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Universidad Autnoma de Baja California

Facultad de Ingeniera

Dinmica

Reporte de laboratorio de
Bioqumica
Prctica # 1
SOLUCIONES AMORTIGUADORAS

Maestro:
Susana Norzagaray Plasencia

Presenta:
Xchitl Carolina Richarte Meza

20/02/2015
Fecha de realizacin

PRCTICA No. 1 SOLUCIONES AMORTIGUADORAS

I.

COMPETENCIA

Habilidad en el manejo del material, equipo y sustancias del laboratorio de


biotecnologa, para evaluar las propiedades de las soluciones amortiguadoras,
mediante la aplicacin de los fundamentos tericos del equilibrio cido-base,
preparar soluciones buffer de pH establecido, atendiendo las normas de seguridad
y los lineamientos para asegurar la sustentabilidad de las actividades
experimentales requeridas

II.

MARCO TERICO

Una de las propiedades importantes del agua es su pequea tendencia a


ionizarse. El agua pura no est formada slo por H2O, sino tambin por una baja
concentracin de iones hidronio (H3O_) y una concentracin igual de iones
hidrxido (OH_). Los iones hidronio e hidrxido se forman por un ataque
nucleoflico del oxgeno contra uno de los protones en una molcula adyacente de
agua. En estareaccin se rompe un enlace covalente OH y el par de electrones
de ese enlace queda asociado con el tomo de oxgeno del ion hidrxido.

La reaccin de ionizacin es una reaccin reversible tpica. Las reacciones de


protonacin y desprotonacin son muy rpidas. Los iones hidrxido tienen corta
duracin en el agua, al igual que los iones hidronio. Hasta las mismas molculas
de agua presentan slo una existencia transitoria. Se cree que la molcula
promedio de agua slo existe aproximadamente un milisegundo (10_3 s) antes de
perder un protn para convertirse en ion hidrxido, o ganar un protn para
transformarse en un ion hidronio.

Los iones hidrxido pueden aceptar un protn y convertirse de nuevo en


molculas de agua. A los aceptores de protones se les llama bases. El agua
puede funcionar como un cido o como una base.
La ionizacin del agua se puede analizar cuantitativamente. Recurdese que las
concentraciones de reactivos y productos en una reaccin deben llegar al
equilibrio. La relacin de esas concentraciones define a la constante de equilibrio
(Keq).
Existen varios procesos bioqumicos como el transporte de oxgeno en la
sangre, la catlisis de reacciones con enzimas y la generacin de energa
metablica durante la respiracin o la fotosntesis que estn muy influidos por la
concentracin de protones. Aunque la concentracin de H

(o H3O ) en las

clulas es pequea en relacin con la concentracin del agua, el intervalo de [H ]


en soluciones acuosas es enorme, por lo que conviene usar una cantidad
logartmica llamada pH como medida de la concentracin de H . El pH se define
como el logaritmo negativo de la concentracin de H :

La constante de equilibrio para la disociacin de un protn de un cido en agua se


llama constante de disociacin del cido, Ka. Cuando la reaccin llega al
equilibrio, lo que sucede con mucha rapidez, la constante de disociacin del cido
es igual a la concentracin de los productos dividida entre la concentracin de los
reactivos. Para la reaccin 2.12, la constante de disociacin del cido es

Si el pH de una solucin permanece casi constante cuando se agregan pequeas


cantidades de cido o base fuerte, se dice que la solucin est regulada o
amortiguada. La capacidad de una solucin para resistir cambios de pH se llama
capacidad de amortiguacin.

Al repasar las curvas de titulacin del cido actico (figura 2.16) y del cido
fosfrico se ve que la regulacin ms efectiva, representada por la regin de
pendiente mnima en la curva, se presenta cuando las concentraciones de un
cido dbil y su base conjugada son iguales; en otras palabras, cuando el pH es
igual al pKa. El intervalo efectivo de amortiguacin por una mezcla de cido dbil y
su base conjugada se suele considerar desde una unidad de pH abajo hasta una
unidad de pH arriba del pKa.

La mayor parte de los experimentos bioqumicos in vitro con molculas


purificadas, extractos celulares o clulas intactas se hace en presencia de un
amortiguador (tambin se le llama buffer) adecuado que asegure un pH estable.
Para preparar soluciones amortiguadoras se utilizan varios compuestos sintticos,
con una diversidad de valores de pKa. Por ejemplo, se pueden usar mezclas de
cido actico y acetato de sodio (pKa
mezclas de KH2PO4 y K2HPO4 (pKa

4.8) para el intervalo de pH de 4 a 6 y


7.2) para el intervalo de 6 a 8. Con

frecuencia se usa el aminocido glicina (pKa

9.8) en el intervalo de 9 a 11. En el

ejemplo de clculo 2.2 se ilustra una forma de preparar una solucin


amortiguadora.
Un ejemplo excelente de la capacidad amortiguadora se encuentra en el plasma
sanguneo de los mamferos, que tiene un pH notablemente constante. A
continuacin se revisan los resultados de un experimento donde se compara la
adicin de una alcuota de cido fuerte a un volumen de plasma sanguneo con
una adicin similar de cido fuerte a suero fisiolgico (NaCl 0.15 M) o agua.
Cuando se agrega un mililitro de HCl (cido clorhdrico) 10 M a 1 litro de suero
fisiolgico o de agua cuyo pH inicial es de
7.0 el pH baja a 2.0 (en otras palabras, la [H ] del HCl se diluye a 10 2 M). Sin
embargo, cuando se agrega 1 mililitro de HCl 10 M a 1 litro de plasma sanguneo
humano a pH de 7.4 el pH slo baja a 7.2 es una impresionante prueba de la
eficacia de la regulacin fisiolgica.

El pH de la sangre se regula principalmente por el sistema amortiguador de


dixido de carbono-cido carbnico-bicarbonato. En la figura 2.19 se ve una
grfica de los porcentajes de cido carbnico (H2CO3) y de cada una de sus
bases conjugadas en funcin del pH. Ntese que las formas principales del cido
carbnico a pH 7.4 son cido carbnico y el anin bicarbonato (HCO3 ).

III.

MATERIALES
Material y equipo

3 matraces volumtricos de 100 Ml


2 Pipetas de 10 de 5 mL
1 Pipeta de 1 mL
2 vasos de precipitados de 100 mL
1 Probeta de 50 mL Potencimetro

IV.

1. cido actico glacial


2. Acetato de sodio
3. Fosfato acido de potasio
4. Fosfato dicido de potasio
5. Carbonato de sodio
6. Bicarbonato de sodio

PROCEDIMIENTO

1. Se calcularon las cantidades de cido y base


necesarios para preparar las tres soluciones
amortiguadoras de ph 5,7 y 10.
2. Se

pes

en

la

balanza

analtica

las

cantidades calculadas de cada solucin en


una canastilla para asegurar la exactitud y
precisin.
3. Para cada compuesto necesario en cada
disolucin se agregaron aproximadamente 18
ml de agua destilada en un vaso de
precipitado de 100 y se mezcl con el cido o
base en cuestin.
4. Una vez que el cido y la base de cada
solucin estuvieran disueltos en los 18 ml de agua estos se agregaron en un
matraz aforado de 50 ml donde se le agreg el agua destilada faltante.

5. Se agit cada solucin amortiguadora en el


matraz hasta que todos los componentes se
disolvieran completamente y se observara una
mezcla homognea.
6. Se calibr el potencimetro segn lo indica el
manual de este, con disoluciones de ph=4, ph=7
y pH=10 para asegurar que este diera resultados
precisos.
7. Se midi el pH de cada solucin con el
potencimetro, agitando la mezcla lentamente
hasta que el aparato indicara el pH, repitiendo el
procedimiento 3 veces como lo indica la qumica
analtica.
8. Una vez terminado de medir el pH de una
solucin se enjuagaba la varilla con agua
destilada.

V.

OBSERVACIONES

El pH de las soluciones amortiguadoras no presentaban el pH estimado exacto,


sino que tena variaciones de alrededor de 0.15, probablemente debido a que
quedaba un poco de residuos del cido o base en el recipiente en el que se
pesaba, y como era tan poco la cantidad necesaria que aunque puede ser una
cantidad muy pequea represento un valor significativo en el resultado del pH
medido.

VI.

DATOS EXPERIMENTALES

Tabla 4.2 Solucin amortiguadora 0.1 M de pH5


CH3COOH

CH3COONa

Mo

60.028 g

82.001 g

% Pureza

99.7%

1.05 g/cm3

-------

0-109 g

0.2602 g

0.103 ml

-------

Tabla 4.2 Solucin amortiguadora 0.1 M de pH7


K2HPO4

KH2PO4

Mo

136.09g

174.19g

-------

-------

0.416g

0.33g

-------

-------

Tabla 4.3 Solucin amortiguadora 0.1 M de pH10

VII.

Na2CO3

NaHCO3

Mo

105,99 g/mol

84.01g/mol

-------

-------

0.2575 g

0.2046 g

-------

-------

CLCULOS

Solucin Amortiguadora 0.1M de pH 5

Solucin Amortiguadora 0.1M de pH 7

Solucin Amortiguadora 0.1M de pH 10

VIII.

RESULTADOS
Tabla 8-1 Solucin amortiguadora 0.1 M de pH5
pH requerido

NaC2H3O2 (g)

HC2H3O2 (ml)

pH medido

5.0

0.2602

0.103

4.84

Tabla 8.2 Solucin amortiguadora 0.1 M de pH7


pH requerido

K2HPO4 (g)

KH2PO4 (g)

pH medido

7.0

0.33

0.416

7.10

Tabla 8.3 Solucin amortiguadora 0.1 M de pH10


pH requerido

Na2CO3 (g)

NaHCO3 (g)

pH medido

10.0

0.2575

0.2046

11.02

IX.

NALISIS DE RESULTADOS

Las solucione amortiguadoras no tienen exactamente el mismo pH requerido, lo


cual puede ser causado debido a distintos factores, como por ejemplo que un poco
de la muestra pesada quedara en la canastilla o el potencimetro no estuviera
indicando correctamente, sin embargo las variaciones obtenidas es de alrededor
del 0.15 de pH lo cual puede ser considerado aceptable dependiendo del
propsito para el que se utilice la muestra.
En la solucin buffer de pH 5, tuvo un pH medido de 4.84 lo que indica que tena
ms base que cido, en la de pH 7 tuvo un pH real de 7.1 que el caso contrario a
la anterior tena ms base, y en la de pH 10 tuvo una variacin mucho mayor de la
esperada, con un pH medido de 11.02 lo que indica que tuvo mucha ms base,
pues hay 10 veces mayor concentracin de iones de [OH en la solucin.

X.

CONCLUSIN

El objetivo de esta prctica se cumpli pues se prepararon las soluciones


amortiguadoras correctamente segn lo indicado en la prctica siguiendo los
lineamientos de seguridad del laboratorio, adems de aplicar los conocimientos
tericos de las soluciones para deducir una frmula que permitiera encontrar
directamente la masa de cido y base necesarios para preparar el buffer de pH
deseado.

XI.

RECOMENDACIONES

Se recomienda arrastrar los residuos de muestra que quedan en la canastilla en la


que se pes con agua destilada para asegurar que todo est presente en la
solucin, ya que como es muy poca sustancia cualquier residuo afectara de
manera significativa en la medicin del pH final.

XII.

BIBLIOGRAFA

Horton;Moran;Laurence;Scrimgeour;Perry;Rawn,

Principios

bioqumica, cuarta edicin, Pearson educacin, Mxico, 2008.

de

XIII.

ANEXOS