POST LAB PRCTICA NO.

1
MICROSCOPA
Facultad:
Ingeniera
Curso:
Laboratorio de Microbiologa
Universidad Rafael Landvar

Carrera:
Nombre:
Carn:

Ingeniera Qumica
Prez Gmez, Olga Luca
1191512

Seccin:
03
Hora:
7:30 9:00 PM
Catedrtico
Licda. Blanca Callejas Rivera
Guatemala 28 de agosto del 2015

Fecha:

FUNDAMENTOS TERICOS
MICROSCOPIO PTICO
El microscopio simple utilizado por Anton van Leeuwenhoek en el siglo XVII tena
una sola lente y era similar a una lupa pero l era el mejor tallador de lentes en su
tiempo. Tallaba sus lentes con tanta precisin que una lente sola poda aumentar
un microbio 300x y gracias a sus microscopios simples fue la primera persona que
pudo ver las bacterias. Posteriormente los contemporneos como Kobert Hooke
construyeron microscopios compuestos con mltiples lentes y se le adjudica al
ptico holands Zacharias Janssen la construccin del primer microscopio
compuesto alrededor de 1600 pero estos eran de baja calidad. Ya en 1830 Joseph
Jackson Lister construy un microscopio de una calidad mucho mayor y se
llevaron varias mejoras del instrumento ptico a lo largo del tiempo.
El microscopio ms comn utilizado en microbiologa es el microscopio ptico
compuesto que utiliza la luz visible para su funcionamiento. Este microscopio tiene
una serie de lentes con las cuales es posible examinar muestras muy pequeas
adems de algunos de sus detalles ms finos.
El aumento que se logra en las imgenes se lleva a cabo cuando los rayos
luminosos procedentes de la fuente de luz pasan a travs de un condensador que
tiene lentes que dirigen los rayos de luz a travs de la muestra. Desde aqu los
rayos pasan al interior de la lente objetivo (lente ms prxima a la muestra) y la
imagen de la muestra vuelve a ser ampliada por el ocular.
La resolucin mxima o poder de resolucin de un microscopio ptico compuesto
es de 0,2 micrometros y el aumento mximo es de 2000X.

Las partes del microscopio ocular y sus funciones se muestran en la siguiente

imagen:

Imagen 1. Partes de microscopio ptico y su funcin extrada del libro INTRODUCCIN A LA

MICROBIOLOGA de los autores Tortora, Funke & Case. Editorial Mdica Panamericana S.A.

PREPARACIN DE MUESTRAS PARA MICROSCOPA PTICA

Las muestras se tien para aumentar la diferencia entre los ndices de refraccin
de la muestra y del medio y las clulas no teidas se observan mejor mediante la
microscopa de campo oscuro, contraste de fase o MCID.
Tras la coloracin, cuando los rayos de luz atraviesan dos materiales (la muestra y
el medio que la rodea) con distintos ndices de refraccin, los rayos cambian la
direccin (se refractan) de un trayecto recto mediante la deflexin o cambio de un
ngulo en el lmite entre los materiales y aumentan el contraste entre la muestra y
el medio. Cuando los rayos de luz se alejan de la muestra, se dispersan y entran
en las lentes oculares.

Tincin significa coloracin de un microorganismo con un colorante para que

algunas estructuras sean ms visibles. Para la fijacin se utiliza calor o alcohol con
el fin de destruir a los microorganismos y adherirlos a un portaobjetos.
En la prctica se emple una tincin simple la cual es una solucin acuosa o
alcohlica de un solo colorante bsico y se utiliza para poder visualizar las formas
y las disposiciones celulares. [1]

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:

Aprender a identificar las partes del microscopio y el uso adecuado del

mismo.

OBJETIVOS ESPECFICOS:

Realizar una preparacin hmeda para las muestras a analizar y determinar

sus ventajas.
Analizar las muestras en el microscopio y establecer las diferencias que
pueden apreciarse en cada anlisis.

METODOLOGA
Nombre de Instrumento

Bistur[1]
Hisopo[2]

Instrumentos empleados durante la prctica

Imagen
Funcin
Instrumento empleado para obtener la muestra de clulas
vegetales presentes en la cebolla.
Empleado para obtener una muestra de las clulas
presentes en la cavidad bucal.

Porta-objetos [3]

Soporte utilizado para contener las muestras preparadas.

Cubre objetos[4]

Cubrir las muestras a analizar una vez que han sido

preparadas.

Microscopio[5]

Instrumento empleado para analizar cada una de las

muestras, el mismo se encontraba equipado con un ocular
10X y el objetivo empleado fue 4X.

Tabla 1. Instrumentos utilizados durante la realizacin de la prctica Microscopa

MUESTRAS ANALIZADAS Y REACTIVOS EMPLEADOS

MUESTRAS ANALIZADAS

Clulas vegetales obtenidas de una cebolla.

Clulas animales obtenidas de la cavidad bucal del analista.

REACTIVOS EMPLEADOS

1 gota de solucin Lugol

1 gota de solucin Azul de Metileno

DIAGRAMA DE FLUJO

Diagrama 1. Preparacin de microscopio

Diagrama 2. Preparacin de muestra de

cebolla para anlisis de clulas vegetales

Diagrama 3. Preparacin de muestra de

cebolla para anlisis de clulas vegetales

PROCEDIMIENTO
Para analizar ambas muestras se llev a cabo una preparacin hmeda
para cada una de ellas. La forma en la que se llev a cabo dicha preparacin fue
obtener una muestra de las clulas colocadas en un porta-objetos a la que
posteriormente se agreg solucin de Lugol para la cebolla y azul de metileno
para las clulas de la muscosa bucal. Posteriormente se coloc encima de la
muestra preparada un cubre objetos y se ajust con las pinzas ubicadas en la
platina. Una vez realizado dicho procedimiento, se realizaron los ajustes
correspondientes en el microscopio que consistieron en posicionar la platina en su
punto ms alto por medio del tornillo carro mvil, ajustar el condensador, encender
la fuente de luz y enfocar con el ocular 10X y el objetivo 4X.
Una vez realizados los ajustes necesarios se procedi a anotar las observaciones.

RESULTADOS
Procedimiento
Preparacin hmeda de muestras

Enfoque de muestras (4X)

Observacin
Muestra de clulas vegetales: la muestra de
cebolla adquiri una coloracin amarilla.
Muestra de clulas animales: solamente se
pudo observar a simple vista la predominancia
del reactivo de Azul de metileno.
La imagen fotografiada, puede observarse en
los anexos y corresponde a la imagen no. 1
Muestra de clulas vegetales: tras realizar el
enfoque y los ajustes necesarios, se pudo
observar que las clulas se encontraban en una
disposicin ordenada y las mismas posean una
forma geomtrica similar al de un hexgono. Se
pudo identificar la membrana y el citoplasma.
Muestra de clulas animales: tras realizar el
enfoque y los ajustes necesarios, se pudo
observar que las clulas tenan una forma
circular irregular y eran transparentes. Se logr
identificar la membrana celular y algunas

burbujas de aire en el medio.

La imagen fotografiada, puede observarse en
los anexos y corresponde a la imagen no. 2
Tabla 2. Observaciones realizadas durante la prctica

DISCUSIN DE RESULTADOS
La prctica No 1 llamada Microscopa fue realizada el da viernes 21 de
agosto por los estudiantes de la seccin 03 en el laboratorio de Microbiologa y
tuvo como principal objetivo aprender a utilizar de forma adecuada el microscopio
identificando cada una de sus partes, funcin y correcta manipulacin.
Para cumplir con dicho objetivo se analizaron dos muestras, una corresponda a
clulas vegetales obtenidas de una cebolla con un bistur y la otra corresponda a
clulas animales obtenidas de la mucosa bucal por medio del frote con un hisopo.
Antes de realizar la preparacin de las muestras se limpi adecuadamente el
portaobjetos para eliminar los residuos de grasa en la piel remanentes en su
superficie y as evitar que este fuera un interferente en el anlisis microscpico.
Para poder realizar el anlisis de cada muestra se llev a cabo una preparacin
hmeda empleando una solucin de Lugol para las clulas vegetales y una
solucin de Azul de metileno para las clulas animales. Dichos reactivos
coloreados (colorantes vitales) se emplearon con el fin de aumentar el contraste y
permitir una mejor observacin.
El azul de metileno tie grnulos citoplasmticos y el ncleo mientras que el lugol
tie inclusiones de reserva (el almidn azul, el paramilo rojo y el glicgeno pardo),
flagelos y cilios (castao rojizo) citoplasma, ncleo, trofozoitos y quistes.
Los colorantes vitales tienen la ventaja que permiten observar movilidad en los
organismos, algunos de sus organelos o inclusiones teidas sin daarlas; dichas
soluciones se preparan en soluciones acuosas o alcohlicas muy diluidas [2].
Estos colorantes se aplicaron directamente en la muestra contenida en el
portaobjetos y posteriormente se cubrieron con el cubreobjetos.
Para fines prcticos se realizaron los ajustes necesarios en el microscopio, se
sujet el portaobjetos con las pinzas de la platina, se utiliz el ocular 10X y el
objetivo 4X los cuales permitieron que la imagen se ampliara 40 veces. En esta
prctica no se emplearon los otros objetivos ya que al aumentar la imagen el
campo visual disminuye y la finalidad era aprender a enfocar adecuadamente los
puntos de inters.

Al analizar la muestra vegetal se pudo observar la forma de las clulas, las cuales
tenan una forma rectangular y se encontraban ordenadas de forma similar a una
pared de ladrillos. Como se puede observar en la imagen no. 1 ubicada en el
apndice, la membrana se hace evidente ya que se pueden identificar las celdas
que conforman la estructura y el citoplasma se encuentra en el interior de la
misma.
En cambio, en el anlisis de clula animal se pudo identificar que eran clulas
epiteliales ya que las mismas suelen estar ordenadas en cilindros o hileras
paralelas, carecen de orden, varan en tamao y forma. [3] Las partes que
lograron identificarse fue la membrana celular ya que es la que se encuentra en el
exterior de la misma. Cabe mencionar que en la imagen no. 2 presente en el
apndice no se puede apreciar claramente debido a la resolucin de la imagen.
Tras realizar el anlisis se puede inferir que los seres vivos estn conformados por
clulas segn sea su naturaleza (animal o vegetal).

CONCLUSIONES
1. Es indispensable conocer cada una de las partes del microscopio, su uso,
funcin y correcta manipulacin para llevar a cabo los anlisis de forma
adecuada.
2. Las ventajas del montaje o preparacin hmeda en los procesos de
microscopa es que al trabajar con material vivo, las clulas se conservan
por ms tiempo, se crea un contraste con las mismas al trabajar con
sustancias coloreadas y esto permite que sea ms fcil su identificacin y
observacin.
3. Se comprob que los seres vivos se encuentran formados por clulas
segn sea su naturaleza animal o vegetal.
4. Las clulas vegetales presentan una disposicin ordenada y poseen forma
rectangular a diferencia de las clulas animales que presentan una forma
circular pero carecen de orden.

REFERENCIAS BIBLIOGFICAS
CONSULTAS DE TEXTO
[1] Gerard J. Tortora, Berdell Funke & Chrsitine Case. (2007) INTRODUCCIN A
LA MICROBIOLOGA. (9 Ed) Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana
[2] Anon, (2015). PREPARACIONES MICROBIOLGICAS [En Lnea] Disponible
en:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Practica_preparaciones_microbiologica
s_18855.pdf [Fecha de consulta: 25 Aug. 2015]
[3] Anon, (2015). CLULAS EPITELIALES [En Lnea] Disponible en:
http://www.ecured.cu/index.php/C%C3%A9lulas_epiteliales [Fecha de consulta: 25
Aug. 2015
CONSULTAS EN LNEA DE IMGENES
[1] (2015) Galera DIBUJOS ANIMADOS DE BISTUR QUIRRGICO. [En Red]
Disponible
en:
http://st.depositphotos.com/1742172/1990/v/450/depositphotos_19902427Surgical-scalpel-cartoon.jpg
[2] (2015) Galera PRODUCTOS DE MUESTREO. [En Red] Disponible en:
http://img.medicalexpo.es/images_me/photo-m/hisopo-colposcopia-algodon70772-152845.jpg
[3] (2015) Galera ACTIVIDAD DE LABORATORIO: OBSERVACIN DE CLULAS
ANIMALES
Y
VEGETALES.
[En
Red]
Disponible
en:
http://lanika.wikispaces.com/file/view/montar.jpg
[4] (2015) Galera CULTIVO Y OBSERVACIN DE PROTOZOOS. [En Red]
Disponible
en:
http://www.mclibre.org/otros/daniel_tomas/laboratorio/Cultivo_protozoos/image002.
jpg
[5] (2015) Galera MICROSCOPIO. [En Red] Disponible en: https://www.pceinstruments.com/espanol/slot/4/artimg/large/herter-microscopio-binocular-1820led-402885_697287.jpg

APNDICE

Imagen 1. Clulas vegetales obtenidas de una muestra de cebolla

Imagen 2. Clulas animales obtenidas del raspado de mejilla con hisopo.