LABORATORIO DE MONTAJES PARA ANALISIS

PROCEDIMIENTO 1:EXTRACCIN Y SEPARACIN DE PIGMENTOS

FOTOSINTTICOS-CROMATOGRAFA EN PAPEL Y EN COLUMNA
1. OBJETIVOS

Extraer los pigmentos fotosintticos que se encuentran en un vegetal

(espinaca).
Separar los pigmentos utilizando la tcnica de cromatografa en papel
Reconocer los principales pigmentos del vegetal
Separar los pigmentos del vegetal aplicando la cromatografa en columna

2. MATERIALES Y REACTIVOS
Mortero y mango
Embudo

Acetona
Cloroformo

Papel de filtro

Hexano

Erlenmeyer 250 mL
Caja Petri o vidrios de reloj
Pipetas 5 ml
Vasos de precipitado de 250 ml
Tubos de ensayo con rosca
Pipetas de 1 y 5 ml
Jeringa plstica de 5 ml
Gradilla
Agitador de vidrio

Etanol
Etanol
Extracto de espinaca
Sulfato de sodio
Carbonato de calcio
Tijeras
regla
Algodn o lana de vidrio
Pipeta pasteur o similar

3. INTRODUCCION
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin de mezclas, en esta existe un fase
mvil y una fase estacionaria.
Aunque las plantas poseen pigmentos fotosintticos (clorofilas, carotenos, xantofilas,
antocianinas, etc.), en numerosas ocasiones uno de estos pigmentos es tan abundante
que enmascara a los dems y no se pueden observar. Mediante la cromatografa se
permite la separacin de las sustancias de una mezcla (pigmentos fotosintticos de la
espinaca) que tienen una afinidad diferente por el disolvente en que se encuentran.
De tal manera que al introducir una tira de papel en esa mezcla el disolvente arrastra
con distinta velocidad a los pigmentos segn la solubilidad que tengan y los separa,
permitiendo identificarlos perfectamente segn su color.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.

Separacin de pigmentos

Trocear hojas del vegetal sobre un mortero, cubrir con alcohol (etanol) y agregar una
pequea cantidad de carbonato de calcio para evitar la degradacin de los pigmentos.
Triturar hasta homogeneizar, (de esta forma se rompen las clulas y los pigmentos
que se hallaban encerrados en los cloroplastos dentro de ellas pasan al alcohol). Filtrar
el contenido del mortero sobre el matraz y verter el filtrado en la caja Petri, colocar

sobre ella un rectngulo de papel de filtro (15cm ancho x 10cm alto aproximadamente)
doblado por la mitad formando un ngulo de 45 hasta que permanezca en pie sobre la
caja.
Esperar hasta que el alcohol y los pigmentos vayan ascendiendo por el papel
producindose la separacin cromatogrfica.
En la disolucin extrada del vegetal se tendrn tantos pigmentos como bandas
coloreadas aparezcan en la cromatografa.
PIGMENT
O
Clorofila A
Clorofila B
Carotenos
Xantofilas

COLOR
Verde azulado
Verde
amarillento
Naranja
Amarillo

y carotenos.

4.2.

Al observar el papel donde se ha hecho la cromatografa de

la espinaca, se ven cuatro bandas o zonas, que
corresponden a los distintos pigmentos fotosintticos
presentes en las hojas de espinaca. Segn su grado de
solubilidad con alcohol etlico, se reconocen estas bandas y
en este orden:
clorofila b, clorofila a, xantofila

Identificacin del Eluyente ms eficiente

4.2.1. Preparar mezclas de cada uno de los siguientes disolventes en relacin 1:1
Mezcla 1. Etanol cloroformo
Mezcla 2 Hexano- cloroformo
Mezcla 3. Hexano-etanol
Mezcla 4 .Etanol-acetona
Mezcla 5 Acetona-cloroformo
Mezcla 6. Hexano acetona
4.2.2. Preparacin extracto de espinaca
En el mortero y en trozos pequeos, colocar hojas de espinacas y agregar 4 ml de
hexano y 2 ml de etanol, triturar las hojas de espinaca preparadas, se transfiere la
fase orgnica obtenida de la molienda a un tubo de ensayo con tapn, dejar reposar,
hasta observar la fase orgnica separada del extracto de espinaca, luego agregar al
tubo 0,3 g de sulfato de sodio anhidro, tapar y agitar el tubo, luego dejar sedimentar.
4.2.3. Preparacin placas papel de filtro

Recortar 6 rectngulos de papel de filtro de las siguientes dimensiones 5 X 10 cm

aproximadamente, Tomar los rectngulos y ubicarlos en forma vertical, marcar con un
lpiz una lnea a 2 cm de la parte inferior, punto donde sern colocado el extracto de
espinaca, colocar en cada uno de los papeles de filtro y con una pipeta pasteur, dos
gotas pequeas separadas de muestra, y simtricas, luego ubicar cada uno de los
papeles de filtro en vasos de precipitado que contengan cada una de las mezclas de
solventes preparados ,aproximadamente la misma cantidad de mezcla ,y luego se
tapan con vidrio de reloj. Se espera a que las muestras se empiecen a separar, se
observa el recorrido de cada muestra y elige el mejor disolvente, aquel en el que la
muestra tenga ms cantidad de colores coloracin y la muestra haya recorrido la
mayor distancia. seleccionar la mejor separacin, identificar los componentes
separados de acuerdo a su coloracin.
4.3.

Separacin cromatografa en columna

4.3.1. Empaquetamiento de la columna

Introducir en la jeringa de 5 ml un tapn de algodn o lana de vidrio en el fondo ,
agregar alumina Al2O3 o silica gel , que hace la parte de fase estacionaria,
aproximadamente 3 cm de altura de relleno ,luego colocar un tapn de algodn o lana
de vidrio nuevamente que hace el papel de filtro, lavar la columna con etanol,
llenando toda la jeringa y esperar el lavado. Cuando pase todo el etanol por la columna
(jeringa), agregar entre 1 -1,5 ml de extracto de espinaca, y luego agregar el
disolvente o mezcla de disolvente que obtuvo mejores resultados en la anterior
prueba, hasta llenar la jeringa. Recolectar los lquidos separados en la columna en
tubos de ensayos, reporte y analice sus resultados.

PROCEDIMIENTO 2: CENTRIFUGACIN Y FILTRACIN SIMPLE

1.

OBJETIVOS
Determinar el mtodo ms adecuado segn la mezcla a analizar
Identificar la fase ms densa de la fase menos densa
Realizar montaje necesario para realizar la operacin bsica

2. MATERIALES Y REACTIVOS
Balanza Analtica
Vasos de precipitado de 400 ml
Estufa o plato de calentamiento
Probeta de 25 ml
Mortero de porcelana
Agitador Mgnetico
Embudo de Vidrio
Vasos de precipitado de 50 ml
1 aro metlico
1 soporte universal
Papel de filtro
10 tubos de ensayo
1 gradilla
Piseta

Vidrio de reloj
Agua destilada
Yogurth
Cloruro frrico
cido clorhdrico
Cloruro de Bario al 10 %
Hidrxido de sodio 0,1 M
Jugo de mora en cajita
Agua residual de minera
Fertilizante suministrado por el instructor
leche

Esptula
Agitador de vidrio
Erlenmeyer de 250 ml

3. INTRODUCCION
La centrifugacin es una tcnica que permite separar los slidos presentes en una fase
fluida gracias a la accin de la fuerza centrfuga, para lo cual es necesario que el
precipitado sea ms denso que el fluido.

4. PROCEDIMIENTO
4.1 Filtracin de un precipitado de sulfato de bario en un fertilizante
4.1.1 Preparacin de soluciones de trabajo:
Solucin al 10% de cloruro de bario.
Se prepara disolviendo 10gr. De cloruro de bario en 90ml de agua destilada. Se filtra a
travs de papel filtro Whatman 42 o su equivalente.
1. Se pesa 1 gramo de muestra de fertilizante (pasado por malla 40) y agregue en
un vaso de precipitados de
2. 400 ml y se le aaden 200ml de agua desmineralizada y 15ml de cido clorhdrico
se calienta en la plancha de calentamiento hasta alcanzar el punto de ebullicin
durante 10 minutos. Se filtra a travs de un papel filtro banda azul. Se lava con
agua caliente.
3. Se transfiere el filtrado a un vaso de precipitado y se lleva a un punto cercano a la
ebullicin.
4. Se agregan durante la agitacin constante, aproximadamente 15ml de solucin al
10% de cloruro de bario. Se digiere suavemente sobre un plato de calentamiento a
temperatura baja o en bao de agua caliente durante una hora y se retira de la
plancha dejndole reposar cuando toda la muestra haya sedimentado, se filtra1 la
solucin anterior y se lava con 10 proporciones de agua desmineralizada caliente.
Construir dos filtros de papel: un filtro cnico liso y un filtro cnico de pliegues. A
continuacin, cada papel de filtro se coloca en un embudo, apoyado en un aro
metlico, de forma que el vstago del embudo se site en el interior de un vaso de
precipitados de 250 mL. Se filtrar a travs del filtro de pliegues. Se observar la
velocidad a la que se produce la filtracin en cada caso.
4.2 Centrifugacin de diferentes muestras
Rotular los tubos de ensayo con nmeros de 1 a 7 .
Tubo de ensayo 1. Aadir 4 mL de FeCl3 0,1 M y 10 mL de NaOH 0,1 M y agitar.
Tubo de ensayo 2. Anadir 14 mL de yogurth
Tubo de ensayo 3. Aadir 14 mL de agua residual de minera
Tubo de ensayo 4. Aadir 14 mL de jugo de caja mora

Tubo de ensayo 5. Aadir 14 mL de cocacola

Tubo de ensayo 6. 14 ml de metales en solucin (residuos)
Tubo de ensayo 7. Aadir 14 ml de solucin insaturada de cloruro de sodio
4.2.1 Preparacin de soluciones:
Tubo de ensayo # 1:
Pesar 0,08g de FeCl3 e introducirlos a un vaso de precipitado que contenga 5
mL de agua destilada y agitar.
Pesar 0,04g de NaOH e introducirlos al vaso de precipitados que contiene 10
mL de agua destilada y agitar.
Tubo de ensayo # 7
Pesar 0,05g de NaCl e introducirlos al vaso de precipitados que contiene 10 mL
de agua destilada y agitar.

A continuacin, dividir el contenido de los tubos en dos partes. Una de ellas se coloca
en un tubo de centrfuga, mientras que la otra permanece en el tubo de ensayo que se
coloca en la gradilla para que se produzca la sedimentacin.
Los tubos, se colocan en el rotor de la centrfuga en posiciones opuestas. A
continuacin, se cierra la tapa de la centrfuga y se procede a centrifugar durante 1
minuto a 2000 rpm. Una vez realizada la centrifugacin, se procede a comparar la
separacin de las fases slida y lquida en el tubo sometido a centrifugacin y en aquel
en que se ha producido sedimentacin del precipitado.

PROCEDIMIENTO 3: DESTILACION POR ARRASTRE DE VAPOR

1. OBJETIVOS

Conocer las tcnicas de separacin para mezclas liquidas como: destilacin por
arrastre con vapor.

Extraer una esencia pura utilizando la destilacin por arrastre de vapor.

Identificar el montaje a realizar para la destilacin por arrastre de vapor

Obtener aceites esenciales de una muestra natural mediante la separacin de

componentes de alto punto de ebullicin

2. MATERIALES Y REACTIVOS
2 Soportes universales

1 Condensador

Placa de calentamiento
a.balones de fondo redondo de 500mL

Frasco lavador
1 Erlenmeyer de 100 mL
Probeta de 500 mL

Tapones
Mangueras de hule
Agua destilada
Menta, hierbabuena, Eucalipto, hojas de t de
limn, manzanilla pino, canela, clavo etc
Embudo de decantacin

Agitador de vidrio
NaCl (Lab 8 C2A)
Cuerpos de ebullicin
Termmetro

3. INTRODUCCION
La destilacin por arrastre con vapor es una tcnica usada para separar sustancias
orgnicas insolubles en agua y ligeramente voltiles, de otras no voltiles que se
encuentran en la mezcla, como resinas o sales inorgnicas, u otros compuestos
orgnicos no arrastrables.
Aceites esenciales
La destilacin por arrastre con vapor tambin se emplea con frecuencia para separar
aceites esenciales de tejidos vegetales. Los aceites esenciales son mezclas complejas
de hidrocarburos, terpenos, alcoholes, compuestos carbonlicos, aldehdos aromticos y
fenoles y
Se encuentran en hojas, cscaras o semillas de algunas plantas. En el vegetal, los
aceites esenciales estn almacenados en glndulas, conductos, sacos, o simplemente
reservorios dentro del vegetal, por lo que es conveniente desmenuzar el material
Para exponer esos reservorios a la accin del vapor de agua. Los aceites esenciales son
productos naturales aplicados en diferentes industrias, como son la farmacutica,
alimenticia, en perfumera, entre otros usos. Actualmente, se constituyen en productos
alternativos para la elaboracin de biopesticidas o bioherbicidas.

Tipo de montaje I por arrastre

de vapor

4. PROCEDIMIENTO

Tipo de montaje II por arrastre

de vapor

4.1 Una vez realizado el montaje, Rotular los balones con la letra A y B. En el primero
Agregar 300 mL de agua destilada ms los cuerpos de ebullicin con el fin evitar una
ebullicin brusca y para acelerar el proceso, (generador de vapor), Colocar en el
matraz B 50 g de la muestra cortada en trozos pequeos y 200 ml de agua, tenga
precaucin al tapar este matraz para que no se pierda vapor en las conexiones.
4.2 Calentar el matraz A hasta ebullicin con el fin de generar vapor y cuando
empiece a pasar el vapor al matraz B, calentar un poco el B para evitar la
condensacin del vapor.
4.3 Calentar los matraces A y B en forma constante y controlando que la ebullicin no
sea violenta hasta que se hayan recolectado aproximadamente 100 mL o 150 ml del
destilado.
4.4 Detener el calentamiento y dejar enfriar el sistema durante mnimo 10 minutos
antes de desmontarlo.
4.5 De este destilado obtenido, agregar 30 g de sal, agitar y colocar en un embudo de
decantacin, para extraer totalmente el aceite y permitir la separacin completa y la
fase acuosa se desecha (agua) . Por ltimo, recoger el aceite (extracto orgnico) en un
frasco con tapa, rotularlo y guardarlo, cuantificar el aceite medido en mililitros.

PROCEDIMIENTO 4: DESTILACION SIMPLE

1. OBJETIVOS
Separar selectivamente el producto requerido
Identificar el montaje necesario para la realizacin de esta operacin bsica de
laboratorio
2. MATERIALES Y REACTIVOS
Soporte universal

Vinagre de cocina de color claro

Corchos

Acetona (lab 7 A31) (Lab 8 M3A

Mangueras de hule

Agua destilada

Condensador

Vaselina

Placa de calentamiento

Perlas de vidrio

Erlenmeyer 250 mL

Vaso de precipitado de 50 mL

Vaso de precipitado de 250 mL

Baln de fondo plano de 500 mL

2. INTRODUCCION
La destilacin es una tcnica de laboratorio utilizada en la separacin de sustancias.
Consiste en hacer hervir una mezcla, normalmente una disolucin, y condensar
despus, por enfriamiento, los vapores que han producido.
Si se parte de una mezcla de dos sustancias en la que slo una de ellas es voltil, se
pueden separar ambas mediante una destilacin. El componente ms voltil se
recoger por condensacin del vapor y el compuesto no voltil quedar en el matraz
de destilacin. Si ambos componentes de una mezcla son voltiles la destilacin simple
no
lograr su completa destilacin. La mezcla comenzar a hervir a una temperatura
intermedia entre los puntos de ebullicin de los dos componentes, produciendo un
vapor que es ms rico en el componente ms voltil (de menor punto de ebullicin). Si
condensamos este vapor obtendremos un lquido enriquecido notablemente en este
componente, mientras que el lquido que queda en el matraz estar enriquecido en el
componente menos voltil (mayor punto de ebullicin). Por tanto, en una destilacin
simple no conseguimos separar completamente las dos sustancias voltiles. Para
conseguir esta separacin habra que someter a nuevas destilaciones tanto el
destilado como el residuo obtenido. Esto hara el destilado cada vez ms rico en el
componente ms voltil separando ste del menos voltil. Las llamadas columnas de
destilacin efectan este proceso de modo continuo. En una columna de destilacin el
vapor se condensa y se vuelve a destilar muchas veces antes de abandonar la
columna.
Normalmente se recogen pequeas fracciones de producto destilado, llamndose al
proceso destilacin fraccionada.
3. PROCEDIMIENTO DESTILACION SIMPLE
Montaje para la destilacin simple

Observando los montajes en la gua: Identifique las partes del equipo, llene el matraz
de destilacin hasta las 2/3 partes de su capacidad, con el compuesto que va a
destilar5. Agregue las perlas de vidrio, como reguladores de ebullicin , cierre el
sistema, verifique y cercirese que estn correctamente instalados: el termmetro, la
forma de entrada y salida de agua, inicie la circulacin del agua. Identifique el sistema
colector y verifique que est correctamente instalado.
Asegrese que no haya mecheros encendidos cerca de su equipo de destilacin e inicie
el calentamiento.
Siga el curso de la destilacin, registre la temperatura a la cual se inicia el ascenso de
los vapores y comienza la destilacin. Gradu el calentamiento para lograr
aproximadamente una velocidad de 1 ml de destilado por minuto. Recoja dos
fracciones: la primera todo lo que destile hasta 2C por debajo del punto de ebullicin
del primer compuesto que espera destilar, es decir, las impurezas ms voltiles que se
denominan CABEZA de destilacin. Cambie el colector y recoja el compuesto deseado
que destile en mximo un rango de 4C e identifique esta fraccin como CUERPO, lo
que queda en el baln se denomina COLA. Suspenda el calentamiento cuando en el
matraz quede un residuo de aproximadamente la tercera parte de lo cargado
inicialmente.
Precaucin: para evitar inconvenientes durante la prctica, debe estar pendiente del
contenido del matraz y no dejarlo secar.
Cuando el sistema est fro, suspenda la circulacin del agua de refrigeracin. Mida los
volmenes de las fracciones de CABEZA y CUERPO de destilacin y determine las
densidades de cada una.
Discutir y explicar los resultados obtenidos.
PROCEDIMIENTO 5: REFLUJO: EXTRACCION DE CAFEINA
PROCEDIMIENTO:
o Pesar 10 gr de bolsas de t e introducir en el baln de fondo redondo y cubrirlos
con agua destilada.

o
o
o

o
o
o
o

Conectar el equipo de reflujo durante 10 minutos., para obtener una infusin de

t.
Transvasar sin incluir la materia slida, con un tubo de ensayo ejercer presin
sin romper las bolsas.
Realizar la filtracin al vaco en caliente.

Enfriar el filtrado a temperatura ambiente.

Se procede a extraer el alcaloide utilizando un embudo de decantacin,
adicionando 15 mL de diclorometano, agitar vigorosamente durante 1 minuto.
Realizar dos extracciones sucesivas.
Las capas se deben separar despus de varios minutos. Emulsiones podran
estar presentes en la capa orgnica inferior, dicha emulsin puede romperse
adicionando solucin de NaCl saturada o por simple agitacin.
La capa orgnica obtenida se recoger en un erlenmeyer seco que contiene un
agente desecante (sulfato de sodio o magnesio anhidro). El proceso de
extraccin se repite por dos ocasiones ms con 15 mL de diclorometano y las
fases orgnicas son nueva mente recolectadas en el erlenmeyer inicial que
contiene el agente desecante.

o
o
o

La fase orgnica se vuelve transparente, estos extractos deben quedar claros,

sin mostrar signos visibles de la contaminacin del agua.
Separar el alcaloide del diclorometano por medio de un rotavapor.
Tambien se puede evaporar el disolvente por medio de un bao maria.