esta varilla se introduce en un frasco
con alcohol y se flamea a la flama
del mechero por lo menos tres veces
para esterilizar, se deja enfriar y se
esparce el inoculo sobre la superficie
del agar.
Se deja en posicin vertical derecha

Se realizara la cuantificacin de
levaduras totales

Conteo con la cmara de

Neubauer.

Colocar un cubre objetos

tapando parcialmente la
caja de Neubauer y con la
pipeta automtica
cogemos una muestra de
la suspensin y la
colocamos
cuidadosamente en la
caja. Donde por efecto de
capilaridad el fondo de la
cmara se llena antes de
que la solucin pueda
desbordarse.
Llevamos la cmara a
observacin en el
microscopio, donde
primeramente ubicamos
la caja con el lente de
aumento 5x. luego con el
de 10x observamos el
cuadro central, y con el
lente de 40x procedemos

Preparacin de la solucin
de sacarosa 100g/ L:
Coloca en cero o en tara la
bscula, Pesar 100 g de
glucosa Cuidadosamente
transfiere la glucosa pesada a un
recipiente limpio en un vaso de pp.
Mide 1 L de agua en un vaso y
Agrega el agua al recipiente con el
azcar

Esterilizar el material el
matraz donde se realiza la
inoculacin por 15minutos a
10 PSIA.

Construccin del reactor

Poner la solucin de
sacarosa junto con el
inoculo dentro del reactor
y esterilizar

En un frasco con tapa rosca

realizamos tres
perforaciones en la tapa del
frasco insertamos tres
varillas de vidrio (que estas
no toquen el fondo del
frasco) poner en cada una
de las varillas .En la
manguera de en medio
estar conectada una

PRUEBA DE
YODOFORMO
Este consiste
en agregar a
5 ml del medio de cultivo
con
crecimiento
de
levaduras durante 48 hora,
2 ml de hidrxido de sodio
y 3 ml de lugol lentamente,
esta mezcla se dejara
reposar 5 minutos y si hay
presencia de etanol se
observa
un
precipitado

Inoculacin; se aaden
25 ml de la solucin de
sacarosa en un matraz,
con las levaduras totales
Dejar reposar durante30
a 72 horas en
temperatura ambiente

Una vez pasadas las 72

horas tomamos una
-TECNICAS
Colocar papel
filtro a peso
constante en
la estufa
durante 24hs y
pesar

Colocar en la
estufa el slido de
la filtracin en la
estufa a 70c
durante 24 h.

en un tubo de cristal de 10ml

se adiciona 0.5ml de muestra
y 0.5ml de reactivo de DNS
Los tubos se colocan en bao
mara a 100 C por 5min
Se enfra hasta temperatura
ambiente
Se aade5 ml de agua
destilada se agita
Se realiza lectura en el
espectrofotmetro a 540nm

Producto de la
fermentacin;

PESO SECO ( Xf)

Cuantificacin de azucares
reductores por DNS:

Realizar
cuantificacin de
azucares (sf) con
el lquido de la
filtracin

PREPARACION DE DNS:
Se pesan 5g de cido 3,5
dinitrosalicilico 150g de tartrato
de NaK y 8 g de NaOH
Se disuelve el NaOH en 200ml
de agua
Se aade en agitacin el tartrato
de NaK lentamente
Se completa con agua destilada
hasta 400ml y se comienza a
aadir lentamente el cido 3,5
dinitrosalicilico
Se deja en agitacin y se

DETERMINACION
DETERMINACION
SEMI-CUANTITATIVA
SEMI-CUANTITATIVA
DEDE
ETANOL
ETANOL
POR
POR
LALA
TECNICA
TECNICA
DEL
DEL
DICROMATO
DICROMATO
DEDE
POTASIO.
POTASIO.
LaLa
tcnica
tcnica
dede
dicromato
dicromato
consiste
consiste
enen
tomar
tomar
2 ml
2 ml
dede
medio
medio
crecido
crecido
dede
levaduras(centrifugarlo
levaduras(centrifugarlo
a 3200
a 3200
rpm
rpm
durante
durante
3030
minutos)
minutos)
y mezclarlo
y mezclarlo
con
con
2ml
2ml
dede
una
una
solucin
solucin
oxidante
oxidante
dede
dicromato
dicromato
dede
potasio.
potasio.
LaLa
mezcla
mezcla
sese
homogenizo
homogenizo
enen
vrtex
vrtex
a 1500rpm
a 1500rpm
y se
y se
calent
calent
enen
bao
bao
termostatado
termostatado
dede
80-85
80-85
C,C,
PorPor
3030
min.
min.
SeSe
enfrio
enfrio
a temperatura
a temperatura
ambiente
ambiente
y se
y se
ley
ley
la la
absorbancia
absorbancia
a 440nm
a 440nm
y se
y se
enterpolo
enterpolo
enen
la la
curva
curva
dede
calibracin
calibracin
, ,
reportando
reportando
el el
valor
valordede
etanol
etanol
enen
g/lg/l
enen
dos
dos
tiempos
tiempos
2424
y 48
y 48
horas
horas

DETERMINACION SEMI-CUANTITATIVA DE ETANOL POR LA TECNICA DEL

DICROMATO DE POTASIO.
La tcnica de dicromato consiste en tomar 2 ml de medio crecido de
levaduras(centrifugarlo a 3200 rpm durante 30 minutos) y mezclarlo con
2ml de una solucin oxidante de dicromato de potasio. La mezcla se
homogenizo en vrtex a 1500rpm y se calent en bao termostatado de
80-85 C, Por 30 min. Se enfrio a temperatura ambiente y se ley la
absorbancia a 440nm y se enterpolo en la curva de calibracin ,
reportando el valor de etanol en g/l en dos tiempos 24 y 48 horas