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PRCTICA
DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE ENZIMAS PROTEOLTICAS
MTODO DE KUNITZ.
Objetivos
Elaborar una curva estndar de actividad enzimtica
Determinar la actividad proteoltica de la bromelana, papana y
otras proteasas.
Introduccin
Las enzimas son macromolculas que sirven de biocatalizadores para las
reacciones que se llevan a cabo dentro de una clula eucariote como
procariote. Las enzimas funcionan disminuyendo la energa de
activacin (G) de una reaccin, de forma que se acelera
sustancialmente la tasa de reaccin. Las enzimas no alteran el balance
energtico de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo
tanto, el equilibrio de la reaccin, pero consiguen acelerar el proceso
incluso millones de veces. Una reaccin que se produce bajo el control
de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el equilibrio
mucho ms deprisa que la correspondiente reaccin no catalizada. Para
llevar a cabo su funcin las enzimas tienen un sitio activo en donde
ingresa el sustrato para formar un complejo enzima sustrato y despus
tener la enzima y el producto.
Las enzimas se pueden clasificar en:
-Liasas
-Oxidoreductasas
-Isomerasas
-Transferasas
-Hidrolasas
-Isomerasas
Las enzimas proteolticas o proteasas son un grupo de enzimas que
descompone en unidades ms pequeas las protenas.
Estas rompen la cadena larga de molculas que forman las protenas
formando fragmentos ms cortos llamados pptidos que son molculas
formadas por aminocidos. Estn presentes en bacterias y plantas pero
son ms abundandantes en los animales. Las enzimas proteolticas o
proteasas
se
denominan
tambin
proteinasas.
Las proteasas se producen de manera natural en el organismo y
constituyen entre el 1% y el 5% del contenido gentico. Estas enzimas
juegan en la descomposicin de largas cadenas proteicas en fragmentos
cortos partiendo el enlace peptdico que une dos aminocidos, as como
tambin determinan el tiempo de vida de otras protenas que juegan un
papel fisiolgico importante como son las hormonas, los anticuerpos u
otras enzimas.
Resultados
Tubo
T1
T2
T3
T4
T5
y
y
y
y
y
1
2
3
4
5
Concentracin de
Tripsina (mg/mL)
0.04
0.08
0.12
0.16
0.20
TI
TII
TIII
TIV
y
y
y
y
I
II
III
IV
Bromelana 1:10
Bromelana 1:20
Papana 1:2
Papana 1:4
A280
Problema
0.397
0.192
0.216
0.293
0.419
Se toma la
absorbanci
a del
testigo 1
como
referencia
para las
otras
absorbacias
.
Testigo
0.089
-0.248
-0.243
-0.247
-0.228
PROBLEMAS
0.975
0.580
0.546
1.387
-0.239
-0.113
0.213
0.552
A280 corregida
0.308
0.103
0.127
0.204
0.33
0.886
0.491
0.457
1.298
0
0
0
0
Linear ()
0
0
0
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
Unidades Tripticas
A280 corregida
0.35
0.3
0.25
0.2
Linear ()
0.15
0.1
0.05
0
0.06
0.08
0.1
0.12
0.14
0.16
0.18
0.2
0.22
Conclusiones
Referencias