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Intended Use
A)
B)
The anticoagulant used for sample collection can alter test results.
Reagent for the determination of the activated partial thromboplastin time (APTT) in citrated
human plasma.
Pathromtin* SL Reagent enables rapid screening for disorders of the intrinsic coagulation
system and sensitively detects Factors VIII and IX as well as the contact factors. In conjunction with deficient plasmas it enables the individual factors of the intrinsic system to be
quantified and permits diagnosis of hemophilia. In addition it can be used for monitoring
therapy with unfractionated heparin1.
The use of the APTT as a screening test for coagulation disorders is indicated particularly
prior to surgical interventions as this allows potential hemophiliacs to be diagnosed and
given special therapeutic protection.
The presence of non-specific inhibitors such as the lupus-like anticoagulant may prolong
the APTT, but this effect is variable and generally recognized as being related more to the
nature of the APTT reagent employed2.
Incubation of plasma with the optimal quantity of phospholipids and a surface activator leads
to activation of factors of the intrinsic coagulation system. The addition of calcium ions triggers
the coagulation process; the time to formation of a fibrin clot is measured.
Reagents
Note
Pathromtin* SL can be used manually or on automated coagulation analyzers. Siemens
Healthcare Diagnostics provides Reference Guides (Application Sheets) for several coagulation analyzers. The Reference Guides (Application Sheets) contain analyzer/assay
specific handling and performance information which may differ from that provided in these
Instructions for Use. In such a case, the information contained in the Reference Guides
(Application Sheets) supersedes the information in these Instructions for Use. Please also
consult the instruction manual of the instrument manufacturer!
Materials provided
10 x 5 mL, [REF] OQGS 29
20 x 5 mL, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200
Composition
Pathromtin* SL Reagent: Silicon dioxide particles (1.2 g/L), plant phospholipids (0.25 g/L),
sodium chloride, HEPES, pH 7.6
Preservative: Sodium azide (< 1 g/L).
Warnings and Precautions
1. For in-vitro-diagnostic use.
2. Contains sodium azide (< 1 g/L) as a preservative. Sodium azide can react with copper
or lead pipes in drain lines to form explosive compounds. Dispose of properly in accordance with local regulations.
Preparation of the Reagents
Pathromtin* SL Reagent must be gently inverted (5 to 8 times) to mix before first use and
must be used at room temperature (+15 to +25 C). Every 24 hours of use, the reagent must
be inverted to resuspend any sediment.
Calcium Chloride Solution 0.025 mol/L: warm to +37 C.
Storage and Stability
Stored unopened at +2 to +8 C Pathromtin* SL Reagent may be used by the expiry date
given on the label. Once opened Pathromtin* SL Reagent must be used within 2 weeks
(store at +2 to +25 C).
Information regarding on-board stability is specified in the Reference Guides (Application
Sheets) for the different coagulation analyzers.
Materials required but not provided
- Calcium Chloride (CaCl2) Solution 0.025 mol/L
- Control Plasma N, or Dade Ci-Trol Level 1 as control for the normal range
- Control Plasma P, or Dade Ci-Trol Level 2, or Dade Ci-Trol Level 3 as control for the
pathological/therapeutic range
- Pipettes for precise measurement of 0.1 mL
- Plastic test tubes
- Coagulation analyzer
To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/L) with 9 parts
venous blood, avoiding the formation of foam. Immediately centrifuge for no less than
15minutes at 1500 x g, remove the supernatant plasma and keep at +15 to +25 C until
use in the test (max. 4 hours). In the US please refer to the CLSI Document H21-A5, entitled
Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and
Performance of Coagulation Assays3.
Procedure
Manual Testing:
Pipette into a test tube pre-warmed to +37 C:
Citrated plasma
100 L
Pathromtin* SL Reagent
100 L
100 L
On adding the Calcium Chloride Solution start the stopwatch or timer on the coagulation
analyzer and measure the coagulation time.
OQGSG29E0503 (209) SD
Increased contact activation times may result in prolonged APTT in plasma containing heparin. It is imperative that the optimal heating-activation time of the Pathromtin* SL-plasma mixture be rigidly standardized5.
F)
Different test systems (i.e. manual, photo-optical, etc.) will exhibit variable heparin
sensitivity. Interchanging of test systems should be avoided.
G) Baseline data on the APTT of each patient before the start of therapy should be
established where feasible to determine the respective patient APTT as it relates to
the reference range established for the test in that laboratory.
H) Studies have shown variability in original estimates of the quality of unfractionated
heparin from different sources and different manufacturers. In-vivo reactivity varies
with the type of heparin administered, the metabolism of the individual and other coadministrated medications4,6.
I)
Because the APTT can vary with technique, method, equipment, reagent lot and heparin used, each laboratory must establish its own therapeutic ranges, or verify them
whenever one or more of the aforementioned variables is changed. This can be done
by simultaneously determining the APTT and the heparin concentration for samples
from patients receiving heparin therapy. A dose response curve can be calculated
from the data using regression analysis, and the APTT range corresponding to
a heparin concentration of 0.3 - 0.7 U/mL (by a factor Xa inhibition assay) can
be derived 4,6,7.
Expected Values
Reference intervals vary from laboratory to laboratory depending on the population served
and the technique, method, equipment and reagent lot used. Therefore, each laboratory
must establish its own reference intervals or verify them whenever one or more of the
aforementioned variables are changed.
In a study of ostensibly healthy individuals using a specific lot of Pathromtin* SL Reagent,
the following values were obtained:
Median
90 % Reference Interval
5th Percentile
95th Percentile
30.9 sec.
26.4 sec.
37.5 sec.
30.2 sec.
25.9 sec.
36.6 sec.
Reference ranges for other populations such as pediatric groups should also be established
where warranted.
Precision
Using opto-densitometric detection, precision studies were run over a 5 day period, twice per
day (n = 8 replicates per day), to total n = 40 for normal and pathological control plasmas
as well as a heparin plasma pool. Intra-assay precision was calculated from the individual
n = 4 precision values for the daily runs over the 5 days. Intra-assay precision ranged from
0.6 - 2.0 % CV, while the inter-assay precision ranged from 0.3 - 2.8 % CV.
Method Comparison
Results of a comparison of APTT determinations using Pathromtin* SL Reagent and another commercially available APTT reagent gave a correlation coefficient of 0.96 and a
y-intercept of 2.1 sec., and a slope of 0.99.
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Coagulation Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline Fifth Edition.
CLSI document H21-A5 (ISBN 1-56238-657-3). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400,
Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2008.
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with phenprocoumon or acenocoumarol: effects on prothrombin time, activated partial
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11. Boogen C, Niederau C, Reinauer H. Assessment of the influence of r-hirudin on
coagulometric factor assays. Ann Hematol 1999; 78 (Suppl): 73 (Abstract).
BCS, Ci-Trol and Dade are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics.
* Pathromtin is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex is a registered trademark of SYSMEX CORPORATION.
Zusammensetzung
Pathromtin* SL Reagenz: Siliciumdioxid-Partikel (1,2 g/l), pflanzliche Phospholipide (0,25 g/l),
Natriumchlorid, HEPES, pH 7,6
Konservierungsmittel: Natriumazid (< 1 g/l)
Warnungen und Vorsichtsmanahmen
1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung.
2. Enthlt Natriumazid (< 1 g/l) als Konservierungsmittel. Natriumazid kann mit kupferoder bleihaltigen Abflussrohren explosive Verbindungen eingehen. Entsorgen Sie bitte
ordnungsgem entsprechend den rtlichen Richtlinien.
Vorbereitung der Reagenzien
Pathromtin* SL muss vor erstmaligem Gebrauch durch 5- bis 8-maliges berkopfddrehen resuspendiert werden und wird bei Raumtemperatur (+15 bis +25 C) eingesetzt. Das
Resuspendieren muss alle 24 Stunden wiederholt werden, um Sedimentationseffekte zu
vermeiden!
Calciumchlorid-Lsung 0,025 mol/l auf +37 C erwrmen.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Pathromtin* SL Reagenz ist, ungeffnet bei +2 bis +8 C gelagert, bis zu dem auf dem
Etikett angegebenen Verfallsdatum verwendbar.
Nach dem erstmaligen ffnen ist Pathromtin* SL Reagenz 2 Wochen bei +2 bis +25 C
stabil.
Die Angaben zur Stabilitt auf dem Gert sind in den Referenzhandbchern (Applikationsvorschriften) fr die einzelnen Gerinnungsmessgerte aufgefhrt.
Zustzlich bentigte Materialien
- Calciumchlorid (CaCl2)-Lsung 0,025 mol/l
- Kontroll-Plasma N oder Dade Ci-Trol Level 1 als Kontrolle fr den Normalbereich
- Kontroll-Plasma P oder Dade Ci-Trol Level 2 oder Dade Ci-Trol Level 3 als Kontrolle
fr den pathologischen/therapeutischen Bereich
- Pipetten fr das genaue Abmessen von 0,1 ml
- Testrhrchen aus Plastik
- Gerinnungsmessgert
Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lsung (0,11 mol/l) mit 9 Teilen Venenblut sorgfltig unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort mindestens 15 Minuten bei
1500 x g zentrifugieren, berstehendes Plasma abhebern und bis zum Test bei +15 bis
+25 C aufbewahren (max. 4 Stunden). In den USA bitte auf das CLSI Dokument H21-A5
mit dem Titel Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation
Testing and Performance of Coagulation Assays beziehen3.
Testdurchfhrung
Manuelle Durchfhrung:
In ein auf +37 C vorgewrmtes Testrhrchen pipettieren:
Citratplasma
100 l
Pathromtin* SL Reagenz
100 l
Pathromtin* SL
Anwendungsbereich
Da die Halbwertszeit von unfraktioniertem Heparin in vivo ca. 1,5 Stunden betrgt,
ist der Zeitpunkt der Blutentnahme von entscheidender Bedeutung4. Verabreichtes
Heparin besitzt eine sofort einsetzende gerinnungshemmende Wirkung, die rasch
wieder abnimmt. Dieser Effekt ist besonders deutlich bei intermittierend verabreichten
Einzelinjektionen i. v. zu beobachten.
B)
C)
D)
E)
Eine verlngerte Kontaktaktivierung kann bei heparinhaltigem Plasma zur Verlngerung der APTT fhren. Die optimale Inkubationszeit des CephaloplastinPlasma-Gemischs ist daher einzuhalten5.
F)
G)
H)
I)
Reagenz zur Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) in menschlichem Citratplasma.
Diagnostische Bedeutung
Die Bestimmung der APTT mit Pathromtin* SL Reagenz ist ein schneller Suchtest auf Gerinnungsstrungen des endogenen Systems und erfasst empfindlich die Faktoren VIII und
IX sowie die Kontaktfaktoren. Zusammen mit Mangelplasmen ist Pathromtin* SL Reagenz
geeignet fr die Bestimmung von Einzelfaktoren des endogenen Systems und zur Diagnose
einer Hmophilie. Auerdem kann es zur berwachung der Therapie mit unfraktioniertem
Heparin benutzt werden1.
Die Messung der APTT ist indiziert als Suchtest auf Gerinnungsstrungen insbesondere vor
chirurgischen Eingriffen, um potenzielle Bluter unter besonderen therapeutischen Schutz
stellen zu knnen.
Die Anwesenheit von unspezifischen Inhibitoren, wie der des Lupus-hnlichen Antikoagulans, knnen die APTT verlngern. Dieser Effekt ist jedoch variabel und ist generell als ein
natrlicher Effekt des verwendeten APTT-Reagenz bekannt2.
Inkubation von Plasma mit der optimalen Menge an Phospholipiden und einem Oberflchenaktivator fhrt zur Aktivierung von Faktoren des endogenen Gerinnungssystems.
Durch Zugabe von Calcium-Ionen wird der Gerinnungsvorgang ausgelst; gemessen wird
die Zeit bis zur Bildung eines Fibringerinnsels.
Reagenzien
Hinweis
Pathromtin* SL kann manuell oder an automatischen Gerinnungsmessgerten verwendet
werden. Siemens Healthcare Diagnostics stellt fr verschiedene Gerinnungsmessgerte
Referenzhandbcher (Applikationsvorschriften) zur Verfgung. Diese enthalten gerte-/
testspezifische Informationen zur Abarbeitung und zu Leistungsdaten, die von den Informationen in dieser Gebrauchsanweisung abweichen knnen. In diesem Fall ersetzen die
Informationen in den Referenzhandbchern (Applikationsvorschriften) die Informationen in
dieser Gebrauchsanweisung. Bitte auch die Bedienungsanleitung des Gerteherstellers
beachten!
Inhalt der Handelspackungen
10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200
OQGSG29E0503 (209) SD
Interne Qualittskontrolle
Normalbereich:
Kontroll-Plasma N oder Dade Ci-Trol Level 1
Pathologischer Bereich: Kontroll-Plasma P oder Dade Ci-Trol Level 2 oder Dade
Ci-Trol Level 3
Zu Beginn eines Testlaufs, bei jedem Reagenzflaschenwechsel und mindestens einmal
whrend einer 8-Stunden-Schicht mssen zwei Kontrollen (eine im Normalbereich und eine
im pathologischen/therapeutischen Bereich) gemessen werden. Das Kontrollmaterial sollte
wie die Patientenplasmen behandelt werden. Jedes Labor sollte seinen eigenen Vertrauensbereich fr die Kontrollen ermitteln. Dieser betrgt in der Regel 2 bis 2,5 Standardabweichungen vom mittleren Kontrollwert. Liegen die Kontrollwerte auerhalb des Vertrauensbereichs, sind die Kontrollen, Reagenzien und das Gert zu berprfen. Es wird
empfohlen, vor der Ausgabe von Patientenwerten alle Manahmen zu dokumentieren, die
zur Feststellung und Behebung des Problems ergriffen wurden. Bei jeder neuen Reagenzien- oder Kontrollencharge sollten neue Kontrollbereiche definiert werden.
Ergebnisse
ber Strungen der APTT wird in der Literatur berichtet8-10. Therapeutische Dosen von Hirudin oder anderen direkten Thrombininhibitoren knnen zu verlngerten Gerinnungszeiten
fhren11. Die Ergebnisse knnen auerdem durch das gewhlte Antikoagulans (z. B. Oxalat
anstelle von Citrat) beeinflusst werden, sowie durch die Beschaffenheit der Probe (z. B. hmolytisch, lipmisch, knstliche Ernhrung, usw.), welche insbesonders bei der optischen
Bestimmung der APTT von Bedeutung ist. Eine abnahmebedingte Voraktivierung der Probe
kann zu falschen Ergebnissen fhren. Im Abschnitt ber Probennahme und -handhabung
des CLSI Dokuments H21-A5 wird empfohlen, Testrhrchen mit nicht-benetzbarer Oberflche (z. B. Plastik) anstelle von Glasrhrchen einzusetzen.
Siemens hat den Einsatz dieser Reagenzien auf verschiedenen Analysengerten auf optimale Produktleistung und Einhaltung der Produktspezifikationen berprft. Vom Benutzer
vorgenommene nderungen werden von Siemens nicht untersttzt, da sie die Leistung des
Systems und die Testergebnisse beeinflussen knnen. Es liegt in der Verantwortung des
Benutzers, nderungen an diesen Anleitungen oder die Verwendung dieser Reagenzien
auf anderen als in den Applikationsvorschriften von Siemens oder diesen Gebrauchsanweisungen genannten Analysengerten zu validieren.
Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten,
dem klinischen Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden.
Referenzbereiche
90 % Referenzintervall
5. Perzentile
95. Perzentile
30,9 sec.
26,4 sec.
37,5 sec.
30,2 sec.
25,9 sec.
36,6 sec.
Fr andere Kollektive, wie z. B. pdiatrische Patienten, sollten gegebenenfalls eigene Referenzbereiche ermittelt werden.
Przision
Mit einem opto-densitometrischen Messverfahren wurden Przisionsuntersuchungen
an normalen und pathologischen Plasmen, sowie einem Heparin-Plasmapool, ber
5 Tage, zweimal tglich (n = 8 Bestimmungen pro Tag), mit insgesamt 40 Bestimmungen
durchgefhrt. Der Variationskoeffizient in der Serie wurde aus den einzelnen 4-fach-Bestimmungen berechnet. Er lag zwischen 0,6 und 2,0 %, whrend der Variationskoeffizient von
Tag zu Tag zwischen 0,3 und 2,8 % lag.
Methodenvergleich
Bei einem Vergleich von APTT-Bestimmungen mit Pathromtin* SL Reagenz und einem
anderen APTT-Reagenz ergab sich ein Korrelationskoeffizient von 0,96 bei einem y-Achsenabschnitt von 2,1 sec. und einer Steigung von 0,99.
Literatur
Pathromtin* SL
Domaine dutilisation
Ractif pour la dtermination du Temps de Cphaline Activ (TCA) dans le plasma citrat
humain.
La dtermination du TCA l'aide de Ractif Pathromtin* SL est un test de dpistage rapide des troubles du systme endogne de la coagulation, sensible aux Facteurs VIII, IX, et
aux facteurs de la phase contact. Utilis en association avec des plasmas exempts, Ractif
Pathromtin* SL permet le dosage des diffrents facteurs du systme endogne de la coagulation, ainsi que le diagnostic d'hmophilie. Il peut galement tre utilis pour la surveillance
d'un traitement par hparine non fractionne1.
La dtermination du TCA est indique comme test de dpistage des troubles de la coagulation, en particulier avant une intervention chirurgicale, afin de pouvoir prendre les mesures
thrapeutiques appropries chez les patients susceptibles de faire une hmorragie.
La prsence dinhibiteurs non spcifiques, tel lanticoagulant de type lupus, peut allonger le TCA, mme
si cet effet est variable et gnralement considr comme li la nature du ractif TCA utilis2.
3
Ractifs
Remarque
Pathromtin* SL peut tre utilis manuellement ou sur un appareil automatis de coagulation. Siemens Healthcare Diagnostics propose des guides de rfrence (fiches dapplication) pour plusieurs analyseurs de coagulation. Les Guides de rfrence (fiches
dapplication) contiennent des informations sur les performances et lutilisation spcifique
des tests sur les analyseurs, qui peuvent diffrer de celles mentionnes dans la prsente
notice. Le cas chant, les informations contenues dans les Guides de rfrence (fiches
dapplication) annulent et remplacent celles contenues dans la prsente notice. Veuillez galement, consulter le manuel de formation du fabricant de l'analyseur!
Contenu des coffrets
10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200
Composition
Ractif Pathromtin* SL : particules de dioxyde de silicium (1,2 g/l), phospholipides vgtaux (0,25 g/l), chlorure de sodium, HEPES, pH 7,6
Agent de conservation : azide de sodium (< 1 g/l)
Mises en garde et prcautions demploi
1. Ne doit tre employ que pour un usage in vitro.
2. Contient de lazide de sodium (< 1 g/l) comme conservateur. L azide de sodium peut
ragir avec les tuyaux dvacuation en cuivre ou en plomb et former des composs
explosifs. Lvacuer conformment aux rglementations locales.
Prparation des ractifs
Avant son premier emploi, remettre le Ractif Pathromtin* SL en suspension en retournant
le flacon 5 8 fois, et lutiliser la temprature ambiante (+15/+25 C). La remise en suspension doit tre rpte toutes les 24 heures pour viter tout effet de sdimentation!
Porter la Solution de chlorure de calcium 0,025 mol/l +37 C.
Stabilit et conditions de conservation
Conserv non ouvert +2/+8 C, Ractif Pathromtin* SL peut tre utilis jusqu la date
dexpiration indique sur ltiquette.
Aprs premire ouverture, il reste stable 2 semaines +2/+25 C.
Les donnes de stabilit sur analyseur sont indiques dans les guides de rfrence (fiches
d'application) des diffrents analyseurs de coagulation.
Autres ractifs ncessaires
- Solution de chlorure de calcium (CaCl2) 0,025 mol/l
- Plasma de contrle N ou Dade Ci-Trol niveau 1 comme contrle dans le domaine normal
- Plasma de contrle P ou Dade Ci-Trol niveau 2 ou Dade Ci-Trol niveau 3 comme
contrle dans le domaine pathologique/thrapeutique
- Pipettes pour une distribution exacte de 0,1 ml
- Tubes essai en plastique
- Automate de coagulation
Pour obtenir les plasmas, prlever 1 volume de solution de citrate de sodium (0,11 mol/l) avec
9 volumes de sang veineux, et mlanger avec prcaution en vitant la formation de mousse.
Centrifuger aussitt pendant au moins 15 min au moins 1500 x g, prlever le plasma surnageant, et le conserver +15/+25 C (max. 4 heures) jusquau test. Aux USA, se reporter au
document CLSI H21-A5 intitul Collection, Transport and Processing of Blood Specimens
for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays3.
Ralisation du test
Mthode manuelle :
Distribuer dans un tube essai prchauff +37 C :
Plasma citrat
100 l
Ractif Pathromtin* SL
100 l
BCS, Ci-Trol und Dade sind Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics.
OQGSG29E0503 (209) SD
Intrt diagnostique
Principe de la mthode
100 l
B)
F)
Le TCA pouvant varier selon les techniques de travail, les mthodes, les analyseurs,
les lots de ractif et lhparine utiliss, chaque laboratoire doit dterminer ses propres domaines thrapeutiques, et les vrifier aprs chaque changement dun ou de
plusieurs de ces paramtres. Pour ce faire, mesurer simultanment un TCA et une
concentration dhparine sur des chantillons de patients sous traitement lhparine. Une analyse de rgression permet de dterminer un rapport dose-effet ainsi
que le domaine de TCA correspondant une concentration dhparine comprise
entre 0,3 et 0,7 U/ml (obtenue par linhibition du facteur Xa) 4,6,7.
Domaines de rfrence
Les intervalles de rfrence varient dun laboratoire lautre selon les populations tudies,
ainsi que selon les techniques de travail, les mthodes, les appareils et les ractifs utiliss.
Aussi chaque laboratoire doit-il dterminer ses propres domaines de rfrence en fonction
des techniques de travail et des mthodes quil applique, ainsi que des appareils et des
lots de ractifs quil utilise, et vrifier ses domaines de rfrence aprs tout changement
dun des paramtres.
Dans le cadre dune tude effectue sur des sujets apparemment sains, les valeurs suivantes ont t obtenues avec un lot spcifique de Ractif Pathromtin* SL:
mdiane
90 % de lintervalle de rfrence
5me percentile
95me percentile
30,9 sec
26,4 sec
37,5 sec
30,2 sec
25,9 sec
36,6 sec
Pour dautres collectifs de patients, par ex. pdiatriques, il peut tre ncessaire de dterminer un domaine de rfrence spcifique.
Caractristiques du test
Prcision
Une tude de prcision a t effectue selon un procd photo-densitomtrique sur des
plasmas normaux et pathologiques, ainsi que sur un pool de plasmas hparins. Les
chantillons ont t tests sur 5 jours, deux fois par jour (n = 8 dosages par jour). Un total
de 40 dosages a t effectu. Les coefficients de variation de rptabilit ont t calculs
partir des dosages en quadruple, et trouvs entre 0,6 et 2,0 %. Les coefficients de variation
de reproductibilit ont t trouvs entre 0,3 et 2,8 %
Pathromtin* SL
Uso Previsto
Reagente per la determinazione del tempo di tromboplastina parziale attivato (APTT) nel
plasma citratato umano.
Riassunto e Spiegazione
Il Reagente Pathromtin* SL permette una rapida valutazione dei disturbi legati al sistema
endogeno della coagulazione e rivela con sensibilit deficit dei fattori VIII, IX e dei fattori di
contatto. Utilizzato con plasmi carenti, il Reagente Pathromtin* SL adatto per la determinazione dei singoli fattori della via intrinseca e per la diagnosi di emofilia. Oltre a ci, pu essere
usato per monitorare la terapia con eparina non frazionata1.
La misura dell'APTT indicata per rilevare potenziali soggetti emofilici, in modo da sottoporli ad un adeguato trattamento terapeutico prima di un intervento chirurgico.
La presenza di inibitori non-specifici, come lanticoagulante lupus-like, possono prolungare
lAPTT. Questo effetto, per, variabile e generalmente noto come un effetto collegato alla
natura del reagente APTT utilizzato2.
L'incubazione del plasma con una quantit ottimale di fosfolipidi e di un attivatore di superficie determina l'attivazione dei fattori del sistema endogeno della coagulazione. Laggiunta
di ioni calcio innesca il processo della coagulazione; viene quindi misurato il tempo di formazione del coagulo di fibrina.
Reagenti
Nota
Pathromtin* SL pu essere utilizzato manualmente o su analizzatori per coagulazione
automatici. Siemens Healthcare Diagnostics fornisce Guide di Riferimento (Protocolli
Applicativi) per diversi analizzatori per coagulazione. Le Guide di riferimento (Protocolli
Applicativi) contengono informazioni sulla manipolazione e sulle prestazioni specifiche per
i diversi analizzatori/test che possono essere diverse da quelle fornite nelle presenti Istruzioni per l'uso. In tal caso, le informazioni contenute nelle Guide di riferimento (Protocolli
Applicativi) sostituiscono le informazioni contenute nelle presenti Istruzioni per luso. Consultare anche il manuale di istruzioni del produttore dello strumento!
Materiali forniti
10 x 5 mL, [REF] OQGS 29
20 x 5 mL, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200
Composizione
Reagente Pathromtin* SL: particelle di biossido di silicio (1,2 g/L), fosfolipidi vegetali
(0,25 g/L), cloruro di sodio, HEPES, pH 7,6
Conservante:
sodio azide (< 1 g/L)
Avvertenze e Precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in-vitro.
2. Contiene sodio azide (< 1 g/L) come conservante. La sodio azide pu reagire con le
tubazioni in rame o piombo nelle linee di scarico formando composti esplosivi. Provvedere allo smaltimento in modo appropriato e secondo le normative locali.
Preparazione dei Reagenti
Il Reagente Pathromtin* SL deve essere delicatamente capovolto (da 5 a 8 volte) per
miscelarlo prima del primo utilizzo e deve essere utilizzato a temperatura ambiente
(da +15 a +25 C). Ogni 24 ore di utilizzo, il reagente deve essere capovolto per risospendere leventuale sedimento.
Riscaldare la soluzione di cloruro di calcio 0,025 mol/L a +37 C.
Conservazione e Stabilit
Prima dell'apertura il Reagente Pathromtin* SL pu essere utilizzato fino alla data di
scadenza indicata sulletichetta del flacone se conservato, sigillato, a +2 a +8 C. Dopo
la prima apertura il Reagente Pathromtin* SL stabile per 2 settimane se conservato a
+2 a +25 C.
Le informazioni riguardanti la stabilit on-board sono specificate nelle Reference Guides
(Protocolli Applicativi) per i diversi analizzatori per coagulazione.
Materiale necessario, ma non fornito
- Soluzione di Calcio Cloruro (CaCl2) 0,025 mol/L
- Control Plasma N, oppure Dade Ci-Trol Livello 1 come controllo nellintervallo normale
- Control Plasma P, oppure Dade Ci-Trol Livello 2, oppure Dade Ci-Trol Livello 3
come controllo per lintervallo patologico
- Pipette di precisione da 0,1 mL
- Provette di plastica
- Analizzatore per coagulazione
Littrature
BCS, Ci-Trol et Dade sont des marques commerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex est une marque dpose de SYSMEX CORPORATION.
OQGSG29E0503 (209)
dition juin 2010
OQGSG29E0503 (209) SD
Procedura
Procedura Manuale
Distribuire in una provetta preriscaldata a +37 C:
Mediana
Plasma citratato
100 L
Reagente Pathromtin* SL
100 L
100 L
Dopo laggiunta della soluzione di cloruro di calcio azionare il cronometro o il dispositivo di misura sull'analizzatore per coagulazione e determinare il tempo di formazione del coagulo.
Monitoraggio della terapia con eparina non frazionata mediante APTT
Quando si utilizza l'APTT per questo scopo, occorre tenere in considerazione i fattori che
influenzano il test. Le considerazioni generali sono elencate qui di seguito.
A)
B)
L'orario del prelievo importante poich l'emivita in-vivo dell'eparina non frazionata
di circa 1,5 ore4. Quando viene somministrata, ha un immediato effetto anticoagulante, ma il grado di tale effetto diminuisce rapidamente nel tempo. Ci particolarmente evidente per singole somministrazioni venose intervallate.
L'anticoagulante utilizzato durante il prelievo del campione pu alterare i risultati
del test.
F)
Poich il valore di APTT pu variare a seconda della tecnica, del metodo, della
strumentazione, del lotto di reagente e dell'eparina utilizzati, ogni laboratorio deve
stabilire i propri intervalli terapeutici, oppure verificare tali intervalli al variare di una o
pi delle condizioni citate. Ci pu essere ottenuto determinando simultaneamente
l'APTT e la concentrazione di eparina su campioni di pazienti in terapia eparinica.
possibile estrapolare dai dati una curva dose-risposta applicando l'analisi della
regressione e determinare l'intervallo di APTT corrispondente a una concentrazione
di eparina pari a 0,3 - 0,7 U/mL (tramite un test di inibizione del fattore Xa)4,6,7.
Le interferenze per lAPTT sono descritte nei riferimenti bibliografici8-10. Dosi terapeutiche di
irudina o di altri inibitori diretti della trombina possono allungare i tempi di coagulazione11.
La scelta dellanticoagulante (es., ossalato invece di citrato) e la condizione dei campioni
(es. emolizzati, lipemici, nutrizione parenterale, ecc.) possono influenzare i risultati. Lultima
condizione vale in particolare per le misurazioni dellAPTT con strumentazione ottica. La
preattivazione del campione a causa della tecnica di prelievo carente pu portare a falsi
risultati. In riferimento alla sezione Gestione e Raccolta dei Campioni del documento CLSI
H21-A5 si raccomanda di utilizzare provette con parete idrofobica (es. plastica) piuttosto
che provette di vetro.
Siemens ha validato luso di questi reagenti su vari analizzatori per ottimizzare le prestazioni
e rispettare le specifiche dei prodotti. Le modifiche definite dallutente non sono supportate
da Siemens poich possono influire sulle prestazioni del sistema e sui risultati del test.
Pertanto responsabilit dellutente validare tutte le modifiche apportate a queste istruzioni,
luso dei reagenti su analizzatori diversi da quelli inclusi nei fogli di istruzioni o nelle istruzioni
duso fornite da Siemens.
I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del paziente, del quadro clinico e valutando contestualmente lesito di altri accertamenti.
Valori Attesi
Gli intervalli di riferimento variano da laboratorio a laboratorio secondo la popolazione affluente e secondo la tecnica, il metodo, la strumentazione ed il lotto di reagente utilizzati.
Pertanto, ogni laboratorio deve definire i propri intervalli di riferimento o verificarli qualora
cambi una o pi delle variabili menzionate.
OQGSG29E0503 (209) SD
95 Percentile
30,9 sec.
26,4 sec.
37,5 sec.
30,2 sec.
25,9 sec.
36,6 sec.
Anche gli intervalli di riferimento per altre popolazioni quali i gruppi pediatrici devono essere
definiti ove richiesto.
Bibliografia
Pathromtin* SL
Campos de aplicacin
Significado diagnstico
La determinacin del APTT con Reactivo Pathromtin* SL es un test rpido para la bsqueda
de anomalas del sistema endgeno de la coagulacin, que adems registra con precisin
tanto los factores VIII y IX como los factores de contacto. Pathromtin* SL, en colaboracin con
plasmas deficientes, es apropiado para la determinacin individual de los factores del sistema
endgeno y para el diagnstico de la hemofilia. Adems, tambin puede emplearse para el
control de la terapia con heparina no fraccionada1.
La medida de APTT est indicada como prueba de deteccin de los trastornos de la coagulacin, especialmente antes de intervenciones quirrgicas, con el fin de poder someter a
tratamientos preventivos a posibles hemoflicos.
La presencia de inhibidores no especficos, como los anticuoagulantes similares al lpico, puede prolongar el APTT. Este efecto es, sin embargo, variable y es generalmente reconocido como un efecto
ms relacionado con la naturaleza del reactivo APTT empleado2.
La incubacin del plasma con cantidades ptimas de fosfolpidos y un activador de superficie conduce a una activacin de los factores del sistema endgeno de la coagulacin.
Mediante la agregacin de iones de calcio se desencadena el proceso de coagulacin; se
mide el tiempo transcurrido hasta la formacin de un cogulo de fibrina.
Reactivos
Nota
Pathromtin* SL puede utilizarse con mtodos manuales o en analizadores de coagulacin
automticos. Siemens Healthcare Diagnostics pone a su disposicin Guas de Referencia (Hojas de Aplicacin) para varios analizadores de coagulacin. Las Guas de
Referencia (Hojas de aplicacin) contienen informacin especfica sobre el manejo y el
procedimiento correspondiente a los analizadores/ensayos que puede diferir de la ofrecida
en estas Instrucciones de utilizacin. En ese caso, la informacin contenida en las Guas
de Referencia (Hojas de Aplicacin) reemplaza la informacin de las presentes Instrucciones de utilizacin. Le recomendamos que consulte tambin el manual de instrucciones del
fabricante.
Contenido de los envases comerciales
10 x 5 ml, [REF] OQGS 29
20 x 5 ml, [REF] OQGS 35, [REF] 10484200
Composicin
Reactivo Pathromtin* SL: Partculas de bixido de silicio (1,2 g/l), fosfolpidos vegetales
(0,25 g/l), cloruro de sodio, HEPES, pH 7,6
Medio de conservacin: Azida de sodio (< 1 g/l)
Advertencias y medidas de seguridad
1. Slo para ser utilizado en diagnsticos in vitro.
2. Contiene azida sdica (< 1 g/l) como conservante. La azida sdica puede reaccionar con las
tuberas de cobre y plomo y formar azidas metlicas explosivas. Cuando se eliminen los reactivos, enjuagar con agua abundante para evitar la acumulacin de azidas, si la eliminacin es
a travs de los desages sanitarios de acuerdo con la normativa vigente.
Preparacin de reactivos
El reactivo Pathromtin* SL, antes de usarse por primera vez, debe resuspenderse invertiendo el frasco de 5 a 8 veces y debe ser usado a temperatura ambiente (entre +15 y +25 C).
La resuspensin se debe repetir cada 24 horas, para evitar efectos de sedimentacin.
Calentar la solucin de cloruro de calcio 0,025 mol/l a +37 C.
Estabilidad y almacenaje
El Reactivo Pathromtin* SL, conservado cerrado entre +2 y +8 C, es estable hasta la fecha
de vencimiento dada en la etiqueta.
Una vez abierto Reactivo Pathromtin* SL es estable durante 2 semanas si se mantiene
entre +2 y +25 C.
Los datos de estabilidad estn especificados en el manual de referencia (hojas de aplicacin) para cada uno de los analizadores de coagulacin.
Materiales adicionales necesarios, pero no incluido
- Solucin de cloruro de calcio (CaCl2) 0,025 mol/l
- Plasma control N o Dade Ci-Trol nivel 1 como control para el intervalo normal
- Plasma control P o Dade Ci-Trol nivel 2 o Dade Ci-Trol nivel 3 como control para
los intervalo patolgico/teraputico
- Pipetas para la medida exacta de 0,1 ml
- Tubos de ensayo de plstico
- Analizador de coagulacin
Mtodo
Procedimiento manual:
En un tubo de ensayo precalentado a +37 C, pipetear:
Plasma citratado
100 l
Reactivo Pathromtin* SL
100 l
Resultados
Los resultados de las medidas se deben dar en segundos.
Rangos de referencia
Intervalos de referencia
El intervalo de referencia vara de laboratotio a laboratorio, dependiendo de la poblacin
investigada y de las tcnicas de trabajo, mtodos, instrumentos y lotes de referencia utilizados. Por esta razn, cada laboratorio debe determinar sus propios intervalos de referencia
basados en las correspondientes tcnicas de trabajo, mtodos, instrumentos y lotes de
referencia utilizados, como tambin el verificar el intervalo de referencia al cambiar alguno
de los parametros arriba mencionados.
En un estudio realizado con individuos presuntamente sanos, para un lote especfico del
reactivo Pathromtin* SL , se obtuvieron los siguientes resultados:
Mediana
100 l
El tiempo de la extraccin es importante, puesto que la semivida in-vivo de la heparina no fraccionada es, aproximadamente, de 1,5 horas4. Tras su administracin,
posee un efecto anticoagulante de accin inmediata que, sin embargo, disminuye
rpidamente con el paso del tiempo. Este efecto se observa claramente cuando se
inyecta por va intravenosa en dosis nica y aislada.
B)
El anticoagulante utilizado para la extraccin de la sangre puede alterar los resultados de la prueba.
C) El calcio plaquetario, contenido en los grnulos de los trombocitos, es un factor neutralizante de la heparina y puede ser liberado por agregacin o alteracin trombocticas.
Para evitar este tipo de procesos in-vitro, las muestras deben ser extradas con sumo
cuidado. Dado que las bajas temperaturas desencadenan la agregacin plaquetaria y
la liberacin del calcio plaquetario, las muestras con heparina deben ser centrifugadas a temperatura ambiente.
D) El control de la terapia con heparina no fraccionada mediante la determinacin del
TTPa depende del tiempo de anlisis. Si se retrasa el anlisis de las muestras,
los resultados de las determinaciones del TTPa se alargarn. Por lo tanto, es
esencial que el anlisis de todas las muestras se realice a la mayor brevedad
posible.
E)
En plasmas que contengan heparina puede producirse una prolongacin del TTPa
debido al aumento del tiempo de la activacin de contacto. Es esencial que se normalice de manera rigurosa el tiempo ptimo de activacin por calor de la mezcla
Pathromtin* SL-plasma5.
F)
Los diferentes mtodos de anlisis (p. ej., manual, luminiscencia, etc.) presentan
diferente sensibilidad a la heparina. Por lo tanto, no deben alternarse.
Ya que el TTPa puede variar dependiendo de las tcnicas de trabajo, los mtodos,
los instrumentos, el lote del reactivo y de la heparina utilizados, cada laboratorio
debe determinar sus propios intervalos teraputicos o verificarlos cada vez que se
modifique alguno de los parmetros mencionados anteriormente. Esto se puede
llevar a cabo mediante la determinacin simultnea del TTPa y la concentracin
de heparina en muestras de pacientes sometidos a un tratamiento con heparina.
Por medio de un anlisis de regresin de los datos se puede calcular una curva
de dosis-respuesta y extrapolar el intervalo del TTPa correspondiente a una
concentracin de heparina de 0,3 a 0,7 U/ml (determinada por una prueba de
inhibicin del factor Xa) 4,6,7.
95. percentil
30,9 seg.
26,4 seg.
37,5 seg.
30,2 seg.
25,9 seg.
36,6 seg.
Para otros colectivos, como por ej., pacientes peditricos, se debe determinar, en cada
caso, su propio intervalo de referencia.
Caractersticas de la prueba
Precisin
Con un procedimiento de medicin optodensitomtrico se realizaron medidas de precisin
de plasmas normales, patolgicos y de un pool de plasmas heparnicos durante 5 das,
dos veces al da (n = 8 determinaciones por da), con un total de 40 determinaciones. El
coeficiente de variacin en la serie se obtuvo a partir de los valores de una determinacin
cudruple, dando un resultado entre 0,6 y 2,0 %, mientras el coeficiente de variacin da
a da fue entre 0,3 y 2,8 %.
Comparacin de mtodos
Al comparar una determinacin de APTT con Reactivo Pathromtin* SL y una con otro reactivo para APTT se encontr para Reactivo Pathromtin* SL un coeficiente de correlacin de
0,96 para un corte de eje-y de 2,1 seg. y una pendiente de 0,99.
Bibliografa
Pathromtin* SL
Campo de aplicao
Reagente para determinao do tempo de tromboplastina parcial activado (TTPA) em plasmas humanos citratados.
Significado diagnstico
A determinao do TTPA com Reagente Pathromtin* SL um teste rpido para deteco de transtornos do sistema intrnseco da coagulao e que detecta de modo sensvel os factores VIII e IX,
assim como os factores de contacto. Usado com plasmas deficitrios, Reagente Pathromtin* SL
um instrumento apropriado para a determinao de factores singulares do sistema intrnseco e o
diagnstico da hemofilia. Alm disso, pode ser utilizado para o controlo da terapia heparnica.
Pode ainda ser usado para monitorizar a terapia com heparina no fraccionada1.
A presena de inibidores no especficos, como os anticoagulantes lpicos, pode prolongar o TTPA,
mas este efeito varivel e geralmente atribuido natureza do reagente de TTPA utilizado2.
Princpio metodolgico
A incubao do plasma com quantidades ptimas de fosfolpidos e um activador de superfcie leva a uma activao dos factores do sistema intrnseco da coagulao. Mediante a
agregao de ies de clcio desencadeado o processo de coagulao. Mede-se o tempo
transcurso at formao de um cogulo de fibrina.
Reagentes
Nota
Pathromtin* SL pode ser utilizado manualmente ou em analisadores de coagulao automatizados. A Siemens Healthcare Diagnostics fornece guias de consulta (folhas de
instrues de aplicao) para vrios analisadores de coagulao. Os guias de consulta
(folhas de instrues de aplicao) contm informaes especficas sobre o manuseamento e desempenho do analisador/teste que podem diferir das fornecidas nestas instrues.
Numa situao destas, as informaes contidas nos guias de consulta (folhas de instrues
de aplicao) substituem as informaes nestas instrues. Consulte ainda o manual de
instrues do fabricante do aparelho!
Procedimento
Plasma citratado
100 l
Reagente Pathromtin* SL
100 l
B)
F)
Uma vez que os diferentes mtodos de teste (p. ex., manual, foto-ptico) possuem sensibilidades heparina diferentes, dever evitar-se a mudana do mtodo utilizado.
G) Para a determinao do APTT especfico do paciente, o valor bsico APTT do paciente dever ser determinado e comparado com o intervalo de referncia prprio do
laboratrio, de preferncia antes do incio da terapia.
H) Estudos demonstraram que as caractersticas da heparina no fraccionada proveniente de diferentes fabricantes e fontes divergem das especificaes admitidas originalmente. A reactividade in-vivo depende do tipo da heparina administrada, do metabolismo do paciente e dos outros medicamentos utilizados simultaneamente4,6.
I)
Como o APTT pode variar consoante a tcnica, mtodo, equipamento, lote de reagentes e heparina utilizados, cada laboratrio deve estabelecer os seus prprios
intervalos teraputicos ou verific-los sempre que uma ou mais das variveis acima mencionadas for alterada. Isto pode ser feito determinando simultaneamente o
APTT e a concentrao de heparina em amostras de pacientes em tratamento com
heparina. A curva de resposta dose pode ser calculada a partir dos dados que
utilizam a anlise de regresso e o intervalo de APTT correspondente a uma
concentrao de heparina de 0,3 0,7 U/ml (por um teste de inibio do factor Xa)
pode ser calculado 4,6,7.
OQGSG29E0503 (209) SD
Resultados
O resultado da medio expresso em segundos.
Limitaes do procedimento
Intervalos de referncia
Execuo manual:
Pipetar para um tubo de ensaio pr-aquecido a +37 C:
A)
Caractersticas do teste
Preciso
Com um processo de medio optodensitomtrico foram efectuadas medies de preciso
de plasmas normais, patolgicos e de um pool de plasmas heparnicos durante 5 dias, 2 vezes por dia (n = 8 determinaes por dia), com um total de 40 determinaes. Os coeficientes
de variao intra-assay foram calculados a partir de cada uma das determinaes qudruplas
e obtiveram-se resultados compreendidos entre 0,6 e 2,0 %, enquanto que, para os coeficientes de variao inter-assay, foram achados valores situados entre 0,3 e 2,8 %.
Comparao de mtodos
A comparao de uma determinao do TTPA com Reagente Pathromtin* SL com outra efectuada com outro reagente para TTPA revelou para Reagente Pathromtin* SL um coeficiente de correlao de 0,96 com uma interseco do eixo y de 2,1 seg. e um coeficiente angular de 0,99.
Bibliografia