Universidad Central del Ecuador

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia

DETERMINACIN DEL VOLUMEN TOTAL SANGUINEO EN EL PERRO

-UTILIZACION DEL AZUL DE EVANS O T-1824

Joselyn Montalvo

Quito, 5 de octubre de 2015

1. Tema: Determinacin del Volumen Total Sanguneo en el perro Utilizando en

Azul de Evans o T-1824
2. Introduccin:
En esta primera prctica nosotros aprendimos a determinar el volumen total
sanguneo y volumen plasmtico.
Para eso primero observamos el procedimiento para la obtencin de la muestra
de sangre de un perro y

tambin aprendimos como inyectar el indicador T-

1824.
Comprendimos la razn por la cual el T-1824 es importante para este
procedimiento gracias a la Curva de Calibracin del mismo.
Recurrimos a la utilizacin de un aparato denominado espectrofotmetro para
realizar la tan importante calibracin.
Con todo este procedimiento nosotros podemos saber la cantidad de sangra
que le corresponde a nuestro perro utilizado como animal experimental.
3. Objetivos:
Generales: en esta prctica se quiere lograr el aprendizaje de cmo
determinar el volumen total sanguneo y volumen plasmtico con la

ayuda de un perro o animal experimental.

Especficos:
o Aprender a utilizar el espectrofotmetro

para

calcular

la

calibracin del T-1824 y as despus obtener la concentracin

o

final que necesitamos para nuestros respectivos clculos.

Conocer el procedimiento correcto que se debe llevar a cabo al
momento de tomar la muestra de sangre del perro y tambin

cuando se le inyecta el Azul de Evans.

Observar lo que sucede con las muestras de sangre tomadas
antes y despus de la colocacin del T-1824.

4. Materiales y Equipos:
a) Un perro de 38 libras o 17 kilos
b) Solucin fresca de Azul de Evans al 0,1%
c) Un frasco de 5ml con anticoagulante
d) 2 frascos de 10ml sin anticoagulante
e) Suero fisiolgico
f)

4 tubos de centrifuga 10ml

g) Centrfuga
h) Micro-centrfuga

i)
j)

Jeringas estriles 5 y 10 ml
Tubo de microhematocrito

k) Espectrofotmetro
l)

Curva de calibracin de Azul de Evans o T-1824

m) Pipeta esmerilada
n) Tubos de ensayo con tapa
5. Marco Terico:
Plasma sanguneo.- representa a la porcin lquida de la sangre.
Volumen total sanguneo.- constituido por el plasma y los elementos
celulares de la sangre, sobre todo los eritrocitos, los cuales llenan el sistema
vascular. (Ganong, Fisiologa Mdica , 2010)
Azul de Evans.- es un colorante o indicador llamado tambin T-1824, ste se
une a las protenas plasmticas.
Espectrofotmetro.- es un instrumento que tiene la capacidad de manejar un
haz de Radiacin Electromagntica (REM), comnmente denominado luz,
separndolo en facilitar la identificacin, calificacin y cuantificacin de su
energa. Su eficiencia, resolucin, sensibilidad y rango espectral, dependern de
las variaciones de diseo y de la seleccin de los componentes pticos que lo
conforman. (Iasi, Espectrofotmetro, 2005)
En la prctica, el cuidado de los animales de laboratorio recae en varias
personas, pero, legalmente y dependiendo de las leyes del pas donde se realice
el estudio, la responsabilidad final es del investigador principal, quien debe
observar ciertas precauciones, tales como:
o Elegir la especie ms apropiada que corresponda a las necesidades del
o

proyecto.
Categorizar las molestias, en este caso sera tomar muestra de sangre y

si fuese necesario colocar un tranquilizante. (Martinez, 2007)

Si el animal experimental no presenta signos agresividad solo es
necesaria la colocacin de un bozal.

6. Procedimiento:
El mtodo a emplearse es el de dilucin de indicadores
a) Registre el peso corporal del perro
b) Tranquilice al animal utilizando cualquier tranquilizante en la dosis
correspondiente (de ser necesario) o utilice un bozal.

c) Obtenga una muestra de 2ml de sangre en un frasco con anticoagulante

y otra de 10ml en un tubo de prueba, mediante puncin de la vena
ceflica derecha.
d) Inyecte en la misma vena ceflica, el Azul de Evans en cantidad conocida
(1ml de solucin al 0,1% por cada 5kg de peso). Para remover los
residuos del colorante de la jeringuilla y la aguja, se lavan inyectando
suero fisiolgico, por dos veces.
e) Despus de transcurridos 10 minutos como mnimo y 30 como mximo
de la inyeccin de Azul de Evans, se toma una segunda muestra de
sangre de 10ml de la vena ceflica izquierda.
f)

Con la muestra que contiene anticoagulante, se efecta la determinacin

del hematocrito (volumen globular), empleando la tcnica ya conocida
para ello.

g) Las muestras de sangre recolectadas en los tubos de prueba, antes y

despus de la inyeccin de Azul de Evans, se centrifugan a 2500 r.p.m
durante 15 minutos. Una muestra de suero sobrenadante se pone en la
cubeta del colormetro y luego se procede a la lectura colorimtrica, para
lo que se emplea un Espectrofotmetro a una longitud de onda de 620
milimicrones o nanmetros.
h) El contenido del primer tubo de prueba que contiene el suero sin
colorante sirve para ajustar el espectrofotmetro, a una transmitancia de
100%
i)

El contenido del segundo y tercer tubo del suero coloreado constituyen

las incgnitas.

j)

La concentracin final del colorante en el plasma, se obtiene llevndose

los

valores

encontrados

la Curva

de

Calibracin

previamente

preparada, extrapolando el valor de la transmitancia de la muestra

problema, a la abscisa, en donde se encuentran varios valores de
concentracin de T-1824.
k) El volumen total plasmtico (VTP) se calcula mediante la siguiente
frmula:
VTP= Volumen Total Plasmtico
CI=Concentracin inicial del colorante (segn los mg. Inyectados)
CF=Concentracin final del colorante (en el plasma mg/ml)

l)

El volumen total sanguneo (VTS) se calcula mediante la siguiente

frmula:
VTS= Volumen Total Sanguneo
Ht= hematocrito

7. Resultados y discusin :
Debido a que nuestro perro no presentaba signos de agresividad solamente
utilizamos un bozal por seguridad mas no se vio necesaria la utilizacin de un
tranquilizante.
Al utilizar el frasco con anticoagulante la sangre no se coagulo debido a que los
anticoagulantes poseen distintos mecanismos como la captura de calcio o
inhibicin de la trombina, esto permite que la sangre permanezca sin formacin
de cogulos.
Mientras que en el primer frasco sin anticoagulante la sangre se separ
formando un coagulo ya que sta no puede permanecer fuera del sistema
vascular, esto se debe a la actuacin de los trombocitos o plaquetas. En este
frasco se puede observar el suero que posee un color amarillento.
Entonces al tomar la segunda muestra del perro, en el cual ya se encontraba el
indicador o T-1824 se puede observar despus de centrifugar que la sangre se
separ en la parte slida correspondiente a los elementos figurados y la parte
lquida que es el suero, pero con una diferencia al anterior frasco, el suero
posea un color azul el cual nos indicar la concentracin final que necesitamos
para nuestro clculo del volumen plasmtico.
8. Grficos y Anexos: dibujos, fotos, etc.

Fuente: Lenin Snchez

Fuente: Lenin Snchez

Fuente: Lenin Snchez

9.

Bibliografa:
Soria J. V., Prcticas de Fisiologa Animal En Vivo, 1996
Ganong Williams, Fisiologa Mdica, 23 Edicin 2010
Martnez Carmen Alicia, El animal como sujeto experimental, Aspectos
Tcnicos y ticos 2007