Manual bIR

VOLUMEN V: MANUAL DE
INMUNOLOGA
Autor: Dr. Toms E. Verdura Gonzlez
Editora: Dra. Iliana Perdomo Lpez

Manual

BIR.

VOLUMEN

V:

MANUAL

DE

INMUNOLOGA
Autor: Dr. Toms E. Verdura Gonzlez

Iliana Perdomo Lpez (editora).

Depsito legal: DLC 615-2012

Reservado todos los derechos. Est prohibido, bajo las sanciones penales y el resarcimiento civil
previsto en las leyes, reproducir, registrar o transmitir esta publicacin, ntegra o parcialmente por
cualquier sistema de recuperacin y por cualquier medio, sea mecnico, electrnico, magntico, por
fotocopia o por cualquier otro, sin la autorizacin previa por escrito de la editora.

NDICE DE MANUAL DE INMUNOLOGA

Tema 1. Introduccin. Generalidades. Clulas y tejidos del sistema

inmune .................................................................................................................. 1
Tema 2. Inmunoglobulinas. Estructura funcional. .....................................................21
Tema 3. Gentica de las inmunoglobulinas ..................................................................35
Tema 4. El sistema del complemento. .............................................................................43
Tema 5. Complejo principal de histocompatibilidad (MHC)...................................57
Tema 6. Citocinas. .....................................................................................................................65
Tema 7. Desarrollo de linfocitos B.. ..................................................................................85
Tema 8. Receptor de Ag del linfocito T.. .........................................................................91
Tema 9. Desarrollo de linfocitos T ....................................................................................97
Tema 10. Transduccin de seales mediante los receptores de Ag de
linfocitos B y T. ........................................................................................... 101
Tema 11. Inmunidad mediada por linfocitos T.. ........................................................109
Tema 12. Activacin de linfocitos B y produccin de anticuerpos.. ................127
Tema 13. Regulacin de la respuesta inmune ...........................................................137
Tema 14. Inmunidad frente a microorganismos. ......................................................147
Tema 15. Inmunodeficiencias ............................................................................................163
Tema 16. Reacciones de hipersensibilidad. ...............................................................173
Tema 17. Autoinmunidad .....................................................................................................183
Tema 18. Trasplantes y aloinmunidad ...........................................................................189
Tema 19. Respuesta inmune frente a tumores ..........................................................195
Tema 20. Tcnicas Inmunolgicas y manipulacin de la
respuesta inmune tumores ............................................................................203
Bibliografa.................................................................................................................................239

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Inmunologa

La respuesta inespecfica o innata constituye la primera barrera defensiva del organismo y

no requiere, para su funcionamiento ptimo, de contacto previo con el agente agresor. Por lo
general a igual estimulo siempre se desarrolla con igual intensidad (no se amplifica) y su
sistema de discriminacin de las caractersticas fisicoqumicas del agente agresor es menos
sofisticado (solo reconoce estructuras muy primitivas y conservadas filogenticamente y
estmulos fsicos o qumicos).
Consta de estructuras y mecanismos fsico-qumicos como la existencia de las barreras
naturales (la piel y las mucosas impiden la fcil penetracin de agentes externos), el flujo
constantes de secreciones (flujo de orina que arrastra bacterias) y las secreciones de
sustancias con actividad antibacteriana (como la lisosima de la saliva y lgrimas que rompe
la unin de azcares en las paredes bacterianas, el PH extremo del estmago, los cidos
grasos de la piel, etc).
Tambin entre estos mecanismos inespecficos se encuentran clulas y molculas que
participan fundamentalmente en los procesos de inflamacin, fagocitosis e histolisis como
los leucocitos polimorfonucleares neutrfilos, los macrfagos y las clulas NK. A esto se le
suma la participacin de otras clulas que tienen una accin con carcter ms particular
como basfilos, eosinfilos, mastocitos, plaquetas, etc.
En ella participan tambin molculas como las citoquinas (interleuquinas, quimioquinas,
interferones, etc.), las enzimas citoliticas intracelulares, sistemas moleculares integrados
como el complemento y otro gran nmero de estructuras de membrana, mecanismos
bioqumicos (ej. proteinas de fase aguda como el fibringeno y la proteina C reactiva, etc.) y
metablicos cuya actividad integrada y coordinada tiene como finalidad el aislamiento y la
destruccin de los agentes agresores sean de naturaleza fsica, qumica o biolgica.
La respuesta especfica o adquirida se desarrolla solo (especificidad) frente a las
molculas

extraas

(antgenos)

que

indujeron

su

iniciacin

est

mediada

fundamentalmente por los linfocitos y las sustancias liberadas por los mismos (anticuerpos,
citoquinas, etc.) Requiere del reconocimiento antignico (discriminacin, especificidad,
clonalidad), lo cual le caracteriza, adems de otras propiedades como memoria,
amplificacin y autorregulacin. Mejora cuantitativa y cualitativamente con los subsiguientes
encuentros con el antgeno que le dio origen (cambios en la respuesta secundaria con
respecto a la primaria).

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Inmunologa

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Rep. De . Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunologa Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic. 2008.

Cuando por primera vez penetra un antgeno (Ag) al organismo, se pone en contacto con el
sistema inmune y genera la activacin, proliferacin y diferenciacin de los linfocitos, dando
lugar a la formacin de gran cantidad de clulas de memoria y clulas efectoras. Esta
respuesta primaria se caracteriza por ser de poca intensidad y corta duracin. A partir de
un segundo contacto y en lo sucesivo la respuesta se considera secundaria y parte de la
gran cantidad de clulas de memoria generadas en la respuesta primaria por lo que ser
ms rpida, de mayor intensidad y ms larga duracin. Como veremos ms adelante los
tipos de anticuerpos (Ac), su afinidad por el Ag y otras propiedades tambin varan de una
respuesta a otra en funcin del tipo de Ag y otros condicionantes.

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

Inmunologa

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Los linfocitos B pueden ser de dos tipos:

B1 (expresan CD5 en su membrana y altos niveles de IgM de especificidades limitadas y
escasas o nulas IgD) Se suelen localizar en serosas (Ej. peritoneo) y se les relaciona
con activacin policlonal y desarrollo de tumores.
B2 (carecen de CD5 y expresan niveles ms altos de IgD) Son los linfocitos B
habituales y mayoritarios de la circulacin y tejidos. Otros marcadores caractersticos de
los linfocitos B son CD19, CD21 (receptor del virus de Ebstein-Barr) y CD40.
Linfocitos T: De origen medular pero maduran en el timo. Son una poblacin celular muy
heterognea (varias subpoblaciones) funcionalmente diferentes Responsables de la llamada
inmunidad celular, con un papel central cooperador y regulador de toda la respuesta
inmune y otras funciones efectoras citotxicas. Reconocen al antgeno mediante el receptor
de antgenos de linfocitos T (TCR).
Se clasifican en diferentes subpoblaciones funcionales:
T1 o linfocitos T : localizados fundamentalmente en epitelios, se caracterizan por poseer
cadenas y conformando su receptor clonotpico y tener menor diversidad de cadenas. Al
parecer pueden ser capaces de activarse sin que medie procesamiento y presentacin
antignica. Adems de pptidos, como el resto de los linfocitos T, puede ser capz de
reconocer otras molculas.
T2 o linfocitos : Son los ms abundantes en el organismo (sangre, linfa, rganos
linfoides secundarios) y se caracterizan por conformar su receptor clonotpico con
cadenas y . A su vez se subdividen en: citotxicos o citolticos (Tc) (median la
lisis de clulas dianas), que expresan CD8 en su membrana, y cooperadores (Th)
(cooperan con los linfocityos B y otros linfocitos T para que puedan realizar sus funciones)
que expresan CD4. Los CD4 son ms abundantes (aproximadamente el doble que las
CD8). Otros marcadores identificativos son CD3 (correceptor)

y CD2 (molcula de

adhesin celular y como transductor de seales).

Los linfocitos Tc CD8+ reconocen el antgeno en el contexto de una molcula MHC-I,
mientras que los Th CD4+ lo reconocen en el contexto de una molcula MHC-II. A su vez los
Th se subdividen en Th1 o Th2 segn el patrn de citoquinas que producen (Th1: IL-2, INF; Th2: IL-4, 5, 6, 10 y 13). Tambin podemos clasificar a los LT segn la molcula CD45.
Esta se presenta en forma CD45RA en los linfocitos vrgenes y CD45RO en los activados.

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El proceso de maduracin de los timocitos parece ser predominantemente en direccin

corteza-mdula. Durante este proceso mueren aproximadamente el 95% de los timocitos.
Esto se debe a un proceso de seleccin tmica que se realiza en dos fases (seleccin
positiva y seleccin negativa) y est condicionado por el grado de afinidad del TCR con las
molculas del MHC de las clulas epiteliales y presentadoras del timo. Este proceso de
seleccin garantiza que se eliminen los clones celulares autorreactivos.
Mdula sea: se ocupa de la produccin de todas las clulas hematopoyticas. En los
mamferos esta funcin se lleva acabo en islotes de tejido linfoide en el hgado y la mdula
sea fetal y posteriormente en la mdula sea en el adulto. Es donde ocurre la
diferenciacin y maduracin de

linfocitos B y la generacin de los precursores de los

linfocitos T que migrarn hacia el timo. Tambin en ella ocurren procesos de seleccin
mediados por las interacciones de los linfocitos B inmaduros y las clulas del estroma
medular.

rganos linfoides secundarios.

Bazo:
Se trata de un rgano situado en el hipocondrio izquierdo, cuya superficie externa se
compone de una cpsula fibrosa (tejido conectivo) que penetra profundamente en el rgano.
En l se distingue la pulpa roja, formada fundamentalmente por capilares sinusoidales, que
constituye un reservorio de hemates (para emitir a la circulacin en situaciones de
emergencia) y donde ocurre el aclaramiento de clulas senescentes); y la pulpa blanca,
formada por tejido linfoide, dispuesto alrededor de una arteriola central y organizado en
reas T y reas B. Las clulas T se disponen inmediatamente alrededor de la arteriola
central (vaina periarteriolar), mientras que las clulas B se disponen exteriores a la misma
formando folculos primarios (folculos no estimulados) y secundarios (caracterizados por
presentar centro germinativo o germinal que es una zona rica en clulas activadas en
divisin y diferenciadas). En los folculos se localizan adems las clulas foliculares
dendrticas especializadas en presentar Ag a los linfocitos B. Sin embargo, la ausencia de
bazo (filtra Ag que se encuentran en el torrente circulatorio) no produce grandes trastornos
inmunolgicos,

excepto cierto aumento del riesgo de infecciones por

bacterias

encapsuladas. Al parecer su funcin puede ser compensada cor la realizada por los ganglios
linfticos.

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Inmunologa

Rep. De . Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunologa Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic. 2008.

Ganglios linfticos: Localizados a lo largo de la red de vasos linfticos, principalmente en

las zonas de bifurcacin y de gran afluencia de sustancias de origen externo. Son los
rganos donde se desarrolla la respuesta inmune frente a los antgenos procedentes del
espacio intersticial (drenados al torrente linftico).

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Tema 3. Gentica de las inmunoglobulinas.

(2012:126, 127) (2010: 127) (2005: 52) (2004: 180) (2003: 141, 142)

Los linfocitos B de un individuo pueden sintetizar y producir una gran cantidad y

diversidad de inmunoglobulinas diferentes (en el orden de 108-109 especificidades
diferentes) para poder reconocer la inmensa variedad de antgenos que existen en la
naturaleza. Para lograr tal diversidad de molculas de inmunoglobulinas con una cantidad
de material gentico limitado, se lleva a cabo, fundamentalmente, un proceso de
recombinacin de segmentos gnicos (recombinacin somtica). Existen tambin otros
mecanismos que contribuyen a la generacin de diversidad.
La sntesis de las cadenas ligeras y pesadas ocurre a partir de genes que se encuentran en
cromosomas distintos (las cadenas pesadas en el cromosoma 14, las ligeras en el
cromosoma 2 y las en el cromosoma 22). Adems, esta informacin est en la lnea
germinal fraccionada en forma de bloques de genes que pueden combinarse de diferentes
maneras (recombinacin gnica). Estos segmentos codifican por separado la parte variable,
la parte constante y la parte por las que ambas regiones se unen.
Los segmentos que codifican la parte variable son de dos tipos: segmentos V y segmentos
D, responsables de la variabilidad y diversidad de las inmunoglobulinas respectivamente. Le
siguen los segmentos J o de unin, responsables de unir los fragmentos anteriores con los
segmentos C que codifican para la parte constante. El nmero de segmentos responsables
de la codificacin de la parte constante es muy limitado en relacin con el nmero de
segmentos que codifican la parte variable de las inmunoglobulinas. Estos segmentos estn
contenidos en los exones, que son aquellos fragmentos de DNA que sern transcritos para
dar lugar a la sntesis de protenas, y que se encuentran separados entre s por fragmentos
de DNA no codificadores de protenas denominados intrones. Asociados a los segmentos V
y situados en direccin 5' de los mismos, existen otros segmentos gnicos conocidos como
segmentos lder (L). Estos segmentos gnicos codifican un pptido pequeo que servir de
gua tanto para las cadenas ligeras como pesadas a su paso por el retculo endoplsmico
pero que se separa de estas cadenas antes de que las mismas se unan entre s para formar
la molcula completa de inmunoglobulina.

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Inmunologa

Rep. De . Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunologa Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic. 2008.

A lo largo del proceso madurativo de los linfocitos B, se produce un reagrupamiento de

segmentos de los genes para la iniciacin de la sntesis de las cadenas ligeras y pesadas
(recombinacin), que siempre ocurre en el mismo orden. A medida que se produce el
proceso madurativo de los linfocitos B, los segmentos V, D y J cambian de sitio en el
cromosoma de tal manera que se colocan juntos. Posteriormente este conjunto V/D/J se
reagrupa con el segmento C correspondiente quedando constituido en consecuencia un gen
con toda la informacin de la cadena. En el linfocito B maduro estn los genes reagrupados
conformando la informacin secuencial de sus cadenas ligeras y pesadas y slo podr
producir una conformacin determinada anticuerpo.

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Inmunologa

Los inmunocomplejos formados por la unin del anticuerpo y el antgeno pueden ser
patgenos segn sus caractersticas fsico-qumicas. As dependiendo de su tamao y
otras propiedades fsico-qumicas, se mantendrn en circulacin sin precipitar si son de
muy pequeo tamao o captados por los fagocitos si son de gran tamao. Por el contrario
los de tamao intermedio pueden depositarse en los tejidos y causar lesiones. El tamao
de los IC depende de las proporciones moleculares relativas entre Ags y Acs, siendo las
relaciones de equivalencia las que producen redes mayores con peligro de precipitacin.
Otros factores como la carga elctrica tambin son determinantes para su efecto
patolgico. Los inmunocomplejos circularn por la sangre y se podrn localizar en
diferentes tejidos del organismo, sobre todo sitios de alta presin, turbulencias y superficies
de filtracin como articulaciones, vasos sanguneos bifurcados, glomrulos del rin,
procesos coroideos, etc.
En la mayora de los casos los inmunocomplejos se forman como consecuencia de
infecciones; agudas en unos casos como los estreptococos (glomerulonefritis postestreptoccica), o persistentes como la hepatitis vrica tipo B o C; por exposicin e
inhalacin persistente de agentes ambientales como hongos (pulmn del granjero) o
protenas animales (enfermedad del cuidador de aves) o bien como consecuencia de la
presencia mantenida de altos niveles de autoanticuerpos en algunas enfermedades
autoinmunes como lupus eritematoso sistmico o la artritis reumatoide.
La unin de los anticuerpos tipo IgG a los antgenos solubles en el organismo causa el
dao tisular por diferentes mecanismos. En primer lugar pueden inducir la activacin de la
cascada del complemento y la produccin de C3a y C5a que atrae PMN al sitio
inflamatorio. La activacin de estos y la liberacin de enzimas lisosomales causa dao
tisular. Asimismo son atrados al foco inflamatorio mastocitos y clulas cebadas que liberan
histamina incrementando la permeabilidad vascular.
La enfermedad del suero es el modelo de estas enfermedades por IC. Al inocular va IV
suero heterlogo el receptor recibe gran cantidad de Ag extraos en circulacin. Ante estos
Ag desarrolla una respuesta inmune que tarda unos das en formar a concentraciones
adecuadas los Ac especficos para esos Ag. Cuando se alcanza la equivalencia entre Ag y
anticuerpos se produce la precipitacin del los complejos en los tejidos (articulaciones,
glomrulos, plexos coroideos, vasos sanguneos) con la subsecuente activacin de C,
fagocitos, inflamacin y dao hstico, que se traducirn en los signos y sntomas de la
enfermedad: fiebre, malestar general, dolor articular, prpura, insuficiencia renal, etc. La
enfermedad autoinmune representativa de este tipo de hipersensibilidad es el lupus
eritematosos sistmico (LES).

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Mecanismos de dao hstico y produccin de enfermedad en las hipersensibilidades

mediadas por IC.

Rep.de Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunologa Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic. 2008.

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Inmunologa

Antgenos de histocompatibilidad.
El xito o el fracaso de un determinado transplante depende, en gran medida, de la relacin
gentica existente entre donante y receptor. Los genes del Complejo Mayor de
Histocompatibilidad (MHC o sistema HLA en el caso de los humanos) codifica una serie de
molculas presentes en la superficie de las clulas (antgenos de histocompatibilidad) que
son las que determinan el grado de compatibilidad o incompatibilidad en el transplante de
rganos. La presencia en los rganos injertados de molculas HLA distintas a las del
receptor (situacin de incompatibilidad HLA) provoca en ste el desarrollo de anticuerpos y
clulas T citotxicas dirigidas frente a dichas molculas, lo que conduce al rechazo de
dicho rgano. Por el contrario, si las molculas HLA presentes en el rgano injertado son
iguales a las del receptor (situacin de compatibilidad HLA), se reduce en gran medida la
incidencia y la severidad del rechazo, aumentando por tanto la supervivencia del injerto.
En los mecanismos de destruccin del rgano transplantado tiene gran importancia el
reconocimiento de los antgenos MHC-clase I por parte de los linfocitos T CD8 citotxicos y
al parecer su papel es crucial en las formas de rechazo ms inmediatas, sin embargo al
contemplar la sobrevida del transplante a largo plazo cobra mayor importancia la
compatibilidad MHC-clase II.
El hecho de que la compatibilidad HLA de clase II, sea ms importante que la de clase I en
el transplante de rganos, no est totalmente aclarado, pero parece tener su origen en la
manera en que se induce la respuesta inmune. Se sabe que los linfocitos T CD4+, slo son
capaces de reconocer las molculas que les son presentadas en la superficie de las clulas
unidas a molculas de clase II (restriccin por clase II), por el contrario, los linfocitos T
CD8+, slo son capaces de reconocer molculas que le son presentadas en la superficie de
las clulas unidas a molculas de clase I (restriccin por clase I). Como la activacin de las
clulas T CD8+ requiere la participacin de clulas T CD4+ activadas, es bastante lgico
pensar que las diferencias en las molculas de clase II induzcan una respuesta alognica
ms intensa que las diferencias en las molculas de clase I.
Influencia de otros factores genticos
Un hecho demostrado repetidamente es que la supervivencia del injerto es mayor entre
individuos emparentados HLA compatibles que entre individuos no emparentados con el
mismo grado de compatibilidad HLA, esto puede deberse a diferentes causas. Si se trata
de un estudio familiar, los hermanos que presentan los mismos haplotipos son HLA
idnticos. Sin embargo, cuando se trata de individuos no emparentados no se puede hablar
de individuos HLA idnticos, ya que aunque dos individuos presenten aparentemente las

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mismas molculas HLA, el polimorfismo del sistema es tan elevado que pueden existir
diferencias que no se puedan apreciar con la tcnica de tipaje serolgico, que es la que se
utilizaba habitualmente hasta hace muy poco. Incluso contando con tcnicas de biologa
molecular, hay que aadir tcnicas confirmatorias como la de reaccin cruzada y el cultivo
mixto de linfocitos.
Por otro lado, la compatibilidad MHC es importante en la supervivencia del injerto, pero no
es el nico sistema que influye en la aparicin del rechazo. En este sentido se sabe que
existe un grupo de elementos polimrficos, no relacionados entre s ni con el MHC,
denominados antgenos menores de histocompatibilidad que presentan importancia en el
rechazo de injertos. Es lgico suponer que la probabilidad de que estas molculas sean
idnticas es mayor entre hermanos que entre individuos no emparentados.
Mecanismos de presentacin.
Existen dos formas de reconocimiento de los aloantgenos por parte de los linfocitos del
receptor, bsicamente diferenciadas por el tipo de clula presentadora que participa en
cada uno de ellos.
Presentacin directa: A pesar de que los rganos que van a ser transplantados son
preparados previamente mediante lavados con soluciones apropiadas para eliminar todas
las clulas que no son estructuralmente propias del rgano, junto con el rgano se
transplantan leucocitos que no pudieron ser eliminados. Se les conoce como leucocitos
passengers que posteriormente migran a los rganos linfoides del receptor y funcionan
como clulas presentadoras de antgenos a los linfocitos T CD4 del receptor (el
reconocimiento de sus MHC-clase II, ms seales co-activadoras son capaces de producir
la activacin linfoide y la respuesta de rechazo). A este tipo de presentacin se le conoce
como presentacin directa (presentadora del donante-linfocito del receptor).
Presentacin indirecta: En este caso ambas clulas, la clula presentadora y el linfocito T
pertenecen al receptor. La APC del receptor endocita antgenos del rgano donado, los
procesa y los presenta en forma de pptidos a los linfocitos T CD4, tambin pertenecientes
al receptor, en un mecanismo igual al que el que ocurre normalmente en cualquier
respuesta inmune.

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

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Inmunologa

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actualmente, de manera general, se les llama radioinmunoensayos indistintamente si lo

que se marca es el Ag o el Ac. Estos mtodos tienen alta sensibilidad y especificidad as
como mnimas interferencias, pero dado lo engorroso de los mtodos de separacin que
requieren, el elevado precio de los equipos lectores de radiactividad y el peligro que
representa la radiactividad para la salud de los operadores como para el medio ambiente
han sido sustituidos casi totalmente en la actualidad por los mtodos inmunoenzimticos. No
obstante se siguen usando en la determinacin cuantitativa de hormonas, drogas y algunos
marcadores tumorales; todos ellos compuestos de muy bajo peso molecular y a bajas
concentraciones en la muestra. Debido a las caractersticas de dichos analitos, y a la
necesidad de cuantificarlos, se disea el ensayo tipo competitivo, ya sea en una sola fase
lquida pero con sistemas de separacin, o en dos fases (una lquida y una slida).

Ej. RIA en medio lquido.

Si queremos determinar la concentracin de un hapteno (H) en un fluido corporal;
habitualmente una hormona en orina o en suero, disearemos un ensayo competitivo para el
cual ser necesario realizar primeramente una curva patrn donde interpolar posteriormente
la reaccin especfica con el analito (H) a concentracin desconocida.
Es necesario disponer de:
a) un anticuerpo que se una especficamente a H (Ac anti-H).
b) el analito (hapteno H) a concentracin conocida.
c) el mismo hapteno pero marcado con el istopo radiactivo (hapteno radioactivo H*)
tambin a concentracin conocida.
.
Procedimiento:
1. Hacemos diluciones seriadas de H en tubos o pocillos de microtitulacin
2. Aadir a todos los tubos una concentracin conocida de H*
3. Aadimos a todos los tubos una cantidad fija de anticuerpos. Debe ponerse en
cantidad limitada, no en exceso. Idealmente aquella que captura aproximadamente el
70% de la hormona marcada.
4. El Ac se unir a los analitos marcados y sin marcar indiscriminadamente (misma
estructura). En los primeros tubos se unir ms a los analitos sin marcar y en los
finales en mayor medida a los marcados, dadas las concentraciones relativas a que
estarn estos (competencia).
5. Posteriormente se aplica un mtodo de separacin para separar de la mezcla la
radiactividad libre de la radiactividad ligada al anticuerpo y se mide una de las dos.
La radiactividad que se una al Ac ser menor a medida que es mayor la

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

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Inmunologa

concentracin del analito sin marcar, dado que las afinidades son iguales y la
probabilidad de unin depender entonces de la concentracin.
6. Con los datos obtenidos de la serie se realiza una curva patrn.
Posteriormente se hace un ensayo semejante con las muestras con el analito a
concentracin desconocida y concentraciones conocidas del analito marcado y del Ac, para
determinar el rango de la curva en la que se trabajar y donde se podrn interpolar los
resultados. En este rango la cantidad de marcador unido a los Ac depender de la
concentracin del analito sin marcar y ser inversamente proporcional a la concentracin de
este.
El RIA competitivo tambin se puede hacer sobre fase slida.
Enzimoinmunoensayos (EIA).
Inmunoensayos en los cuales la deteccin del compuesto a determinar es realizada al
evaluar los cambios de concentracin en el producto de una reaccin enzimtica. La enzima
va unida a uno de los componentes de la reaccin Ag-Ac y su actividad va a depender de la
cantidad de ligando que se una a este componente.
Las enzimas, como marcadores, presentan muchas ventajas ya que pueden disearse
ensayos con tanta detectabilidad, sensibilidad, especificidad y precisin como las que
presentan los RIA sin muchos de sus inconvenientes.
Tipos de enzimoinmunoensayos.
Homogneos: se caracterizan por realizarse en una sola fase lquida sin pasos intermedios
de lavado. Son diseos de tipo competitivo y en ellos la actividad enzimtica se modifica con
la unin de los ligandos (inhibicin o activacin cataltica durante la reaccin Ag-Ac). Son
muy empleados para la determinacin de frmacos y hormonas en fluidos biolgicos
(compuestos de pequeo tamao molecular que se comportan como haptenos).
Heterogneos: El ensayo transcurre en dos fases, una lquida y una slida y no se modifica
la actividad enzimtica Se realizan pasos de lavado intermedios en los que se eliminan los
elementos de la fase lquida que no se han unido a la fase slida. Segn su diseo pueden
ser competitivos y no competitivos, directos e indirectos, de captura, etc. Son los que se
denominan ELISA.
Ambos tipos de ensayos pueden ser cualitativos o cuantitativos.

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elementos no adheridos a la reaccin, excepto en el ltimo paso para no perder el sustrato

modificado. La evidencia de este cambio de color, ya sea presencia o ausencia en el caso
de los cualitativos o grados de intensidad en el de los cualitativos, se lee en un equipo
automtico cuyas caractersticas depende de las cualidades de la seal del sustrato utilizado
(cromgenos en un espectrofotmetro, sustratos fluorescentes en un fluormetro, sustratos
luminescentes en un luminmetro). Como los equipos leen el total de seal en una seccin
estrecha de la columna lquida es preferible que los sustratos al modificarse se mantengan
solubles y no precipiten, as se mantienen homogneamente distribuos en el pocillo y la
lectura de esta seal es representativa de toda la reaccin.

Rep.de Roitt. I, Brostoff. J, Male. D. Inmunologa. Elsvier Espaa, Ed. 5 ed. 2000.

A partir de estas caractersticas bsicas pueden disearse diferentes tipos de ensayos

heterogneos con diversas aplicaciones que pueden clasificarse en dos grandes grupos:
EIA heterogneos competitivos y no competitivos.

Rep.de Roitt. I, Brostoff. J, Male. D. Inmunologa. Elsvier Espaa, Ed. 5 ed. 2000.

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Drogas citotxicas
Antimetabolitos como el metotrexate intervienen en el metabolismo del cido flico
necesario para la biosntesis de timidina y purinas lo cual conlleva a dficits
funcionales y muerte celular principalmente de linfocitos B. Por una va alternativa la
azatioprina inhibe tambin la sntesis de purinas y afecta fundamentalmente los
linfocitos T.

Rep.de Rudiger Burmester, Antonio Pezuto. Color Atlas of Immunology. Thieme.2003.

La ciclofosfamida es una de las drogas ms potentes como inmunosupresoras. Uno de

sus metabolitos se comporta como agente alquilante de diversos componentes
celulares incluyendo bases de DNA y RNA creando uniones cruzadas en la molcula
de cido nucleico que conllevan a la muerte celular.

Rep.de Rudiger Burmester, Antonio Pezuto. Color Atlas of Immunology. Thieme.2003.

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MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

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La ciclosporina A, el tacrolimus (FK506) y el rapamicin inhiben la sntesis de citocinas,

especialmente la IL-2 por mecanismos semejantes.

Rep.de Rudiger Burmester, Antonio Pezuto. Color Atlas of Immunology. Thieme.2003.

Anticuerpos
Mediante inmunoglobulinas se puede interferir la respuesta inmune de una forma no
txica y mucho ms especfica que los frmacos. Actualmente los ms usados en este
sentido son anticuerpos monoclonales de origen humano, transgnicos o murinos
humanizados

anti-CD3,

anti-CD4,

anti-TNF,

anti-IgE,

etc.

Tambin

se

utilizan

inmunoglobulinas a dosis altas (>400 mg/kg) como inmunosupresores. Hace unos aos se
conjugaron Ac especficos (casi siempre monoclonales) contra dianas celulares con
diversas sustancias antitumorales (toxinas, frmacos, etc.), a lo cual que se llam inmuno
toxinas, magic bullets, etc., con muy poco exto en general.

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Inmunologa

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Bibiliografa:
1. Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunologa Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic.
2008.
2. Kindt. T, goldsby. R, Osborne. B. Inmunologa de Kuby. Mc Graw Hill, Ed. 6. 2007.
3. Regueiro. J, Lpez. L, Gonzlez. S, Martnez. E. Inmunologa Biologa y Patologa
del Sistema Inmune. Editorial mdica Panamericana, Ed. 3 edic. 2002. 6 reimp.
2006.
4. Roitt. I, Brostoff. J, Male. D. Inmunologa. Elsvier Espaa, Ed. 5 ed. 2000.
5. Pea. J. Inmunologaonline. http://www.uco.es/grupos/inmunologia-molecular/
2003.
Las ilustraciones del manual han sido tomadas de bibliografas 1, 2 y 5.

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