Tcnicas y Mtodos de estriado en caja y tubo (medios

de cultivo)

a) Estriado bsico: Se calienta el asa de inoculacin hasta que quede color rojo
intenso para eliminar cualquier microorganismo, dejar que el asa se enfri
durante 3-5 segundos. Recoger una muestra del cultivo bacteriano a partir de
un caldo o una placa Petri. Levantar la tapa de la placa Petri que se va a
sembrar en un ngulo de 45, colocar el asa en la parte de atrs de la caja,
tocar con el asa el medio y pasarlo a travs de la superficie de la placa con un
movimiento en forma de S desde atrs hacia adelante.
b) Estriado para aislar: implica una sola inoculacin de una seccin de la placa
Petri y a continuacin disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la
seccin inicial de dos a tres secciones adicionales, achicando eficazmente la
poblacin de microorganismos.
c) Estriado por cuadrantes: se divide la parte inferior de la caja Petri en cuatro
partes iguales con un marcador. Se esteriliza el asa y se estra el 1er cuadrante
con el procedimiento bsico de S. Se trabaja en el sentido de las agujas del
reloj, estriando cuadrante por cuadrante, esterilizando el asa antes de seguir a
otro.
d) En tubo: esterilizar el asa como ya se mencion anteriormente. Tomar la
porcin de muestra con el asa. Con la mano opuesta a la que sujeta el asa
tomar el tubo por la parte inferior. Con el dedo meique de la mano con la que
sostiene el asa, retirar el tapn de algodn o la tapa de rosca del tubo, y
retngala, no la coloque en la mesa de trabajo. Flamee de inmediato la boca
del tubo de ensayo, pasndola una o dos veces por la llama del mechero, con
el objetivo de eliminar por incineracin los microorganismos contaminantes
que se encuentren en esa zona. Introducir el asa con la muestra en el tubo. A
partir de aqu la siembra se puede realizar de distintas maneras:

Deslizando el asa desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la

cua trazando una lnea longitudinal.

Deslizando el asa por la superficie de la cua desde el fondo hacia arriba,

imprimindole un movimiento de zigzag.

Moteando toda la superficie de la cua con un hisopo.

Al concluir la siembra se flamea y se taponea nuevamente el tubo procediendo

a esterilizar el asa en el mechero.

Tcnicas estriles
Las placas de Petri son un ambiente rico en nutrientes, por lo que es
importante la utilizacin de tcnicas estriles en todo momento. Nunca dejes a
una placa de Petri abierta. Siempre expn a tu asa de inoculacin a las llamas
antes y despus de transferir las bacterias de un medio a otro. Algunos
laboratorios pueden requerir el uso de una mscara o trabajar dentro de una
campana de tiro descendente para reducir al mnimo los contaminantes
ambientales.

Tcnica de estriado bsico

Calienta el asa de inoculacin hasta que quede de color rojo intenso para
eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfre durante 20 o 30
segundos, pero no lo soples para no reintroducir microorganismos. Recoge una
muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o una placa de Petri. No
necesitas de una presencia bacteriana visible. Levanta la tapa de la placa de
Petri que vas a sembrar en un ngulo de 45 grados, coloca el asa en la parte
de atrs del plato, toca con el asa en el medio y psalo a travs de la superficie
de la placa con un movimiento en forma de S desde atrs hacia adelante.
Algunos laboratorios pueden querer que gires la placa a 90 grados y repitas el
procedimiento de inoculacin para una cobertura completa.

Estriar para aislar

Estriar para aislar implica una sola inoculacin de una seccin de la placa de
Petri y a continuacin, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la
seccin inicial de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la
poblacin de microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo
mixto de las bacterias, los bacterilogos tambin utilizan este mtodo para
aislar una lnea de bacterias que nacen de un solo progenitor.

Estriado en T

Para llevar a cabo con precisin un estriado en T, dibuja una "T" en la parte
posterior de la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo y, con un
marcador permanente, divdela por la mitad. A continuacin, dibuja una lnea

divisoria en una de las mitades para dividirla hasta formar una "T". Gira la
placa de manera que la seccin ms grande quede a tu derecha. Inocula el asa
de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el medio
con el barrido en forma de S, pero no cruces la lnea media. Vuelve a calentar
el asa para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta
que la primera de las secciones ms pequeas quede en la esquina inferior
derecha. Comienza barriendo en forma de S en la esquina derecha de la
primera seccin que estriaste, en la nueva seccin. Pon el asa al calor de la
llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier
microorganismo. Gira la placa una vez ms y repite el barrido en S de la
segunda seccin a travs de la tercera.

SIEMBRA EN AGAR INCLINADO EN TUBO DE ENSAYE.

El agar, una sustancia similar a la gelatina que se extrae de las algas rojas, es
usado comnmente para cultivar microorganismos. Se le agregan varios
nutrientes para favorecer el crecimiento bacteriano y se coloca tanto en placas
planas como en tubos de ensayo. Cuando se coloca en un tubo de ensayo, el
agar est en forma lquida. Estos luego son colocados en ngulo para que se
enfren y solidifiquen, creando una superficie inclinada, o un
agar inclinado (agar slant, en ingls).

INCLINACIN
Los medios de agar inclinado se realizan llevando el agar a punto de ebullicin
y vertindolo en un tubo de ensayo. Antes de que el agar se enfre y
solidifique, el tubo de ensayo se coloca inclinado sobre un lado. Una vez que el
agar se enfra, el tubo puede volver a colocarse en posicin vertical y el agar
que se encuentra en su interior se ver inclinado.
El inculo se siembra, con ayuda de ansa, de la siguiente manera:
En profundidad con ansa de punta: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y
se introduce mediante punsin en el medio contenido en la parte inferior del
tubo
En superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se
esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.

Cul es el propsito de estriar una placa de agar?

Los estudios que implican los cultivos microbianos a menudo requieren la
identificacin de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequea

porcin de este cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es

posible mezclar una mezcla de bacterias individuales en unidades que forman
colonias.
Materiales
Estriar una placa de agar requiere placas de agar nutrientes, un asa para la
inoculacin, un cultivo de bacterias, una disolucin desinfectante como lysol al
10%y un mechero de bunsen. Tambin tendrs que vestir ropa de seguridad
como una bata de laboratorio, y lentes de seguridad contra productos
qumicos. El inoculo para rayar se toma a partir del cultivo stock bacteriano
utilizando el asa y estriando atraves de las placas de agar nutriente.
Mtodos-tcnicas
Estriado bsico
Calienta el asa de inoculacin *hasta que quede de color rojo intenso para
eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfri durante 20 o 30
segundos pero no lo soples para no reintroducir microorganismos. Recoge una
muestra de cultivo bacteriano a partir de un caldo o de una placa petri, no
necesitas una presencia bacteriana visible. Levanta la placa de petri, que vas a
sembrar en un ngulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrs del
plato, toca con el asa en el medio y psalo atraves de la superficie de la placa
con un movimiento en forma de ``S`` de atrs hacia adelante.
Estriar para aislar
Implica una sola inoculacin de una seccin de la placa petri y a continuacin,
disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la seccin inicial de dos
otras secciones adicionales, achicando eficazmente la poblacin de
microorganismos generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las
bacterias, los bactemotogos tambin utilizan este mtodo para aislar una lnea
de bacterias que nacen de un solo progenitor
Estriado en ``T``
Para Llevar a cabo con precisin un estriado en T, dibuja una T en la parte
posterior de la placa petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo, con un
marcador permanente, divdela por la mitad. Dibuja una lnea divisora en una
de las mitades hasta formar una T. jira la placa de manera que la seccin ms
grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento
anterior. Levanta la tapa e inocula le medio con el barrido en forma de S pero
no crucen la lnea media.
Estriado por cuadrantes
Este es un mtodo de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro
secciones en lugar de 3. Divide la parte inferior de la placa Petri en 4 partes
iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos bsicos de
estriado para inocular el primer cuadrante. Trabajo en el sentido de las agujas
del reloj, llevando los microorganismos de un cuadrante a otro como lo hiciste

en el mtodo de estratificado en T y calentado el asa antes de inocular el

siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el uno hasta
el cuadrante adyacente.
ESTRIADO EN TUBO (INOCULACIN EN TUBO)
Por estras
1)
Coger el asa por el cabo, introducirla directamente en la zona de color
azul de la llama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente se
produce a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo
efecto
2)
Retire el instrumento de la llama y espero de 4 a 5 seg. Con el objetivo de
que el asa enfri
3)
Con el asa estril y fra tome el volumen o fragmento de la muestra que
ser sembrado y trasldelo de inmediato para el medio de cultivo selectivo.
4)
Con la mano puesta a la que sujeta el asa tome el tubo para la porcin
inferior. Con el dedo meique de la mano que sostiene el asa y retire del tubo
del tapn de algodn a la tapa de rosca y retegola
5)
Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo pasndola y o dos veces
por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar incineracin, los
microorganismo contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte
externa del tubo
6)
Introduzca el asa con el volumen o fraccin de la muestra en el tubo,
hasta el fondo de la cua a partir de este punto la siembra puede realizarse de
diferentes maneras.

Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba por toda la superficie de la

cua trazando una lnea longitudinal

Deslizando el asa por la superficie de la cua desde el fondo hacia arriba,

impidindole o movimiento de zigzag

Motiando toda la superficie con un hisopo

Efectuado cualquiera de las 3 bonotes explicadas pero adicionalmente

rotndolo en medio con el asa, haciendo un pequeo corte longitudinal
7)
Al concluir las siembra se flamea la boca y se toponea nuevamente el
tubo procesando a esterilizar el asa en las llamas del mechero

Estriado en tubos de ensayo.

Siembra en tubos de cultivo con medio slido

Las siembras en tubos con medio slido, por lo general se emplean para la
conservacin de un cultivo puro proveniente de una placa o para la siembra de
pruebas bioqumicas como el medio OF, SIM y MIO. El pico del tubo. Del medio
con agar se inocula primero por puncin (cuando es necesario), seguido por
una estra en el pico del tubo desde el fondo a la parte superior con un
movimiento en S a medida que se retira el asa.

Siembra en medios de cultivo lquidos.

La siembra en tubos de cultivo en medio lquido, el tubo debe inclinarse en un

ngulo de 30 y el asa de inoculacin debe tocar la superficie interna del
vidrio, justo encima del punto donde la superficie del agar forma un ngulo
agudo. Cuando el tubo es vuelto a su posicin vertical, el rea de inoculacin
queda sumergida debajode la superficie, se puede agitar suavemente el asa en
el interior del medio lquido.
Tipos de cultivo en tubos de ensayo:

Siembra por estras en superficie:

Se utilizan los medios de cultivo inclinados, se toma una muestra de alguna

colonia con el asa estril y sobre la superficie del medio se desliza sta en
forma de estras.Se siembra el material en la superficie del agar inclinado en
un tubo de ensayo, all se extiende por toda la superficie con el asa
bacteriolgica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar,
haciendo estras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la
parte ms profunda de la superficie inclinada y se termina la estra en la parte
ms cerca de la boca del tubo.

Por picadura o puncin:

Se utilizan los medios de cultivo en un tubo solidificado en forma inclinada y en

forma recta, se toma la colonia y se introduce en el medio picndolo
longitudinalmente. Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y
se lo introduce en el tubo, con medio semislido. Introducir la aguja hasta el
fondo, formando un canal de puncin, trayecto por el cual la retiraremos luego.
Este mtodo se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias. sufinalidad
es estudiar la movilidad de las bacterias

Siembra en TSI:

(Por picadura y estras en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron) es un medio que
contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el rojo fenol.
En este medio se siembra por picadura y estras en superficie, para estudiar
los cambios que ocurran en la superficie y profundidad.

Siembra por dilucin:

Se toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldo simple. Se toma el
material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el
material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados. Su finalidad es
poner la bacteria en suspensin.

Cul es el propsito de estriar una placa de agar?

Los estudios que implican cultivos microbianos a menudo requieren la
identificacin de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequea
porcin de ese cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es
posible separar una masa de bacterias individuales en unidades que forman
colonias. Cada una de estas unidades se desarrolla en colonias discretas que
muestran caractersticas que ayudan a identificar el organismo.
Mtodos - Tcnicas
1) Estriado bsico
Calienta el asa de inoculacin hasta que quede de color rojo intenso para
eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfre durante 20 o 30
segundos, Recoge una muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o
una placa de Petri. Levanta la tapa de la placa de Petri que vas a sembrar en
un ngulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrs del plato, toca con el
asa en el medio y psalo a travs de la superficie de la placa con un
movimiento en forma de S desde atrs hacia adelante.
2) Estriar para aislar
Estriar para aislar implica una sola inoculacin de una seccin de la placa de
Petri y, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la seccin inicial
de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la poblacin de
microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las
bacterias, los bacterilogos tambin utilizan este mtodo para aislar una lnea
de bacterias que nacen de un solo progenitor.

3) Estriado en T
Dibuja una "T" en la parte posterior de la placa de Petri. Voltea la tapa de la
placa hacia abajo y, con un marcador permanente, divdela por la mitad. A
continuacin, dibuja una lnea divisoria en una de las mitades para dividirla
hasta formar una "T". Gira la placa de manera que la seccin ms grande
quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior.
Levanta la tapa e inocula el medio con el barrido en forma de S, pero no cruces
la lnea media. Vuelve a calentar el asa para matar cualquier microorganismo.
Gira el asa a la izquierda hasta que la primera de las secciones ms pequeas
quede en la esquina inferior derecha. Comienza barriendo en forma de S en la
esquina derecha de la primera seccin que estriaste, en la nueva seccin. Pon
el asa al calor de la llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar
cualquier microorganismo. Gira la placa una vez ms y repite el barrido en S de
la segunda seccin a travs de la tercera.
4) Estriado por cuadrantes
Este es tambin un mtodo de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro
secciones en lugar de tres. Divide la parte inferior de la placa de Petri en cuatro
partes iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos bsicos
de estriado para inocular el primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las
agujas del reloj, llevando los microorganismos de un cuadrante a otro, como lo
hiciste con el mtodo del estratificado en T y calentando el asa antes de
inocular el siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el
primero hasta el cuadrante adyacente.

Los estudios que implican cultivos microbianos a menudo requieren la

identificacin de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequea
porcin de ese cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es
posible separar una masa de bacterias individuales en unidades que forman
colonias. Cada una de estas unidades se desarrolla en colonias discretas que
muestran caractersticas que ayudan a identificar el organismo.

Estriado en caja.
Instrumental.

Placas de agar nutrientes

Asa

Cultivo de bacterias

Solucin desinfectante

Mechero bunsen

Equipo de seguridad

Mtodos y tcnicas.
I. Estriado bsico. Se calienta el asa de inoculacin hasta que quede de color
rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Dejar que se enfri por 20
o 30 segundos. Recoge una muestra del cultivo bacteriano. Levanta la tapa de
la placa petri que vas a sembrar en un ngulo de 45 grados, toca con el asa en
el medio y psalo a travs de la superficie de la placa con un movimiento en
forma de S desde atrs hacia adelante.
II. Estriar para aislar. Estriar para aislar implica una sola inoculacin de una
seccin de la placa de Petri y a continuacin, disminuir la colonia arrastrando
microorganismos de la seccin inicial de dos o tres secciones adicionales,
achicando eficazmente la poblacin de microorganismos. Generalmente
utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bacterilogos
tambin utilizan este mtodo para aislar una lnea de bacterias que nacen de
un solo progenitor.
III. Estriado en T. Para llevar a cabo con precisin un estriado en T, dibuja una
"T" en la parte posterior de la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia
abajo y, con un marcador permanente, divdela por la mitad. A continuacin,
dibuja una lnea divisoria en una de las mitades para dividirla hasta formar una
"T". Gira la placa de manera que la seccin ms grande quede a tu derecha.
Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e
inocula el medio con el barrido en forma de S, pero no cruces la lnea media.
Vuelve a calentar el asa para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la
izquierda hasta que la primera de las secciones ms pequeas quede en la
esquina inferior derecha. Comienza barriendo en forma de S en la esquina
derecha de la primera seccin que estriaste, en la nueva seccin. Pon el asa al
calor de la llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier
microorganismo. Gira la placa una vez ms y repite el barrido en S de la
segunda seccin a travs de la tercera.
IV. Estriado por cuadrantes. Este es tambin un mtodo de estriado para el
aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar de tres. Divide la parte
inferior de la placa de Petri en cuatro partes iguales con un marcador
permanente. Utiliza los procedimientos bsicos de estriado para inocular el

primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las agujas del reloj, llevando los
microorganismos de un cuadrante a otro, como lo hiciste con el mtodo del
estratificado en T y calentando el asa antes de inocular el siguiente cuadrante.
Calienta el asa y barre en forma de S desde el primero hasta el cuadrante
adyacente.
Estriado en tubo.
Los medios en tubo pueden presentarse slidos en forma inclinada, caldo o
bien como medios semislidos. De acuerdo al procedimiento de inoculacin
puede emplearse el asa o la aguja para inoculacin. Generalmente se emplea
el asa para inocular especmenes en placa y la aguja de inoculacin para la
transferencia de cultivos puros de placas a tubos con medio slido.
Existen muchas frmulas de caldos, dependiendo de la bacteria que se desee
crecer. En los tubos con medio slido, el tubo se pone a enfriar en posicin
inclinada, de manera que al solidificar queda la superficie inclinada. Los tubos
inclinados son tiles para el cultivo de aerobios y anaerobios facultativos. Las
caractersticas del cultivo tales como pigmento son fciles de observar en este
tipo de cultivo. Los procedimientos para inocular caldos, tubos inclinados y por
picadura sern demostrados antes de que se lleven a cabo.
Instrumental.

Asa y aguja bacteriolgica

Tubos con medios de cultivo

Placas con medio de cultivo

Mechero bunsen

Mtodos y tcnicas.
INOCULACIN DE MEDIOS DE CULTIVO.
1. Flamee el asa o aguja por unos segundos en forma vertical.
2. Quite el tapn del tubo y mantngalo en la misma mano en que tiene el asa
o aguja para inoculacin. Flamee la boca del tubo y tome una pequea porcin
de inocul.
3. Flamee nuevamente la boca del tubo que tiene el espcimen que va a
trasferir y tpelo.
4. Quite el tapn del tubo que va a inocular y proceda de acuerdo de acuerdo
al medio de cultivo:
Caldo: Basta con tocar el medio con el asa o aguja, si es poco caldo inclnelo de
manera que no introduzca en el tubo el mango del asa o aguja.

Medio semislido: por lo general para este medio se usa la aguja de

inoculacin la cual se introduce dentro del medio hasta aproximadamente
partes de profundidad. En un solo movimiento.
Medio slido inclinado: se lleva el asa o la aguja hasta donde empieza el
declive y se sube haciendo un movimiento de zigzag sobre la superficie
dibujando as una serie de estras.

Mtodo de siembra para aislamiento por agotamiento o en estra

Materiales

Placa petri con medio de cultivo

Muestra (slida o lquida)

Asa de siembra de platino

Con el asa estril tomamos la muestra y hacemos extensiones en la placa.

Volvemos a esterilizar el asa de siembra y extendemos parte de la extensin
anterior en otra direccin. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y volvemos
a extender parte de la segunda extensin en otra direccin. Esterilizamos y
repetimos la operacin. Incubamos a 37 durante 24 horas y, en la primera
zona, habr un amasijo de clulas. En la segunda, parte de la primera zona
estar mejor extendida, y en la tercera y en la 4 mejor an. Si tomamos una
colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro.

Estra nica: depositamos la muestra lo ms alejado de nosotros y

realizamos la siembra en forma de zig-zag. De esta forma vamos
descargando la muestra del asa. Es importante no volver a repasar el
trozo de medio de cultivo que ya hemos sembrado. Para conseguir que
al final de la estra tengamos colonias aisladas es importante que al
principio hagamos la estra ms junta y que la cantidad de muestra
tomada en el asa sea la adecuada.

Estra mltiple: en esta tcnica de aislamiento por agotamiento se

realizan varias estras. Esto se puede llevar a cabo flameando el asa de
paso en paso, es decir, de estra en estra, o sin flamear el asa. Adems,

dependiendo de la forma en la que hagamos las estras, existen varios

tipos de estriados:

Estriado sobre cuatro cuadrantes: Se utiliza cuando queremos

conservar algn microorganismo que nos interesa. Consiste en sembrar
uno a uno los cuadrantes, sin flamear el asa entre estra y estra, de tal
forma que en el cuarto cuadrante, al ir agotando la muestra del asa,
tendremos los microorganismos aislados.