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CODIGO
GRUPO
COLABORATIVO
NOMBRE DEL
TUTOR VIRTUAL
NOMBRE DEL
DIRECTOR DEL
CURSO
1098623437
358010_45
diana.garcia@unad.ed
u.co
Diana Garca
Vargas
1102714097
358010_36
diana.garcia@unad.ed
u.co
Diana Garca
Vargas
Carolina.jaim@unad.e
du.co
Diana Garca
NOMBRE
Liliana
358010_18
CAROLINA JAIME
Vargas
PRESENTADO A:
Ing. Mara Fernanda Domnguez Amorocho
FECHA DE REALIZACION DE LA PRCTICA:
12 y 27 de Abril del 2014
ENTREGA DE INFORME:
BUCARAMANGA
1. OBJETIVOS
1.1 OBJETIVO GENERAL
Identificar diferentes especies de microorganismos como hongos y bacterias mediante toma de
muestras en laboratorio de agua de charco y evaluacin microbiolgica en alimentos.
Realizando procedimientos de siembra, coloracin, tincin e identificacin macroscpica y
microscpica de estos.
1.2 OBJETIVOS ESPECFICOS
de siembra
2. MARCO TEORICO
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Los laboratorios de microbiologa estn regidos por normas de seguridad e higiene que deben
cumplirse a cabalidad para garantizar la proteccin contra infecciones de los estudiantes u otro
personal que labora en estas instalaciones, as como garantizar la calidad de las tcnicas y la
confiabilidad de los resultados.
METODOS DE SIEMBRA
Siembra en Estra Compuesta: Con ste procedimiento se puede conseguir una buena
separacin de las colonias y aislarlas fcilmente. Par ello Se flamea el asa redonda, se toma
la muestra del material a estudiar (agua residual), se coge parte de la muestra para colocarla en
el tubo de ensayo que contiene el agua peptonada Homogenizar, luego se Colca el inoculo en
uno de los extremos de la caja de Petri con el medio de cultivo indicado. Extienda el cultivo
haciendo 4 estras paralelas, sin romper el agar y Terminado la siembra, marcar las cajas en el
borde de la base de la caja y envolverla en papel vinipel para llevarlas a incubar a 37 C.
TCNICAS DE TINCIN
La tincin es una tcnica en la que se utilizan diferentes colorantes, que son captados por las
estructuras de las muestras biolgicas que se observan al microscopio, siendo cada estructura
a fin a un tipo determinado de colorante, por lo que se pigmentan de diferente color y se pueden
diferenciar e identificar.
Tincin simple: Un solo colorante. Se basan en el hecho de que las clulas tienen una
composicin qumica diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma
diferente frente a un colorante.
Tincin de Gram: Fue desarrollada empricamente por Christian Gram en 1884, a pesar del
tiempo transcurrido la tincin apenas se ha modificado y es unos de los primeros pasos que se
realiza para cualquier identificacin bacteriana. Ayuda a determinar rpidamente las
caractersticas morfolgicas, por lo que es til en la indicacin de los antibiticos. Esta tincin
tambin permite establecer si el material enviado al laboratorio para su cultivo posee la calidad
adecuada.
Es la tincin usada ms comnmente en los laboratorios de microbiologa. Constituyen el
criterio bsico para separar los grandes grupos de bacterias (Gram positivas y Gram negativas),
Ahora se sabe que la discrepancia en las propiedades de tincin de estos dos grupos refleja
una diferencia fundamental en la naturaleza qumica de sus paredes celulares y en la
naturaleza de estas. Despus de la fijacin de la muestra en un portaobjetos de cristal (por
calentamiento o tratamiento con alcohol), esta se expone a cristal violeta y despus se agrega
Lugol para formar un complejo con el pigmento principal. Durante la decoloracin con alcohol o
acetona, las bacterias Gram positivas teniendo una gruesa capa de peptidoglicano es capaz de
retener el complejo, mientras que los microorganismos gramnegativos teniendo una capa
delgada de peptidoglicano lo pierden; se aade saponina como contra colorante, que es
retenido por los microorganismos gramnegativos (de ah su color rosado).
MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de
los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado
(es decir, se le aaden organismos) y a continuacin incubado en condiciones que favorezcan
el crecimiento microbiano. El crecimiento de los microorganismos es el cultivo.Un cultivo
axnico o puro contiene un nico tipo de microorganismos. Los medios de cultivo deben
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier
microorganismo contaminante. Los medios de cultivo contienen como mnimo: carbono,
nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas
vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Tambin se aaden colorantes que
actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores
del crecimiento de unas bacterias y no de o tras.
El agar es el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriolgicos. Se disuelve
completamente a 100C y se solidifica al enfriarse a 40C.
De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en:
Definidos: es aqul medio de cultivo del cual se conoce su composicin exacta. Son muy
utilizados en estudios fisiolgicos. Los medios mnimos son medios definidos que
nicamente le proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pe ro
no para desarrollarse ptimamente.
Complejos: es aqul del cual no se conoce la composicin exacta del medio. A menudo, los
medios complejos emplean sangre, leche, extracto de levaduras, extracto de carne u otras
sustancias muy nutritivas pero de las cuales se desconoce la composicin qumica exacta.
Estos medios son muy utilizados para cultivar bacterias desconocidas o bacterias de
requerimientos nutricionales muy complejos.
Medios Selectivos: Son aqullos que poseen uno o ms componentes aadidos, los cuales
inhibirn o prevendrn el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias y/o
promovern el crecimiento de las especies deseadas. Uno puede ajustar las condiciones
fsicas de un medio de cultivo tales como el pH, la temperatura, para hacerlo selectivo para
los organismos de inters.
Medios Diferenciales: Permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias
con base en alguna caracterstica observable en su patrn de crecimiento en el medio, ya
sea por produccin de algn pigmento o por cambios de color en el medio debido a
indicadores de pH, o por halos de degradacin de algn componente en el medio de cultivo.
Medios de Enriquecimiento: Contienen algn componente que permite el crecimiento de
cierto tipo especfico de bacteria, pero no contienen sustancias inhibidoras.
Medios Enriquecidos: Se emplean para cultivar microorganismos que requieren un gran
nmero de factores de crecimiento. Generalmente contienen extractos biolgicos poco
usuales como sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res, yema de huevo, etc.El
procedimiento se hace mediante una siembra de la muestra en caja de Petri por medio del
mtodo ecomtrico y determinar el ndice de crecimiento absoluto (ICA).
"duplicacin local" de la poblacin bacteriana. Las dos clulas hijas creadas tras la divisin no
sobreviven necesariamente. Sin embargo, si el nmero de supervivientes supera la unidad, en
promedio, la poblacin bacteriana experimenta un crecimiento exponencial. La medicin de una
curva del crecimiento exponencial de las bacterias en un cultivo ha sido tradicionalmente una
parte de la formacin de todos los microbilogos. Los procesos fundamentales empleados para
ello son la enumeracin bacteriana (conteo bacteriano) por mtodos directos e individuales
(microscopa, citometra de flujo1), por mtodos directos y masivos (biomasa), por mtodos
indirectos e individuales (conteo de colonias), o por mtodos indirectos y en bloque (nmero
ms probable, turbidez, absorcin de nutrientes). Los modelos permiten conciliar la teora con
las mediciones.
PRUEBAS DE ANTAGONISMO
La composicin de la micro flora y de la micro fauna de un ecosistema est regulada por las
interacciones de los microorganismos de una comunidad entre s y de los mismos con el medio
no bitico de lo cual surge un equilibrio dinmico. Si dos o ms especies que coexisten en un
lugar no se afectan mutuamente la relacin es neutralismo. Cuando algo de esto se modifica,
las especies comienzan a interactuar y las relaciones que se presentan pueden ser:
comensalismo, protocooperacin, simbiosis, amensalismo, predacin, parasitismo. La
evaluacin de estas relaciones in vitro permiten aislar y seleccionar microorganismos con
capacidad de Biocontroladores. En las pruebas de antagonismo se trabaja con la tcnica por
enfriamiento, el Mtodo de Igarashi y tcnica de estras.
En la tcnica por enfriamiento se toma la caja de Petri con el medio de cultivo nutritivo y se
divide en la parte trasera por la mitad con un marcador de vidrio y se seala la mitad de cada
una de las mitades previamente divididas. Se marca cual microorganismo va a inocular en cada
lado y finalmente por puncin sembrar los microorganismos. Incubar a 37C si uso bacterias o a
25C si uso hongos.
En mtodo de Igarashi Se toma una caja de Petri y se divide en 4/4 y sembrar por siembra
masiva con un asa redonda, en un espacio de tres (3) centmetros un microorganismo
seleccionado y finalmente siembre en el centro por puncin.
La tcnica por estras su proceso se hace en caja de Petri en la cual previamente usted
sembr con una estra en el centro una bacteria, sembrar a 0.5 cm, por medio de estras, cuatro
bacterias a evaluar. En el revs de la caja con marcador de vidrio seale que microorganismos
sembr. Incubar a 37C.
3. METODOLOGA
3.1 INSTRUMENTOS
Asa redonda
Cajas de Petri
Mechero
Incubadora
Vinipel
Marcador de vidrio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tubos de ensayo
3.2 REACTIVOS
No
7:
OBSERVACIN
MICROSCPICA
DE
Bacilos
Color:
Morado
Tamao:
Forma:
Color:
Morado
Tamao:
Forma:
Tricoderma
Redondeados u ovales, se observa la formacin de
hifas.
Verde suave
Microscpio 10X,
Microscpio 40X.
Microscpio 100X.
6. CONCLUSIONES
Los medios qumicamente definidos se preparan aadiendo al agua destilada cantidades
precisas de compuestos orgnicos o inorgnicos altamente purificados. Los diferentes medios y
tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiologa pues sirven para identificar
las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son
sensibles esas bacterias.
FALTA..
7. BIBLIOGRAFA