Universidad Nacional

Mayor de San Marcos

Facultad de Medicina
Escuela Acadmico Profesional de
Tecnologa Mdica

Asignatura :

BIOQUIMICA Y
NUTRICION
Informe de Practica:

N 1

Profesora:
Integrantes:
Custodio Cuzcano, Dante Miguel
07010121
Rivas Merma, Arturo
14010136
Delgado Polo, SAmantha
15010181

2015

INTRODUCCIN

La fotocolorimetra o espectrofotometra es un mtodo ptico de anlisis que

mide la cantidad de luz absorbida por una sustancia coloreada que se basa en
la medida de la intensidad y la longitud de onda de la radiacin electromagntica
que ha atravesado la materia o que sta emite. El fundamento de la colorimetra
se debe a la capacidad de las molculas para absorber radiaciones. La
absorcin de luz en un compuesto coloreado puede variar debido: longitud de
onda, concentracin del compuesto, longitud de celda que contiene la muestra.
La teora ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo
de cuantos de energa llamado fotones; la luz de una cierta longitud de onda
est asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad
definida de energa.
La tora fsica se fundamenta en las leyes de Lambert y de Beer:
La ley de Lambert dice: "Cuando un rayo de luz monocromtico (de una nica
longitud de onda) pasa a travs de un medio absorbente, su intensidad
disminuye exponencialmente al aumentar la longitud del medio absorbente: I =
Io . e-k.l ".
La ley de Beer dice: "Cuando un rayo de luz monocromtica pasa a
travs de un medio absorbente su intensidad disminuye exponencialmente a
medida que aumenta la concentracin: I = Io e- e . c ". La unin de ambas leyes
nos da la ley de Beer-Lambert: I = Io e- e . c. 1

OBJETIVOS
En base a los resultados obtenidos:

Construye e interpreta una curva de calibracin

Determina la longitud de onda de mxima absorbancia para soluciones
coloreadas.
Reconoce los 2 mtodos para la determinacin de la concentracin de
una solucin coloreada.
Determina la concentracin de una muestra problema haciendo uso de los
dos mtodos.

PARTE EXPERIMENTAL
Prepararemos las bateras de tubos con solucin stock: Permanganato de
potasio (KMnO4) 10 mg% como veremos a continuacin en el sgte. Cuadro:

Tubos N
ml KMnO4 (10 mg%)
ml Agua destilada
Concentracin mg%
A410

1
0.5
4.5
1
0.030

2
1.0
4
2
0.055

3
1.5
3.5
3
0.058

4
2
3
4
0.097

A525
A650
Fc[]

0.152
0.015
6.578

0.316
0.027
6.329

0.450
0.024
6.666

0.600
0.037
6.666

Ahora segn en la prctica el agua destilada es de capacidad solo para 5

ml.; de tal modo que en los tubos se vera de la sgt forma:
1 --- 4.5 ml

2 --- 4 ml

3 --- 3.5 ml

4 --- 3 ml

Ahora hallaremos la concentracin de cada tubo en mg%:

Tubo 1: [ ]1

Ci.Vi Cf.Vf

10 (0.5)

x (5)

es la concentracin en el tubo 1, as

hallaremos en los dems tubos.

Tubo 2: [ ]2

Ci.Vi

Cf.Vf

10 (1)

Tubo 3: [ ]3

Ci.Vi

x (5)

Cf.Vf

10 (1.5)

X (5)

Tubo 4: [ ]4

Ci.Vi

Cf.Vf

10 (2)

X (5)

Luego de realizado las mezclas llevaremos los tubos al espectrmetro

para las lecturas correspondientes a 410 nm, 525 nm, 650 nm; lo cual no
dio como resultado lo sgt,:

A410

0.030 0.055 0.058 0.097

A525

0.152 0.316 0.450 0.600

A650

0.015 0.027 0.024 0.037

Continuaremos con la dilucin de la muestra problema y posteriormente se

har la lectura de la misma; a continuacin tomamos 1 ml de la muestra
problema eh iremos diluyendo con agua destilada hasta llegar al equilibro
de la concentracin, en nuestro caso se diluyo en 7 ml de agua; es decir la
dilucin final fue de

. Lo cual nos da como factor de dilucin de 8.

La lectura de la dilucin de la muestra problema fue de 0.373

RESULTADOS
Con los resultados de las lecturas construiremos una grfica de
absorbancia versus concentracin de KMnO4 de las 3 longitudes de onda.
Para luego de la grfica hallar la longitud de onda ptima para el KMnOP4,
de la cual fue la de la lectura a 525. (SE ADJUNTA HOJA MILIMETRADA
DONDE SE REALIZO LA GRAFICA)
A continuacin graficaremos el

optimo representando la curva de

calibracin. (SE ADJUNTA HOJA MILIMETRADA DONDE SE REALIZO LA

GRAFICA)
Hallaremos el factor de calibracin de las soluciones estndares, y luego
el Fc promedio:
Fc [ ]1

1/0.152

6.578

Fc [ ]2

2/0.316

6.329

Fc [ ]3

3/0.450

6.666

Fc [ ]4

4/0.600

6.666

El factor de calibracin promedio seria de la sgt. Manera:

Fc

6.578+6.329+6.666 6.666
4

6.559

 En la grfica hallaremos la concentracin de la muestra problema de la sgt

manera:
[MP]

MP x Fd
2.48 x 8
19.84

Por el mtodo analtico, multiplicaremos la absorbancia por el Fc

promedio y el factor de dilucin, para hallar la concentracin de la muestra
problema mediante este mtodo:
[MP]

AMP x Fc x Fd
0.373 x 6.559 x 8
19.57

DISCUSIN
Podemos observar que los resultados obtenidos por cada mesa son diferentes
lo cual podra ser producto de un mal manejo de los instrumentos, como por
ejemplo a la hora de pipetear, o tambin un mal clculo al momento de emplear
las formulas.
ABSORBANCIAS
1
2

M1
M2
M3
M4
M5
M6
M7

0,438
0,452
0,458
0,421
0,447
0,450
0,434

0,644
0,573
0,631
0,582
0,600
0,600
0,549

0,153
0,156
0,163
0,149
0,170
0,152
0,116

0,308
0,281
0,314
0,287
0,300
0,316
0,280

6,4
6,7
6,3
5,5
6,6
7,5
7,47

AbMP

dMP

[MP]
grafica

[MP]
analtica

0,551
0,490
0,311
0,400
0,413
0,373
0,289

1/10
1/6
1/10
1/10
1/15
1/8
1/20

36
19,2
20
30

35,31
19,6
19,7
68
34,3
19,6
43,18

19,84
41

Vemos por ejemplo que no hay gran diferencia entre los resultados de las
absorbancias de cada mesa, lo cual nos hara pensar que no existi problema
alguno en cuanto al manejo de los instrumentos al momento de preparar la
batera de tubos.

Si observamos los resultados de los

vemos que la mesa 5 y la mesa 7

presentan valores que difieren de las dems mesas, tambin si observamos los
resultados de la dilucin vemos que la mesa 5 y 7 presentan valores que se
alejan de las otras mesas, y tanto la mesa 1, 4, 5, 7 presentan como [MP] grafica
y [MP] analtica valores altamente alejados de lo que se espera, por tanto se
podra decir que hubo un mal anlisis y un mal clculo.
Observamos tambin que las mesas 2, 3, 6 obtuvieron valores que s seran los
esperados. Tanto en la [MP] grafica como en la [MP] analtica
CONCLUSIONES
1.- Para ser exactos se utiliz el papel milimetrado para poder ajustar la recta de
absorbancia.
2.- Al graficar en las 3 longitudes de onda se hall que la longitud de onda
ptima es 525nm, concluyendo que los datos obtenidos experimentalmente se
encuentran dentro de los datos tericos.
3.- Los resultados de la concentracin de la muestra problema mediante los
mtodos grfico (19.84) y analtico (19.572) se muestran aproximados, lo que
indica un proceso llevado a cabo de manera correcta.

Aqu los resultados finales de las demas mesas en el laboratorio como nos
daremos cuenta en algunas mesas las lecturas no coinsidian ya sea por defecto
en el momento de la dilucion o por mal manejo a la hora de hallar las
concentracio

CUESTIONARIO
1. Hallar la longitud ptima de lectura
Longitud de onda ptima: 525 nm.
2.

Mencione la concentracin de la MP por ambos mtodos (grfico y

analtico). Por qu son diferentes? Explique
[MP] grfico=19.84

[MP] analtico=19.572

Son diferentes porque el mtodo grfico interpola la absorbancia en la

curva de calibracin para multiplicarlo por el factor de dilucin (2.48x8); en
cambio en el mtodo analtico se multiplica la absorbancia por el Fc
promedio y el factor de dilucin (0.373x6.559x8), empleando estos ltimos
datos ms exactos; es decir que existe un margen de error mnimo que se
da, el cual de no ser as y obtener como resultado un margen de error no
mnimo sera una prctica equvoca.
3.- Hallar los %T cuando se conoce las absorbancias: A1 = 0.01 A2 = 0.1
Hallar la Absorbancia cuando se conoce el % T siguientes: 1% T, 10 %T.
A = 2 Log % T
Log%T = 2 - A
%T =
A1 = 0,01 -> %T = 97,72
A2 = 0,1 -> %T = 79,43
1% T -> A = 2
10% T -> A = 1
4.- Una solucin coloreada presenta una absorbancia de 0.450 en una
cubeta
de 2 cm. Hallar la absorbancia cuando la sustancia se ha diluido 4
veces y se lee en una cubeta de 1 cm.
A = ExLxC
0.450 = E x 2 x 1
0.225 = E
Cuando no nos determinan la concentracin molar se tiene q tener en cuenta q
el valor referencial es 1
Para hallar la absorbancia diluida 4 veces se tiene q tener que la dilucin final
fue de 1/5. Entonces:
A = ExLxC

A = 0.225 x 1 x 1/5

A = 0.04

BILIOGRAFA
http://es.slideshare.net/juandavidlopeznorena/fotocolorimetria.
http://es.slideshare.net/noheding/fotocolorimetria-42075186.
http://roble.pntic.mec.es/~mbedmar/iesao/quimica/puntodel.htm.