1.

DATOS Y RESULTADOS:

Datos registrados
Cromatografa de Capa Fina

Producto obtenido Lab.

N3

Pigmento color verde (clorofila

+ carotenoides)

Silica + Agua

Color blanco lechoso (papilla)

Tiempo para la activacin

de la placa
Altura desde la base para
la siembra de pigmento en
la placa
Solventes
Altura de la fase mvil en
el vaso de 250 mL

70 minutos
1 cm
Eter de Petroleo
Acetona
Eter de Petroleo +
Acetona 3:1
0.5 cm

Cromatografa de Columna

Producto obtenido Lab. N3

1 mL Pigmento color verde (clorofila +

1er solvente
1er vertido de ter de petrleo

carotenoides)
ter de Petrleo
Aprox. Por encima del corcho
Hasta altura aprox. 10-12 cm, a 2-3 cm

2do vertido de ter de petrleo

de la boca de la columna de

Sustancia slida en la columna

2da solvente

cromatografa
Almina
Mezcla ter de Petrleo-Acetona 3:1

Resultados obtenidos
Cromatografa de Capa Fina

SOLVENTES

DISTANCIA

DISTANCIA

CAROTENO (A)-

SOLVENTE

(X)

(Y)

0.7 cm

1.2 cm

4.9 cm

3.5 cm

4.9 cm

5.3 cm

DISTANCIA
CLOROFILA (B)

ETER DE
PETROLEO
MEZCLA ETER
DE PETROLEOACETONA 3:1

Cromatografa de Columna

SOLVENTES
ETER DE PETROLEO
MEZCLA ETER DE PETROLEOACETONA 3:1

PIGMENTOS SEPARADOS
CAROTENO (AMARILLO)
CLOROFILA (VERDE)

Propiedades Fisicoqumicas y Peligrosidad de los reactivos

SUSTANCIAS

PROPIEDADES
ACETONA

Propiedades Fisicoqumicas
Es un lquido transparente incoloro, con olor
caracterstico, de Pto. de ebullicin: 56.5
C, Pto. de fusin: -94C. Miscible en agua,
alcohol y ter.
Peligrosidad
Fcilmente inflamable. Irrita los ojos. La
exposicin repetida puede provocar
sequedad o formacin de grietas en la piel.
La inhalacin de vapores puede provocar
somnolencia y vrtigo, contribuye a la
contaminacin del suelo, la exposicin a la
luz y al aire favorece la formacin de
perxidos. Los gases / vapores pueden
formar mezclas explosivas con el aire.
Propiedades Fisicoqumicas

ETER DE PETROLEO

Llamado bencina de petrleo o nafta, es un

lquido incoloro apolar que se utiliza para
anlisis de qumica orgnica fina. Es una
mezcla de hidrocarburos compuesta por nhexano y 3-metilpentano. Es inmiscible en
agua. Punto inicial de ebullicin e intervalo
de ebullicin: 60 - 80 C Punto de
inflamacin: - 18 C.
Peligrosidad
Provoca vapores muy inflamables, irritacin
cutnea, perjudica la fertilidad si su uso no
es con seguridad. Txico para el medio
ambiente con efectos nocivos severos,

ALMINA

adems de ser cancergeno.

Propiedades
Es un slido polvo cristalino de color blanco
y de cierto olor caracterstico, insoluble en
agua y otros compuestos polares, adems
de un pH 9-10 y densidad a 20C: 3.6-3.9
g/cm3.

Se

usa

para

anlisis

en

cromatografa como fase adsorbente.

Peligrosidad
Puede producir irritacin leve si hay
inhalacin y/o ingestin. Al aadir agua
puede producir calentamiento modificando
su estabilidad.

2. OBSERVACIONES
Cromatografa de Capa Fina
Se prepara la papilla que consiste en una mezcla de slica con agua, se
observa que esta papilla es color blanco y de consistencia viscoso
lechoso.
Las 3 placas una vez bien lavadas y secadas, se les aadi la papilla
y se observ que exista uniformidad sin rastros de grumo o que se

rompa la consistencia de la papilla, al cabo de un rato se observ un

cierto brillo en las placas.
Las placas son llevadas

la

estufa

durante

70

minutos

aproximadamente, se observ que las placas se encontraban activadas,

listas para el desarrollo de la cromatografa.
Se observ que durante la siembra en las placas, mediante el uso del
capilar, a la 1era gota (punto) el tono del pigmento no era notorio, por lo
que se aadi 2 gotas (puntos) ms en el mismo punto.
En el desarrollo del 1er cromatograma, se us como solvente el ter de
petrleo y se observ un rastro verde largo que pertenece a la clorofila,
mientras que terminado ese trayecto, luego se observ una mancha
amarilla que perteneca al caroteno.
En el desarrollo del 2do cromatograma, se us como solvente la
acetona y se observ un rastro verde largo de bandas que pertenece a
la clorofila, mientras que no se observa mancha que corresponda al
caroteno. En este caso no se midi la distancia x.
En el desarrollo del 3er cromatograma, se us como solvente la mezcla
ter de petrleo-acetona 3:1 y se observ un rastro verde de la clorofila
ms pequeo en un primer instante comparado con el uso de ter de
petrleo puro, adems de una mancha amarilla que corresponde al
caroteno.
Cromatografa de Columna
Durante la instalacin de la columna de cromatografa, se coloc un
pedazo de algodn en la parte inferior, luego se observa que no existe
aire a la altura de la manguera luego de aadir el ter de petrleo,
adems se realiz 2 vertidos de petrleo, para realizar con cuidado el
escape de aire en la manguera con la llave.
Se observ que la almina es un polvo cristalino blanco, y que al
aadirlo (despus de aadido el ter de petrleo a la columna) en la
columna, se observa que ste cae de manera casi uniforme, sin
embargo se fue aadiendo con cuidado para mantener la uniformidad.
Luego se observ unas minsculas burbujas en el slido al inferior, sin
embargo se realiz golpes suaves y se uniformizo por completo la
almina en el ter de petrleo.
Se observa que al aadir posteriormente un poco de arena no existe
cambio visible alguno en el sistema. Esta arena debe estar siempre
humedecida con el solvente a usar.

 Cuando se aade la muestra (pigmento verde) al sistema, se observa

que la filtracin ocurre de manera lenta, sin embargo se controla
mediante la lnea de vaco. Al rato se deposita solucin amarilla plida
al tubo de ensayo que se encuentra dentro del kitasato. El solvente aqu
fue el ter de petrleo.
Despus de 2 ensayos seguidos con el solvente ter de petrleo, se
observa que la solucin obtenida en el tubo de ensayo es de pigmento
amarillo fuerte, que corresponde a los carotenos.
Al aadir la mezcla ter de petrleo-acetona al sistema, la filtracin da
una pigmentacin verde en el tubo de ensayo, este pigmento verde
corresponde al de la clorofila.

3. APENDICE
3.1.

Clculos de Rf CAROTENO

Rf =

Distancia recorrida por el caroteno

Distancia recorrida por el eluyente

DISTANCIA X

DISTANCIA Y

SOLVENTE

(Distancia

(Distancia

(ELUYENTE)

recorrida por el

recorrida por el

Caroteno)
1.2 cm

eluyente)
4.9 cm

0.245

4.9 cm

5.3 cm

0.925

ter de Petrleo
Mezcla ter de
Petrleo-Acetona
3:1
3.2.

Cromatografa en Papel
Es una tcnica barata y lenta en cromatografa adems de no ser
aplicable en todas las formas. Es una cromatografa de particin y
adsorcin en combinacin, donde la fase estacionaria es el agua liquida
que se absorbe en el papel, y la fase mvil es un solvente, en este caso
orgnico. Para evitar que el agua evapore, se cuelga el papel dentro de
una cmara de tal forma que la mancha (siembra) pueda ser irrigada
con la fase mvil sea hacia arriba (efecto de capilaridad) o hacia
abajo(efecto de gravedad). Cuando la fase mvil satura el papel en una

Rf

cierta distancia logrando la separacin cromatografa, se retira de la

cmara y se aade agentes reveladores durante el desarrollo del
cromatograma. El desarrollo de esta tcnica es similar al de la
cromatografa en capa fina.
3.3.

Cromatografa liquida en alta resolucin

Hay cuatro tipos bsicos de cromatografa en los que la fase mvil es
un lquido:
Cromatografa de reparto, para especies poco polares pero no
inicas de masa molecular < 104 g/mol.
Cromatografa de adsorcin o cromatografa lquido-slido, para
especies no polares, ismeros estructurales y grupos de
compuestos de masa molecular < 104 g/mol.
Cromatografa de intercambio inico, para especies inicas de
masa molecular < 104 g/mol.
Cromatografa de exclusin por tamao o cromatografa en
geles, para solutos con masa molecular >104 g/mol.
Teniendo estos tipos bsicos de cromatografa, se realizaron los
primeros ensayos de cromatografa en columna, donde el desarrollo se
realizaba hasta en horas y teniendo en cuenta la velocidad en la que el
soluto se eluye y la eficacia que daba la separacin de los componentes
de una muestra tanto de manera cualitativa como de manera
cuantitativa, resultaba de manera lenta el desarrollo, es por ello que se
procede a una mejora de la cromatografa lquida. La cromatografa
lquida de alta eficacia o HPLC es el mtodo ms sofisticado y moderno
de la cromatografa lquida, que utiliza partculas de fase estacionaria
para el interior de la columna con dimetros muy pequeos para
aumentar la eficiencia, en torno a 3-10 m. As, se ha conseguido
reducir el tamao de la columna a 10-30 cm de largo y 4-10 mm de
dimetro en la HPLC, y el tiempo necesario para la separacin, de
minutos a 1h.

3.4.

Aplicaciones Industriales de Cromatografa HPLC

El uso de la tcnica de la cromatografa HPLC permite buenas
separaciones e identificaciones de sustancias en un tiempo reducido y
eficaz. Generalmente es usado en la industria de alimentos como por
ejemplo:
Deteccin y cuantificacin de sacarina, benzoatos, cafena y
aspartame en refrescos.
Deteccin de ciclomato en jugos de fruta.
Separacin de steres de cidos grasos por fase inversa y con
argentizacin de columnas (Silicato de Al con Ag).
Separacin de Triglicridos por la longitud de la cadena y el
grado de insaturacin por fase inversa y detector de dispersin
luminosa, para el estudio de aceites y grasas adulteradas.
Determinacin del contenido de Vit A y sus precursores ( y
caroteno) en margarina y aceites de hgado por fase inversa.
Determinacin del contenido en Vit D en leche en polvo y
cereales por fase normal.
Sin embargo tambin se usa la tcnica de cromatografa en
aplicaciones como el anlisis de la sangre, en medicina farmacutica y
petrleo.

Biblio:
http://www.tierrasindustrialeshyd.com/pdf/msdsaluminaspsm.pdf
http://es.scribd.com/doc/19050563/Cromatografia-Principios-yAplicaciones#scribd
http://www.academia.edu/4376306/La_cromatografia_y_sus_aplicaciones_Bi
bliograf%C3%ADa_de_consulta_L%C3%ADquido_Gravedad_Reparto_Adsorci
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