MEDIO DE CULTIVO

Karen conrado
Uberney Agudelo Chalarca
Shirley Acosta Martinez

INSTRUCTOR
DAYANA OSMAN

Introduccion

Karen conrado
Uberney Agudelo Chalarca
Shirley Acosta Martinez

Un medio de cultivo consiste en la solucion que cuenta con los nutrientes necesarios
para permitir el crecimiento deINSTRUCTOR
microorganismo eidentificar los macro y
micronutrientes del cultivo.

DAYANA OSMAN

Medios De Cultivo

Son soluciones estriles que tienen macro y micronutrientes y sustancias que permiten
el crecimiento de organismos, es muy esencial para el laboratorio ya que se lleva
acabo las condiciones favorables que son ptimas para el desarrollo del crecimiento del
cultivo.
Los medios de cultivos se clasifican por medio

Origen
Consistencia
Composicin
Utilizacin

Segn su origen
Naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica
no se conoce exactamente.
Sintticos: son los medios que contienen una composicin qumica definida
cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
Semisintticos: son los sintticos a los que se les aaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.
Segn su consistencia
Medios lquidos: El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo,
compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza
fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin
bacteriana de una determinada concentracin.
Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un
agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar.
Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a
stos un agente solidificante en una proporcin menor que para preparar
medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las
bacterias.

Segn su composicin
Segn las sustancias que entren a formar parte en su composicin, los medios de
cultivo pueden ser clasificados en:
Comunes O Universales: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de
los microorganismos poco existentes. Es el medio ms frecuentemente utilizado
para mantener colonias microbianas. Por ejemplo: agar comn o caldo comn.
Enriquecidos: estn compuestos de un media base como apoyo del
crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como
suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, lquido asctico, etc. Se
utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
Selectivos: son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las
condiciones fsicas del medio o aadiendo o suprimiendo componentes qumicos
especficos con el fin de inhibir el crecimiento de especies qumicas cuyo
crecimiento no interesa. Este tipo de medio slo permite el crecimiento de un

grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y

aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar saladomanitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos).
Entre los factores selectivos que alteran las condiciones del medio tenemos:

Cambio de pH: por ejemplo agregando cido actico para favorecer el

crecimiento de Lactobacillus (pH final: 5,4 que es hostil par la mayora de las
especies que crecen entre 6,5 y 7,2). Los hongos crecen entre pH 4 y 6 y S.
faecalis a pH 9,6.
Cambio de temperatura: la mayora de las bacterias crece ptimamente
entre 20 C y 40 C. Los cultivos tpicos de S. Faecalis requieren 60 C de
temperatura y los de Listeria son capaces de desarrollarse y crecer a 4 C.
Alteraciones osmticas: se acrecientan las propiedades osmticas un medio
con el agregado de cloruro de sodio. Estos medios intensifican la seleccin de
bacterias halfilas como Staphylococcus spp. (7,5%).
Ajuste en la tensin de oxgeno: es importante en la seleccin de aerobios
y anaerobios.
Ajuste en la tensin de anhdrido carbnico: muchos patgenos
importantes pueden ser cultivados a menos que se eleve la tensin ms all de
la atmosfrica.
Entre los factores que inhiben el crecimiento de bacterias indeseables tenemos:

Antispticos: sustancias antibacterianas inespecficas que pueden actuar

como inhibidores. Por ejemplo: el medio de cultivo comercial S - S (Salmonella Shigella) que contiene verde brillante (inhibe las bacterias grampositivas) y
sales biliares (que inhiben un gran nmero de gramnegativas menos
enterobacterias). Otro ejemplo es el medio de Mc Conkey que contiene cristal
violeta (inhibe las grampositivas pero no las enterobacterias)
Antibiticos: sustancias antibacterianas especficas que impiden el
crecimiento de aquellos microorganismos que no nos interesa que crezcan en
ese medio. Un ejemplo es el medio de Thayer - Martin con VCN (vancomicina,
colistina y nistatina) que se utiliza para el aislamiento de gonococos. La
penicilina en una concentracin de 5,50 unidades/ ml inhibe la mayora de las
Gram positivas. Otro ejemplo es el medio de Sabourand - cloranfenicol para el
aislamiento de Cndida albicans.

Diferenciales: son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios
gneros y especies de microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha
aadido un carbohidrato y un indicador y la bacteria que se cultiva es capaz de
fermentar dicho carbohidrato, se produce una acidificacin del medio con el
consiguiente viraje de color del indicador por el cambio de pH.

DE ENRIQUECIMIENTO: son medios lquidos que contienen un agente que

inhibe las especies no deseadas pero que favorece el crecimiento irrestricto del
agente infeccioso.

De Transporte: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin

multiplicacin significativa de los microorganismos desde el momento de su
extraccin hasta su posterior estudio.

Preparacin medios de cultivo

El primer paso para el diagnstico del microorganismo es su aislamiento en medios de
cultivo naturales o artificiales los cuales brindan todos los nutrientes esenciales para su
desarrollo y crecimiento. Adems de estos nutrientes esenciales se le deben dar las
condiciones ambientales lo ms parecidos a su habitad natural> Temperatura, PH,
requerimientos gaseosos, y disponibilidad de agua. Es muy importante evitar el
sobrecalentamiento trmico, ya que el calor excesivo es la causa ms comn para que
los medios de cultivo se daen.
La reparacin del medio de cultivo es el paso ms importante para tener un buen
aislamiento y crecimiento del microorganismo, cualquier error en la preparacin
afectara directamente el aislamiento de los microorganismo, y nos podrn conllevara
un fracaso en el diagnstico de los mismos.
OBJETIVOS

Aprender a preparar correctamente los medios de cultivo

Comprender la importancia del control de la calidad en la preparacin de los
medios de cultivos.

MATERIALES

Agua destilada
Medios de cultivos deshidratados
Caja de Petri
Tubos
Pipetas
Estufa elctrica
Balanzas
Papel kraft
Esptula
Agitadores de vidrios
Erlenmeyer
Algodn y gasa
Cinta de enmascarar
Autoclave

PROCEDIMIENTO

Elija el medio de cultivo a preparar segn indicaciones del instructor

Lea muy la etiqueta del medio del cultivo y saque los clculos de la cantidad de
medio de cultivo que usted necesita teniendo en cuenta el nmero de cajas de
Petri que usted necesita.
Recuerde que cada caja de Petri tiene una capacidad de 15 a 20 cc.

Una vez sacados los clculos pese la cantidad de medio de cultivo y mida el
agua destilada y proceda a pesar el medio de cultivo y adaselo al agua
destilada.
Caliente la estufa, agitando constantemente para disolver el agar y evitar que
este se pegue en el fondo del Erlenmeyer. El agar est completamente disuelto
cuando no se observan grnulos adheridos a la superficie del elernmeyer. Esto
se da cuando el agar comienza a hervir.
Tape el elernmeyer y proceda a esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121
grados y 15 libras de presin (en caso que el medio lo requiera).
Cuando termine el proceso de esterilizacin saque los Erlenmeyer del autoclave
deje enfriar a una temperatura aproximada de 50 grados y procesa a llenar las
cajas de Petri.
Cuando los medios estn fros y solidificados guarde las cajas en la nevera
hasta su utilizacin.
Solucin profundidad
Para realizar este medio de cultivo hay que esterilizar todos los materiales:
Profundidad
Caja de Petri
Muestras de H2O
Pipeta
Incubadora 37/4h
Formulas
1.5ml agua destilada
1.5ml agar plate
1.5ml agar nutritivo
1.5ml
60 ml

Agar plate count

22.5 gr 60 ml
=1.35 gr
1000 ml
Para hacer esta medida se debe pesar la caja de Petri el resultado qued sobre esta
caja la adicionamos 1.35 agar plate Ejemplo: caja de Petri peso 7.8+1.3gr=9.1gr
Agar nutriv

20 gr 60 ml
=1.2 gr
1000 ml
Para hacer esta medida se debe pesar la caja de Petri que tuvo un peso de 43.3gr se
le adiciona 1.2 agar nutritivo y esto da un pedo total de 44.3gr.
Luego de realizar este proceso se pone a calentar en forma homognea para
que se disuelva el agar, despus de estar disuelto sellamos la pipeta lo pasmos

al autoclave lo dejamos a una temperatura de 60c a un tiempo de 40minutos

hbiles.
Despus de haber hecho la esterilizacin se comienza hacer la profundizacin.

ANEXOS