PRCTICA 2.

EXTRACCIN Y
PURIFICACIN DE
PROTENAS
Dra. en C. Vernica Nava Ramrez
Febrero de 2015.

OBJETIVOS.

Adiestrar al alumno en la extraccin y

separacin de protenas totales por SDSPAGE para identificar similaridades y
diferencias entre patrones protenicos.
Conocer las aplicaciones mdicas de la
proteomica.

Medicina genmica
Le interesa reconocer los factores que
determinan la predisposicin a enfermedades
(hipertensin arterial, diabetes mellitus, asma,
infarto agudo del miocardio, enfermedades
infecciosas, etc.), y con ello evitarlas o retrasar
su aparicin y disminuir las complicaciones y
secuelas asociadas.

Para la sntesis de protenas ocurren diversos

procesos celulares:

Genoma
Proteoma

30 000 genes
120 000 protenas

Cmo es posible?
Polimorfismos genticos
Modificaciones post-transcricionales
Modificaciones post-traduccionales

Proteomica
Le interesa la
caracterizacin de la
expresin de las
protenas codificadas
por un genoma
(PROTEOMA).
Permite identificar,
categorizar y clasificar a
las protenas con
respecto a su funcin y
las interacciones que
establecen entre ellas.

Proteoma
El proteoma de un organismo refleja su estado
fisiolgico y no es esttico, cambia y est
influenciado por el ambiente.

Existen tres ramas en la protemica :

La protemica de expresin se encarga del estudio de la
abundancia relativa de las protenas y de sus
modificaciones postranscripcionales
La protemica estructural se encarga de la
caracterizacin de la estructura tridimensional de las
protenas
La protemica funcional se encarga de la localizacin y
distribucin subcelular de protenas y de las
interacciones que se producen entre las protenas y
otras molculas con el fin de determinar su funcin

Aplicaciones
Identificacin de nuevos marcadores para
el diagnstico de enfermedades
Identificacin de nuevos frmacos
Determinacin de mecanismos
moleculares involucrados en la patogenia
de enfermedades
Anlisis de rutas de transduccin de
seales

Tcnicas que utiliza la protemica

Tcnicas empleadas para analizar globalmente el
proteoma y separar sus protenas (electroforesis
mono y bidimensional.
Tcnicas usadas para analizar individualmente las
protenas (espectrometra de masas MS).
Tcnicas que se usan para estudiar interacciones
entre protenas (Bioinformtica).

SDS-PAGE
La electroforesis permite separar
molculas cargadas en funcin de su
tamao.
La electroforesis se lleva a cabo sobre un
soporte inerte, generalmente sobre geles
de poliacrilamida para protenas(PAGE =
polyacrylamide gel electrophoresis)

SDS-PAGE
Cuando la electroforesis se leva a cabo en
condiciones desnaturalizantes se denomina
as, en este caso se utiliza SDS (SDSPAGE)
El SDS se une a las cadenas polipeptdicas
en una proporcin constante enmascarando
la carga de la protena y as la migracin es
proporcional al tamao.

Diagrama general de la prctica 2

Extraccin de protenas de
tejido muscular y cuantificacin
Preparacin gel de
acrilamida/bisarilamida
Electroforesis
desnaturalizante en
primera dimensin
(SDS-PAGE).

Analizar el perfil proteico

del tejido muscular de
diferentes organismos,
para despus identificar a
las principales protenas
musculares y
relacionarlos por los
polipptidos que
comparten

Tincin y
documentacin del gel
Anlisis de
los
resultados

Protenas musculares
Los elementos fundamentales de las
clulas musculares son las miofibrillas.
Cada miofibrilla consiste en una serie
lineal de unidades contrctiles llamadas
sarcmeros.
El sarcmero
contiene los
filamentos de actina
(delgado) y miosina
(grueso).

 La contraccin combinada de los sarcmeros a

lo largo de la fibra muscular provoca la
contraccin del msculo completo
El sarcmero se acorta cuando la miosina
hidroliza ATP y los filamentos de actina se
deslizan hacia adentro entre los filamentos de
miosina.

Otras protenas musculares

Protena

PM (kD)

Funcin

Titina

3000

filamina

270

Centra a la miosina en el
sarcomero
Entrecruza los filamentos de actina
en redes ortogonales

Miosina (c.
pesada)

210

Desliza los filamentos de actina

-actinina

100

participa en el establecimiento de
la red de microfilamentos

fimbrina

68

interviene en la formacin de
retculas de microfilamentos

actina

42

Forma filamentos

Troponina (T)

30

Regula la contraccin

Miosina (c.
ligera)

15-25

timosina

Desliza filamentos de actina

Secuestra monmeros de actina