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7)

INDICAR EL TIPO DE TECNOLOGIA QUE SE REQUIERE PARA


SOLUCIONAR EL NUCLEO
La espectrometra de masas atmicas es una herramienta muy verstil y util para identificar los
elementos presentes en una muestra y determinar las concentraciones de cada una de las
materias que la componen. Esta tcnica nos permite determinar prcticamente todos los
elementos del sistema peridico.

Cromatografa de gases-espectrometra de masas (GC-MS)


La espectrometra de masas (MS) es una de las tcnicas analticas ms completas que existen.
Recientemente, esta tcnica se utiliza no slo en investigacin, sino tambin en anlisis de
rutina de los procesos industriales, en control de calidad, etc.
Sus principales cualidades son:
- Capacidad de identificacin de forma prcticamente inequvoca, ya que proporciona un espectro
caracterstico de cada molcula.
- Cuantitativa: permite medir la concentracin de las sustancias.
- Gran sensibilidad: habitualmente se detectan concentraciones del orden de ppm o ppb y en
casos especficos se puede llegar hasta ppt e incluso ppq.
- Universal y especfica.
- Proporciona informacin estructural sobre la molcula analizada.
- Suministra informacin isotpica.
- Es una tcnica rpida: se puede realizar un espectro en dcimas de segundo, por lo que puede
monitorizarse para obtener informacin en tiempo real sobre la composicin de una mezcla de
gases. Dentro del espectrmetro de masas, se procede a la ionizacin de la muestra mediante
diferentes mtodos. El sistema de ionizacin ms frecuente es el de impacto electrnico que
bombardea las molculas con electrones de una cierta energa, capaces de provocar la emisin
estimulada de un electrn de las molculas y as ionizarlas. Adems de molculas ionizadas o
iones moleculares (M+) tambin se forman iones fragmento debido a la descomposicin de los
iones moleculares con exceso de energa. El tipo y proporcin relativa de cada uno de estos
fragmentos es caracterstico de las molculas analizadas y de las condiciones del proceso de
ionizacin. Una vez ionizadas las molculas, se aceleran y se conducen hacia el sistema colector
mediante campos elctricos o magnticos. La velocidad alcanzada por cada in ser
dependiente de su masa. La deteccin consecutiva de los iones, produce el espectro de masas
de la sustancia, que es diferente para cada compuesto qumico y que constituye una
identificacin prcticamente inequvoca del compuesto analizado.
Por lo tanto, la asociacin de las dos tcnicas, GC (Gas Chromatography) y MS (Mass
Spectrometry) da lugar a una tcnica combinada GC-MS que permite la separacin e
identificacin de mezclas complejas. La utilizacin de la cromatografa de gases acoplada a un
espectrmetro de masas requiere sistemas especiales de conexin. En principio, se trata de dos
tcnicas que trabajan en fase gaseosa y necesitan una muy pequea cantidad de muestra para
su anlisis, por lo que son muy compatibles. El nico obstculo serio a la hora de realizar su
acoplamiento es que el efluente que emerge de la columna cromatogrfica sale a presin
atmosfrica y debe introducirse en el interior del espectrmetro de masas que trabaja a alto
vaco.

Actualmente, el acoplamiento directo resulta fcil cuando se utiliza la cromatografa de gases


capilar, que es el caso ms habitual. En resumen, una mezcla de compuestos inyectada en el
cromatgrafo de gases se separa en la columna cromatogrfica obteniendo la elucin sucesiva
de los componentes individuales aislados que pasan inmediatamente al espectrmetro de
masas. Cada uno de estos componentes se registra en forma de pico cromatogrfico y se
identifica mediante su respectivo espectro de masas. En este proceso, el espectrmetro de
masas, adems de proporcionar los espectros, acta como detector cromatogrfico al registrar la
corriente inica total generada en la fuente inica, cuya representacin grfica constituye el
cromatograma o TIC (total ion current). En efecto, la corriente inica generada por todos los
iones da lugar a un pico gaussiano de rea proporcional a la concentracin del compuesto
detectado.

Aplicaciones GC-MS
La cromatografa de gases tiene una amplia aplicacin en la identificacin y cuantificacin de
molculas orgnicas voltiles.
En la industria se enfoca principalmente a evaluar la pureza de reactantes y productos de
reaccin o bien a monitorizar la secuencia de reaccin. En la industria del petrleo juega una
funcin primordial, por medio de la cromatografa se puede analizar constituyentes de las
gasolinas, las mezclas de gases de refinera, gases de combustin, etc.
Esta tcnica es tambin utilizada en estudios de contaminantes en aguas como insecticidas,
pesticidas, etc.
En investigacin, tambin se utiliza para la identificacin de un compuesto, o un fragmento del
mismo mediante su espectro de masas por comparacin con libreras.

3. TECNICAS ACTUALES QUE UTILIZA LA ESPECTROMETRA DE


MASAS COMO PARTE DE ANALISIS
1.

Espectrometra de masas. Desorcin/ionizacin por lser asistida por matriz (MALDI-TOF). PCR-MALDI-TOF. PCRionizacin por electrospray (PCR-ESI-TOF).

La espectrometra de masas ha surgido como una alternativa rpida y eficaz a los mtodos
convencionales para la identificacin de microorganismos. En esta revisin se describe la
tecnologa en sus dos formas ms utilizadas desorcin/ionizacin por lser asistida por matriz
(MALDI-TOF) e ionizacin por electrospray (ESI-TOF) para el anlisis tanto de las protenas como
de los cidos nucleicos microbianos, as como las diferentes plataformas comerciales disponibles.
As mismo, se hace una revisin de los trabajos de mayor inters en microbiologa clnica.
En MALDI y DESI, se usan tcnicas no destructivas con fuentes de ionizacin suaves para
desorber e ionizar las molculas superficiales para el anlisis por EM. Segn Kalorama, una de
las principales fortalezas de MALDI y DESI es que evitan la preparacin tradicional de las
muestras de tejido, un proceso de componente frontal tedioso, que presenta un cuello de botella
importante en la protemica en la que se utiliza el anlisis diferencial para comparar la expresin
y abundancia de las protenas entre las muestras. La digestin proteoltica y otros
procedimientos de preparacin de muestras eliminan significativamente el valor de contexto
analtico relacionado con la distribucin espacial y la concentracin de la protena.

Otras TECNICAS

MS, Espectrometra de masas; BM, Biomarcador; m/z, masa/carga; EI, Ionizacin por impacto de
electrones; CI, Ionizacin qumica; PI, Fotoionizacin; MPI, Ionizacin multifotnica; ESI, Ionizacin
por electrospray; LC, Cromatografa de lquidos (o lquida) HPLC; CE, Electroforesis capilar; LDI,
Ionizacin por desorcin lser; MALDI, Ionizacin por desorcin lser asistida por una matriz;
TOF, Analizador de tiempo de vuelo; MALDI-TOF, Sistema de ionizacin MALDI con un analizador
de tiempo de vuelo; SELDI, Ionizacin por lser inducida en superficie; FAB, Bombardeo con
tomos acelerados; DART, Ionizacin por anlisis directo en tiempo real; IT, Analizador de trampa
de iones; LIT, Analizador de trampa de iones lineal; FT-ICR, Analizador de resonancia inica en
ciclotrn con transformada de Fourier; Q, Analizador de cuadrupolo; MS/MS, Espectrometra de
masas en tndem; CID, Disociacin inducida por colisin; SID, Disociacin inducida en superficie;
ECD, Disociacin por captura de electrones; ETD, Disociacin por transferencia electrnica; QTOF, Analizador de cuadrupo-

8) DESCRIBIR LAS VENTAJAS DESVENTAJAS Y DIFICULTADES

Ventajas y desventajas
La ventaja de disponer de detectores mucho ms universales (por ejemplo, el de ionizacin de
llama) adems, para numerosas aplicaciones, los mtodos son ms simples, ms rpidos y ms
sensibles que los correspondientes a la cromatografa lquida de alta resolucin.
La instrumentacin requerida para cromatografa de gases tambin es mucho ms sencilla y
econmica que la empleada en HPLC. Sin embargo, en cromatografa de gases, la influencia de
la temperatura sobre la distribucin del equilibrio es considerable, a diferencia de la
cromatografa lquida. Por ello, la cromatografa de gases presenta limitaciones en tres casos:
compuestos poco voltiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.,
compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura incluso moderada (determinados
compuestos de inters biolgico), compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que
son en general poco voltiles). Por esta razn, la cromatografa de gases se emplea cuando los
componentes de la mezcla problema son voltiles o semivoltiles y trmicamente estables a
temperaturas de hasta 350-400C. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco
voltiles y/o termolbiles, la tcnica separativa adecuada suele ser la cromatografa lquida de
alta resolucin (HPLC).

Ventajas y desventajas de las fuentes de impacto de electrones. Las fuentes de impacto


de electrones para el uso y produccin de corrientes de iones elevadas, dan buenas
sensibilidades. La extensa fragmentacin y consecuentemente el elevado nmero de picos es
tambin una ventaja debido a que a menudo permite identificaciones inequvocas de los posibles
analitos. Sin embargo, esta fragmentacin puede ser tambin una desventaja cuando da lugar a
la desaparicin del pico del ion molecular por lo que no se puede establecer el peso molecular
del analito. Otra limitacin de la fuente de impacto de electrones es la necesidad de volatilizar la
muestra, lo cual puede dar lugar a una degradacin trmica de algunos analitos antes de tener
lugar la ionizacin. Los efectos de la descomposicin trmica se pueden a veces minimizar
llevando a cabo la volatilizacin en una sonda caliente que se sita cerca de la rendija de
entrada del espectrmetro. A la menor presin del rea de la fuente, la volatilizacin tiene lugar
a baja temperatura y adems, no se dispone de tanto tiempo para que tenga lugar la
descomposicin trmica. Como se ha comentado previamente, las fuentes de impacto de
electrones son slo aplicables para aquellos analitos que tienen pesos moleculares ms
pequeos de aproximadamente 103 daltons.